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    藏藥“解吉”的生藥學(xué)研究進(jìn)展

    2023-06-27 00:19:08尕讓甲趙志禮倪梁紅銀巴
    關(guān)鍵詞:基原秦艽麻花

    尕讓甲 趙志禮 倪梁紅 銀巴

    【摘 要】

    藏醫(yī)藥學(xué)具有悠久的發(fā)展歷史及豐富的科學(xué)與藏族文化內(nèi)涵。但由于種種原因,藏藥品種整理及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究等工作尚不能適應(yīng)藏醫(yī)藥學(xué)發(fā)展的需要。文章對傳統(tǒng)藏藥“解吉”進(jìn)行本草學(xué)考證,梳理其主流品種,并就藥材品質(zhì)評價及DNA分子鑒定等方面的研究工作進(jìn)展進(jìn)行綜述,以期為該藥材的品種鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定與完善等深入研究提供參考資料。

    【關(guān)鍵詞】

    藏藥;解吉;本草學(xué)考證;品質(zhì)評價;DNA條形碼

    【中圖分類號】R281?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517(2023)07-0052-06

    Pharmacognostical Research Progress on Tibetan Herb Jie-Ji

    Kelsang Gyab Ala1, 2 ZHAO Zhili1* NI Lianghong1 Yumpa2

    1. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China;

    2. Men Tsee Khang, Tibetan Medical Hospital of Tibet Autonomous Region, Lhasa 850000, China

    Abstract:

    Jie-Ji, a common Tibetan herb, is recorded in ‘The Four Medical Tantras (the 8th century AD) and traditionally used for the treatment of Chi-Ba disease. Here, a textual research on the herb was conducted. In addition, we summarized the research progress on it in the quality evaluation and species identification using DNA barcoding.

    Keywords:

    Tibetan Herb; Jie-Ji; Herbal Textual Research; Quality Evaluation; DNA Barcoding

    “解吉”(),常用藏藥之一,公元8世紀(jì)的藏醫(yī)藥典籍《四部醫(yī)典》中就有記載,可清腑熱,治療“赤巴病”[1]。品種及植物來源多樣,傳統(tǒng)上有“解吉那?!保ň呱钏{(lán)色花的)與“解吉嘎?!保ň唿S白色花的)兩個品種之分[2]。另據(jù)文獻(xiàn)[3-6]報道,其來源涉及龍膽科Gentianaceae龍膽屬Gentiana秦艽組(Sect. Cruciata)多種植物。花、根或全草入藥,可治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及黃疸型肝炎等癥。本文就傳統(tǒng)藏藥“解吉”的本草學(xué)考證、藥材的品質(zhì)評價及物種DNA分子鑒定等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,以期為該藥材的品種鑒定、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定與完善等深入研究提供參考資料。

    1 本草學(xué)考證與基原植物

    1.1 古代文獻(xiàn)中“解吉”的形態(tài)描述 公元17世紀(jì)中期,藏醫(yī)藥學(xué)家第司·桑杰嘉措留存的藏藥彩繪圖譜80幅唐卡中,第27幅收載了“解吉”(圖1),從左往右的第2圖和第3圖分別是“解吉嘎?!迸c“解吉那?!薄D中可清晰看出藏藥“解吉”基原植物具有秦艽組植物的特征:葉對生,基生葉蓮座狀;主根粗大;且具兩類花序(花密集呈頭狀,或疏松排列),花色兩種(黃白色或深藍(lán)色)等。公元18世紀(jì)的《晶珠本草》中對“解吉”的記載:“本品分為白、黑兩種?!秷D鑒》中說:‘白花秦艽生長在草山坡。葉厚,長,青色,光滑;莖紅色;花白色;種子黑色狀如鐵砂……黑花秦艽……形狀如白花秦艽,而葉略大,花白色光澤不顯,葉莖平鋪地面,生長在平灘?!保?]以上文獻(xiàn)所描述的特征,用現(xiàn)代植物學(xué)術(shù)語表述:草本;主根粗大;具發(fā)達(dá)的蓮座狀葉叢,葉脈數(shù)條,莖生葉對生;合瓣花,花黃白色或深藍(lán)色;種子多數(shù),細(xì)小。植物多生長在草坡及草灘。這些特征與龍膽科龍膽屬秦艽組植物十分吻合。

