P504s、CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌患者中的表達及意義

陳嗣雙 黃志芳 侯斐 胡嘉瑜

[摘要] 目的 研究前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織中α 甲?；o酶A 消旋酶（α-methylacyl-CoA racemase，P504s）、高分子量角蛋白（high molecular weight keratin，CK-h）、p63、細胞角蛋白5/6（CK5/6）表達及意義。方法 選取金華市人民醫(yī)院2018 年6 月至2022 年1 月171 例前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織作為研究對象并進行回顧性分析，免疫組化法進行檢測癌組織及癌旁組織標本中P504s、CK-h、p63、CK5/6 陽性表達率，分析P504s、CK-h、p63、CK5/6 與臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果 癌組織中P504s 陽性率高于癌旁組織，CK-h、p63、CK5/6 陽性率低于癌旁組織（P<0.05）。P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達與病理分級、分化程度、Gleason 評分具有一定相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論 P504s 在前列腺癌組織中表達升高，CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌組織中表達降低，且P504s 表達水平隨著病理分級、分化程度、Gleason 評分逐漸增強，表明P504s、CK-h、p63、CK5/6 聯(lián)合檢測在前列腺癌的診斷中具有較高價值。

[關(guān)鍵詞] α 甲酰基輔酶A 消旋酶；高分子量角蛋白；p63；細胞角蛋白5/6；前列腺癌

[中圖分類號] R737? ?[文獻標識碼] A? ?[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.12.010

前列腺癌在男性惡性腫瘤中發(fā)病較高，超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢技術(shù)臨床上應(yīng)用較為廣泛，使前列腺癌的檢出率明顯提高[1-3]。病理學(xué)診斷是對腺泡結(jié)構(gòu)及形態(tài)觀察，是否出現(xiàn)紊亂、異形及浸潤的生長方式[4]。光鏡下前列腺癌組織形態(tài)、良性病變較為相似，鑒別較為困難，誤診、漏診的發(fā)生率較高，而免疫組化技術(shù)有利于提高診斷準確率[5]。P504s 在支鏈脂肪酸β 氧化過程中發(fā)揮較為重要的作用[6]。

p63 屬于特異性標記組織的基底細胞。CK-h 屬于高分子量角蛋白，存在于前列腺基底細胞中，有助于前列腺癌的診斷[7]。CK5/6 屬于另一種基底細胞的標志物，在前列腺病變組織中表達較低[8]。既往雖有研究顯示P504s、CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌中的表達，但關(guān)于上述各指標對生存情況的影響報道較少。本研究回顧性分析P504s、CK-h、p63、CK5/6在前列腺癌組織中的表達，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取金華市人民醫(yī)院2018 年6 月至2022 年1月171 例前列腺癌患者超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢組織作為研究對象，均為男性，年齡52～78 歲，平均（69.67±8.34）歲；納入標準：符合《歐洲泌尿外科會議前列腺癌診斷治療指南》[9]中相關(guān)標準；①均行超聲引導(dǎo)前列腺穿刺活檢；②前列腺特異性抗原正常者；③首次發(fā)現(xiàn)；④臨床病例資料完整。排除標準：①其他腫瘤性疾病；②心、肝、肺等出現(xiàn)病變者；③精神障礙者；④嚴重出血傾向；⑤直腸、肛周病變；⑥痔瘡者；⑦嚴重免疫系統(tǒng)疾??；⑧全身嚴重感染患者。

1.2 方法

1.2.1 標本保存及制備 實驗所取的組織標本均為患者腫瘤組織和癌旁組織中的基底細胞，標本保存于–70℃環(huán)境中。10%甲醛固定標本，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度約3μm，完成后對標本進行HE 染色及免疫組化，顯微鏡進行觀察。

1.2.2 P504s、CK-h、p63、CK5/6 檢測 應(yīng)用免疫組化法進行檢測癌組織及癌旁組織中P504s、CK-h、p63、CK5/6，將制備好的石蠟切片進行脫蠟、水化，自來水進行沖洗，依照各指標試劑盒進行抗原修復(fù)，去除緩沖液（phosphate buffer solution，PBS），滴加過氧化物酶阻斷試劑，孵育10min，PBS 沖洗3 次；滴加動物非免疫血清，孵育10min；滴加第一抗體，孵育60min，PBS 沖洗3 次；滴加第二抗體，孵育10min，PBS 沖洗3 次；進行鏈霉菌抗生素蛋白-過氧化物酶試劑滴加，孵育10min，PBS 沖洗3 次，滴加DAB 顯色試劑顯色；沖洗，蘇木精復(fù)染，PBS 返藍。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，孵育均在室溫下進行。

1.2.3 結(jié)果判定 P504s、CK-h、p63、CK5/6 免疫組化切片均由2 名以上病理科醫(yī)生進行獨立評估。細胞質(zhì)、細胞核發(fā)生黃至棕褐色為陽性。觀察整個視野，然后在腫瘤細胞及間質(zhì)進行5 個高倍視野（×200）隨機選取，染色強度：0 分：無著色，1 分：淡黃色，2 分：棕黃色，3 分：棕褐色；陽性細胞：1 分：陽性細胞≤10%，2 分：10%～50%，3 分：>50%。兩項分值相乘，≥3 分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理。計量資料經(jīng)Levene 法檢測具備方差齊性，Shapirowilk檢驗符合正態(tài)分布，計量資料以均數(shù)±標準差（x s ）表示，組間比較進行獨立樣本t 檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較進行χ2 檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織、癌旁組織P504s、CK-h、p63、CK5/6陽性表達率比較