    1.2 現(xiàn)代文獻(xiàn)中“解吉”基原植物的分類學(xué)名稱 1991年出版的《藏藥志》[4]記載,“解吉嘎?!睘槁榛ㄜ碐entiana straminea Maxim.、西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.、黃管秦艽G. officinalis H. Smith;“解吉那保”為小秦艽G. dahurica Fisch.、粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、長梗秦艽G. waltonii Burk.和全萼秦艽G. lhassica Burk.,也提到了青海地區(qū)的一種代用品,即龍膽屬多枝組的六葉龍膽G. hexaphylla Maxim. ex Kusnez.。1996年出版的《中國藏藥》[7]中,“解吉嘎保”為麻花艽G. straminea Maxim.和粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.;“解吉那?!睘榇笕~秦艽G. macrophylla Pall.和小秦艽G. dahurica Fisch.。實際上青藏高原不產(chǎn)大葉秦艽此植物;另外,粗莖秦艽的花為藍(lán)紫色,將其歸入“解吉嘎?!彼撇煌桩?dāng)。2010年趙志禮等[6]基于民族植物學(xué)考察及標(biāo)本分類學(xué)鑒定,梳理了“解吉”的10種基原植物,均隸屬于龍膽科龍膽屬秦艽組(圖2)。2018年嘎務(wù)編著的《藏藥晶鏡本草》第二版[3]中,“解吉嘎保”為麻花艽G. straminea Maxim.和粗壯秦艽G. robusta King ex Hook. f.;“解吉那保”為粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、西藏秦艽G. tibrtica King ex Hook. f.及長梗秦艽G. waltonii Burk.。“解吉那?!敝?,粗莖秦艽與長梗秦艽均開藍(lán)色花,而西藏秦艽開黃白色花,將其歸為一類,與傳統(tǒng)品種的界定不一致。

    由此可見,“解吉”基原植物的主流品種,主要來源于龍膽科龍膽屬秦艽組多種植物。同時,曾出現(xiàn)一些代用品,涉及龍膽科龍膽屬不同組的植物;亦出現(xiàn)物種鑒定不準(zhǔn)確的問題。

    2 生藥學(xué)鑒定與品質(zhì)評價

    《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥(第一冊)[8]收錄了“秦艽花”(解吉嘎保),基原為麻花艽G. straminea Maxim.;并附有藥材性狀及顯微鑒定特征等。顧成玉等[9]應(yīng)用形態(tài)學(xué)、薄層色譜法及高效液相色譜法對藏藥“解吉那?!钡膬煞N基原植物全萼秦艽G. lhassica Burk.與長梗秦艽G. waltonii Burk.進(jìn)行性狀觀察、定性鑒別及龍膽苦苷含量測定,為品種鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。趙志禮等[10]對“解吉那?!被参镏还芑ㄇ剀碐. siphonantha Maxim. ex Kusnez.進(jìn)行了藥材性狀、組織學(xué)特征觀察及薄層色譜鑒定。

    王妍妍等[11]應(yīng)用HPLC技術(shù),構(gòu)建了“解吉那?!被参镏淮智o秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.藥材的化學(xué)指紋譜,為該藥材質(zhì)量評價與控制提供方法。李清峰等[12]建立了四川若爾蓋產(chǎn)道地藏藥材“解吉嘎?!被宦榛ㄜ碐. straminea Maxim.高效液相色譜指紋圖譜(圖3),反映了該地區(qū)產(chǎn)麻花艽的化學(xué)背景特征,可為道地藥材評價及相關(guān)中藏藥品種鑒定提供基礎(chǔ)資料。Wu等[13]應(yīng)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),鑒定麻花艽G. straminea Maxim.及其混淆品,結(jié)果顯示,7-O-(4″-O-glucosyl) coumaroyl-loganic acid和7-O-coumaroyl-loganic acid可有望成為麻花艽的化學(xué)成分標(biāo)記。陳靜[14]應(yīng)用HPLC法測定藏藥“解吉嘎保”(白花秦艽,基原:麻花艽G. straminea Maxim.)不同部位中龍膽苦苷的含量,結(jié)果表明,花中龍膽苦苷的含量明顯高于莖,與藏醫(yī)臨床用藥部位選擇相符,所建立的測定方法可用于藏藥白花秦艽的質(zhì)量控制。陳靜等[15]采用HPLC法測定藏藥“解吉那?!保ɑ捍智o秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.)不同部位龍膽苦苷的含量,結(jié)果顯示,不同部位龍膽苦苷的含量差異顯著,花中的含量遠(yuǎn)高于根中的含量。所建立的測定方法可用于藏藥“解吉那保”的藥用部位篩選與藥材質(zhì)量控制。但文中實驗樣品采集地點拉薩不產(chǎn)此植物,其植物來源值得商榷。

    徐燕等[16]基于UPLC-ESI-HRMSn法評價遠(yuǎn)紅外干燥、真空干燥、冷凍干燥、陰干、烘干、“發(fā)汗”干燥對粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.品質(zhì)的影響。結(jié)果顯示,不同干燥方法樣品的獐牙菜苦苷差異不顯著,龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苷、木犀草素、異牡荊素、芹菜素和山柰酚差異明顯?!鞍l(fā)汗”干燥具有與冷凍干燥相似的品質(zhì),且品質(zhì)最好,其次是烘干干燥和遠(yuǎn)紅外干燥,陰干干燥的樣品品質(zhì)最差。李源等[17]應(yīng)用UPLC-Q-Orbitrap HRMS法同時測定粗莖秦艽根炮制前后龍膽苦苷、馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、木犀草素、異牡荊素、芹菜素及山柰酚8種化學(xué)成分的含量變化。結(jié)果顯示:藥材經(jīng)清炒、酒炙后環(huán)烯醚萜類含量均明顯升高,且清炒后龍膽苦苷和馬錢苷酸含量具有統(tǒng)計學(xué)差異。黃酮類在清炒和酒炙后含量變化不大。2類成分總的含量變化為環(huán)烯醚萜類成分含量清炒>酒炙>生品;黃酮類成分含量生品>酒炙>清炒。為探究傳統(tǒng)的“搓揉捶打”初加工方法對藏藥“解吉嘎?!辟|(zhì)量的影響,扎西桑珠等[18]測定了不同初加工方法藥材樣品中馬錢苷酸含量。結(jié)果顯示,經(jīng)“搓揉捶打”的“解吉嘎保”中馬錢苷酸含量是未經(jīng)加工的2倍。但文中未明確注明其實驗樣品的拉丁學(xué)名。

    3 遺傳背景分析及DNA分子鑒定

    3.1 全基因組測序 全基因組序列可為藥材基原植物的鑒定提供極為豐富的信息及多樣的候選片段,并為相關(guān)生物工程技術(shù)的開發(fā)等奠定堅實基礎(chǔ)。Li等[19]報道了對小秦艽G. dahurica Fisch.全基因組序列的測定結(jié)果,其總長度為1416.54 Mb。

    3.2 葉綠體基因組測序 倪梁紅等[20, 21]測定了麻花艽G. straminea Maxim.、粗壯秦艽G. robusta King ex Hook. f.及粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.的葉綠體全基因組序列,并比較其結(jié)構(gòu)特征及篩選熱點變異區(qū)。董博然等[22]報道了長梗秦艽G. waltonii Burk.和全萼秦艽G. lhassica Burk.的葉綠體全基因組序列,并開發(fā)出可用于鑒定此兩個近緣物種的特異性引物PCR分子標(biāo)記方法。高娜娜等[23]測定了西藏秦艽G. tibrtica King ex Hook. f.葉綠體全基因組序列,并基于相關(guān)序列分析篩選分子標(biāo)記,鑒定西藏秦艽及其近緣物種粗莖秦艽與粗壯秦艽。Zhou等[24]測定了小秦艽G. dahurica Fisch.,管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.及黃管秦艽G. officinalis H. Smith的葉綠體全基因組序列,結(jié)合已報道的秦艽組物種葉綠體基因組序列,進(jìn)一步篩選物種DNA分子鑒定標(biāo)記。Fu等[25]測定了龍膽科龍膽亞族(subtribe Gentianinae)6屬41種植物的葉綠體全基因組序列,分析其結(jié)構(gòu)特點及導(dǎo)致部分基因缺失的原因,探討了龍膽亞族內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。