癌組織中P504s 陽性率高于癌旁組織，CK-h、p63、CK5/6 陽性率低于癌旁組織（P<0.05），見表1。

2.2 P504s、CK-h、p63、CK5/6 與前列腺癌臨床特征的相關(guān)性

P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達水平與病理分級、分化程度、Gleason 評分具有一定相關(guān)性（P<0.05），見表2～5。

3 討論

前列腺癌發(fā)病較為隱匿、發(fā)展慢，早期可能無明顯癥狀，難以與前列腺增生等疾病進行準確鑒別，確診時可能已發(fā)展為中晚期，因此，深入研究前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中關(guān)鍵的分子標志，對于尋找新的診斷治療靶點，改善患者預(yù)后具有重要意義[10-12]。對于前列腺癌的診斷多采用病理診斷進行，以腺體結(jié)構(gòu)異常、細胞核間變以及侵襲生長為原則，但由于前列腺組織較為復(fù)雜，部分良、惡性病變組織之間差異較微小，光鏡下難以辨別[13]。穿刺活檢已成為臨床診斷前列腺病變的重要手段，由于穿刺活檢所取組織較小，前列腺癌組織結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，臨床相關(guān)診斷依據(jù)較少，因此，前列腺穿刺活檢標本在前列腺的診斷中較為困難，需與前列腺上皮瘤細胞病變、前列腺基底細胞增生等病變進行鑒別。因此，需借助于免疫組化染色來幫助診斷準確性提高[14]。

P504s 基因參與脂肪酸及相關(guān)衍生物的β 氧化。有研究指出[15]，P504s 表達與前列腺癌關(guān)系密切。另有研究指出[16]，P504s 屬于前列腺癌陽性標志物，敏感度較高，在泌尿、生殖等系統(tǒng)相關(guān)腫瘤中均具有陽性表達，在臨床病理診斷中發(fā)揮作用。本研究結(jié)果顯示，與癌旁組織比較，前列腺癌組織中P504s陽性率較高，P504s 與病理分級、Gleason 評分、分化程度呈正相關(guān)關(guān)系，考慮可能是由于前列腺癌的發(fā)病與患者細胞質(zhì)中支鏈脂肪酸長期處于高水平具有一定的關(guān)系。植烷酸屬于常見支鏈脂肪酸，降植烷酸的植烷酸經(jīng)氧化后分解的主要產(chǎn)物，可激活過氧化物酶體增殖，而P504s 的主要作用底物為植烷酸，因此，免疫組化P504s 與前列腺癌診斷具有較深的聯(lián)系[17]。CK-h 作為基底細胞的重要標志物，若基底細胞未被侵犯，其表達較高，對于前列腺癌的診斷、分期起到輔助作用。多數(shù)前列腺癌組織的特點為基底細胞缺失，因此，CK-h 在前列腺癌組織中表達較少，甚至不表達。CK-h 也可特異性識別前列腺組織中的基底細胞，通過不同前列腺組織中的基底細胞是否發(fā)生陽性著色及特點進行顯示癌組織及非癌組織中基底細胞的存在情況，在疾病的診斷、鑒別中有著重要作用[18]。

p63 屬于p53 抑癌基因家族成員，主要在基底細胞核中進行表達，有學(xué)者研究指出，p63 在癌細胞核中均呈陰性表達，前列腺增生表達為陽性，本研究中，前列腺癌組織中p63 陽性率低于癌旁組織，其結(jié)果與上述學(xué)者研究結(jié)果一致[19]。p63 主要是出發(fā)胚胎上皮組織層化、激活靶基因，進行轉(zhuǎn)錄，進而調(diào)控細胞周期，同時誘導(dǎo)細胞凋亡。本研究中，p63 在癌旁組織中也可少量表達為陰性，說明在少數(shù)癌旁組織或前列腺良性疾病中也可能會出現(xiàn)上皮基底細胞不連續(xù)的情況，因此，p63 陰性不可單獨作為診斷前列腺癌的指標。細胞角蛋白CK5/6 屬于目前免疫組化染色進行檢測中較為常用的基底細胞標志物，正常組織中多為陽性表達，腫瘤組織中多表達為陰性[20]。本研究中，前列腺癌組織中CK5/6 陽性率低于癌旁組織，其結(jié)果與本研究結(jié)果一致。本研究證實，癌旁組織中，P504s 多為陽性表達，CK-h、p63、CK5/6 多為陰性表達，提示前列腺癌組織中存在角蛋白缺失的情況，CK-h、p63、CK5/6 表達在前列腺癌組織存在缺失，基底細胞幾乎全部消失，CK-h、p63、CK5/6 分別對基底細胞的不同部分進行標記，因此，聯(lián)合檢測P504s、CK-h、p63、CK5/6 表達對于前列腺癌的診斷準確性有助于提升，降低誤診的發(fā)生情況[21]。

綜上所述，P504s 在前列腺癌中表達上調(diào)，CK-h、p63、CK5/6 在前列腺癌中表達下調(diào)，且與病理分級、分化程度顯著相關(guān)，聯(lián)合檢測有助于臨床評估病情、預(yù)測生存狀況提供參考依據(jù)。

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（收稿日期：2022–09–17）

（修回日期：2023–01–06）