    3.3 線粒體基因組測序 尕讓甲等[26]最近報道了粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及麻花艽G. straminea Maxim.的線粒體全基因組序列,其長度分別為:368,808 bp,410,086 bp。

    3.4 轉(zhuǎn)錄組分析 植物轉(zhuǎn)錄組序列同樣含有豐富的遺傳學(xué)信息,可從整體水平了解細(xì)胞中基因表達(dá)情況及其調(diào)控規(guī)律,全面揭示生物個體基因在特定時期和特定組織中的表達(dá)情況。倪梁紅等[27]首次以“解吉那?!被参镏婚L梗秦艽G. waltonii Burk.與“解吉嘎?!被参镏淮謮亚剀碐. robusta King ex Hook. f.為本組模式植物,分別構(gòu)建其根、莖、葉、花轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,挖掘參與編碼環(huán)烯醚萜苷類合成途徑中的24個關(guān)鍵酶,且在不同部位中的表達(dá)存在差異;還發(fā)現(xiàn)多個SSR、SNP和InDel位點??岛愕龋?8,29]分別測定了“解吉那?!被参锎智o秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及全萼秦艽G. lhassica Burk.的轉(zhuǎn)錄組序列,并進(jìn)行了相關(guān)關(guān)鍵基因的qRT-PCR驗證分析。楊曉等[30]則探究了粗莖秦艽種子萌發(fā)過程中的轉(zhuǎn)錄組信息及關(guān)鍵因子。

    3.5 物種DNA分子標(biāo)記 倪梁紅等[31]測定了甘肅產(chǎn)龍膽屬秦艽組粗莖秦艽、麻花艽、大葉秦艽、小秦艽、管花秦艽及黃管秦艽6種藥用植物的核糖體ITS區(qū)及matK、rbcL、psbA-trnH等9個葉綠體DNA條形碼序列,梳理種內(nèi)基因型式樣;進(jìn)行基于大葉秦艽葉綠體DNA基因II型,小秦艽ITS區(qū)基因II型、III型、IV型序列鑒定相關(guān)物種的方法學(xué)研究;建立的DNA分子個性化鑒別方法可將甘肅產(chǎn)6個物種有效區(qū)分(圖4)。熊波等[32]測定了粗壯秦艽、麻花艽、粗莖秦艽、長梗秦艽的核糖體ITS區(qū)序列及9個葉綠體片段序列,并對粗壯秦艽ITS區(qū)序列進(jìn)行克隆測序及基因分型,形態(tài)學(xué)及DNA分子證據(jù)顯示其可能為一雜交物種;在克隆序列中尋找穩(wěn)定位點,多片段組合可鑒定粗壯秦艽及其近緣種。陸佳妮等[33]對線粒體片段序列在秦艽組植物中的物種鑒定意義進(jìn)行了評價。分別測定秦艽組10個物種的線粒體 nad 1/b-c及 nad5/d-e序列。結(jié)果表明,nad1/b-c具有粗壯秦艽的穩(wěn)定變異位點,同時對粗莖秦艽及西藏秦艽有一定物種分辨率;nad5/d-e序列相似度高,僅大葉秦艽、黃管秦艽及管花秦艽存在種內(nèi)不同基因型。進(jìn)而基于nad 1/b-c 物種分子標(biāo)記,設(shè)計特異鑒定引物,建立粗壯秦艽特異性引物-PCR鑒定方法。羅焜等[34]廣泛收集秦艽藥材主產(chǎn)區(qū)不同基原和其常見混偽品共86個樣品,分別測定其候選序列ITS,psbA-trnH,matK,rbcL和ITS2,分析結(jié)果顯示,基于ITS2序列可成功鑒定秦艽藥材及其混偽品。Liu等[35]測定了龍膽屬6組30種(包括秦艽組8種)植物的rbcL、matK、trnH-psbA、ITS及ITS2序列,構(gòu)建的DNA條形碼可用于中藥秦艽4種基原植物的鑒定。尕讓甲等[36]構(gòu)建了川甘產(chǎn)藏藥解吉嘎保主流品種麻花艽基于葉綠體psbA-trnH、線粒體nad1 b/c、葉綠體rpl20-rps12三個片段的組合型DNA條形碼。

    3.6 DNA指紋分析與品種鑒定 王笠等[37]應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)探討了麻花艽的遺傳多樣性,并構(gòu)建DNA指紋譜?;?8個居群83份樣本的分析結(jié)果表明,麻花艽種群遺傳多樣性水平較高,其遺傳變異主要存在于居群間,遺傳特性與地理分布具有一定相關(guān)性。宗粉粉等[38]應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記對粗莖秦艽20個居群163株個體構(gòu)建DNA指紋譜。結(jié)果表明,粗莖秦艽種內(nèi)遺傳多樣性豐富,物種內(nèi)分為兩大支,且居群間遺傳距離與空間地理距離具有顯著的正相關(guān)關(guān)系;同時,結(jié)合SSR與SNP標(biāo)記,探討了四川康定縣居群的分化問題。

    4 小結(jié)

    守正創(chuàng)新,開展深入的藏醫(yī)藥文獻(xiàn)考證、主流品種梳理等工作,其必要性及緊迫性不言而喻。盡管已有《四部醫(yī)典》及《晶珠本草》等典籍的不同漢語譯本,但如何深入解讀藏醫(yī)藥典籍文獻(xiàn)原著與考證等,仍然是瓶頸之一。因此,加強深入、高效的漢藏同行合作研究工作以及相關(guān)研究團(tuán)隊的建設(shè)尤為重要。

    尚需開展的工作:①基原植物的分類學(xué)鑒定問題亟待解決。如在“解吉”相關(guān)研究中,無基原拉丁學(xué)名或名稱誤定[14,18]等。亦有一些相關(guān)工作,如對粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及其近緣種粗壯秦艽G. robusta King ex Hook. f.及西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.間的分類學(xué)鑒定工作[39]。秦艽組同域分布的近緣種間常發(fā)生雜交現(xiàn)象,并出現(xiàn)中間過渡類型,使種的界定及分類學(xué)鑒定工作更具挑戰(zhàn)性,如管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.及麻花艽G. straminea Maxim.間的雜交及基因滲入[40,41],粗壯秦艽G. robusta King ex Hook. f.的雜交起源與鑒定[32]等。同時,一些新物種的形成可能與雜交過程相關(guān),如有報道從全萼秦艽G. lhassica Burk.中分出一新類群G. hoae P. C. Fu et S. L. Chen[42]。②開展深入的“解吉”藏藥材市場品調(diào)研及品種鑒定。③文獻(xiàn)典籍考證、應(yīng)用現(xiàn)狀與相關(guān)藥效學(xué)研究相結(jié)合的解吉主流品種評價體系的建立?!敖饧眮碓瓷婕褒埬憣偾剀唇M多種植物,已成共識。但具體為那些(個)種,有不同觀點,如全萼秦艽G. lhassica Burk.,有歸入“解吉那?!钡?,也有將其另列一品種“莪德哇”[43]。④加強“解吉”基原植物的規(guī)范化栽培工作,滿足市場需求,并有助于保護(hù)野生種質(zhì)資源。秦艽組植物多分布于青藏高原,生存環(huán)境嚴(yán)苛,一些是國產(chǎn)狹域特有種,野生種質(zhì)資源的保護(hù)及開展就地栽培學(xué)研究工作刻不容緩。已有探討“解吉”4種基原植物粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、粗壯秦艽G. robusta King ex Hook. f.、麻花艽G. straminea Maxim.及西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.種胚發(fā)育特性方面的基礎(chǔ)性工作及粗莖秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.種子生物學(xué)研究報道等[44,45]。

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    (收稿日期:2022-08-05 編輯:陶希睿)

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