乙型流感病毒的研究進(jìn)展*

王宇茜 綜述,溫冬華 審校

1.上海健康醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院,上海 201318;2．同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院南院檢驗(yàn)科,上海 200123

流行性感冒(以下簡(jiǎn)稱流感)是一種傳染性、病毒性呼吸道感染疾病,在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率和病死率較高。流感的傳播途徑以空氣傳播和接觸傳播為主,傳播高峰期一般在冬季。流感常見(jiàn)的臨床癥狀包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛、乏力、出汗和全身酸痛等,也可能出現(xiàn)胃腸道癥狀(如惡心、嘔吐等)。流感的潛伏期為1～4 d,平均為2 d。流感病毒感染可能會(huì)發(fā)展為肺炎(病毒性)、支氣管炎等較為嚴(yán)重的并發(fā)癥[1]。

由于核衣殼蛋白和基質(zhì)蛋白不同,人類致病性流感病毒可以分為甲型(A),乙型(B)及丙型(C)3種,這些病毒均屬于正黏病毒科,是有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒[2]。

與甲型流感病毒相比,通常認(rèn)為乙型流感病毒所引起的臨床癥狀相對(duì)較輕,抗原特異性較低且很少引起流行疾病,不易被重視。但近年發(fā)現(xiàn),人感染乙型流感病毒后,也易造成嚴(yán)重疾病甚至導(dǎo)致患者死亡,有數(shù)據(jù)顯示,每年乙型流感病毒感染病例占所有流感病例的23%[3]。此外,在兒童中,乙型流感病毒感染占所有流感相關(guān)死亡的52%。并且乙型流感病毒引起的疾病可能比甲型流感病毒引起疾病更嚴(yán)重[4]。2015-2017年我國(guó)鹽城市共檢測(cè)流感病例3 891例,核酸陽(yáng)性數(shù)295例,陽(yáng)性率為7.58%;乙型核酸陽(yáng)性數(shù)為111例,陽(yáng)性率為2.85%,占總流感陽(yáng)性數(shù)的37.63%[5]。2017-2020年濟(jì)寧市共檢測(cè)病例4 575例,流感病毒陽(yáng)性達(dá)到842例,其中乙型流感病毒陽(yáng)性為398例,陽(yáng)性率達(dá)8.70%,占總流感陽(yáng)性數(shù)的47.27%[6]。2021年,同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院南院檢驗(yàn)科乙型流感病毒核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率已達(dá)到了14.09%;2022年1-11月,乙型流感病毒核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率也達(dá)到了13.07%。所以了解乙型流感病毒的特征、致病性與傳播性,以及明確乙型流感病毒的診斷和鑒別診斷,是十分有必要的。本文主要對(duì)乙型流感病毒的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述,以期為相關(guān)人員提供借鑒。

1 乙型流感病毒的簡(jiǎn)介

1.1乙型流感病毒的譜系 甲型流感病毒根據(jù)表面糖蛋白-血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的差異可進(jìn)一步分為不同的亞型,共分為18種HA亞型和11種NA亞型[7]。而乙型流感病毒則不區(qū)分亞型,而是根據(jù)抗原性及基因特征的差異(主要基于HA)分為了兩個(gè)譜系:B/Victoria/2/87-like譜系(即B/Victoria )、B/Yamagata/16/88-like譜系(即B/Yamagata)。目前,兩種譜系在全球范圍內(nèi)共同傳播[8-9]。

自1940年以來(lái),人類最早認(rèn)識(shí)到乙型流感病毒分離株,在1980年后,發(fā)生了 B/Yamagata與B/Victoria兩種譜系的遺傳與抗原分化等,而B/Yamagata譜系與祖先毒株的關(guān)系更為密切[10]。21世紀(jì)初,研究人員發(fā)現(xiàn)原始B/Victoria譜系的NA基因被B/Yamagata的NA基因所取代,原始B/Victoria NA基因片段從循環(huán)中消失,產(chǎn)生了B/Victoria(Victoria-HA/Yamagata-NA) 和B/Yamagata(Yamagata-HA/Yamagata/NA) 兩大譜系[8]。在2021年,趙佳琛等[11]發(fā)現(xiàn)在北京市監(jiān)測(cè)到的乙型流感病毒中,B/Victoria占據(jù)著很大比例,而且分析顯示部分流感病毒與疫苗株之間有多位點(diǎn)變異。雖然B/Yamagata近幾年來(lái)趨于穩(wěn)定,但最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),B/Yamagata病毒的HA和NA漂移速度加快,甚至超過(guò)了B/Victoria系病毒[9]。目前兩個(gè)譜系之間重配模式存在一定差異,同時(shí)重配與乙型流感病毒的相對(duì)遺傳多樣性之間存在相關(guān)性[12]。同時(shí)有抗原分析結(jié)果表明,B/Yamagata譜系比B/Victoria譜系具有更強(qiáng)的遺傳多樣性,其可能導(dǎo)致感染某種B/Yamagata譜系病毒株的患者對(duì)同種譜系的共同傳播株有著更強(qiáng)的易感性[13]。

1.2乙型流感病毒的結(jié)構(gòu)及組成 乙型流感病毒是有包膜的單股負(fù)鏈病毒,由8個(gè)基因組RNA片段組成。膜上含有一些血凝素和NA活性的糖蛋白纖突。各RNA節(jié)段均作為單一的順?lè)醋佣髯跃幋a特異的多肽。病毒RNA基因組片段結(jié)合異源三聚體RNA依賴性 RNA聚合酶,形成病毒核糖核蛋白復(fù)合物(圖1)[14]。乙型流感病毒RNA片段編碼至少11種病毒蛋白,其中包括聚合酶亞基(PA、PB1和PB2)、非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)、核輸出蛋白(NEP)、基質(zhì)蛋白(M1)、膜蛋白(M2)、表面糖蛋白(HA、NA和NB)和核蛋白。其中NB、NA編碼在同一段中,是乙型流感病毒的特有蛋白質(zhì)[15]。

圖1 乙型流感病毒結(jié)構(gòu)圖

2 乙型流感病毒的致病與傳播

2.1乙型流感病毒的致病性 乙型流感病毒是通過(guò)血凝素與細(xì)胞表面物質(zhì)-唾液酸受體結(jié)合引起感染,以細(xì)胞內(nèi)吞方式進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),病毒的核酸在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制。子代病毒顆粒成熟后,又將被釋放出來(lái)感染其他正常細(xì)胞。乙型流感病毒編碼的不同蛋白上的氨基酸基團(tuán)可改變其致病性。研究表明,乙型流感病毒毒性會(huì)在與甲型流感病毒異型共感染后增強(qiáng),主要取決于甲型流感病毒基因組的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制。研究人員發(fā)現(xiàn)一種或幾種甲型流感病毒蛋白可增強(qiáng)乙型流感病毒RNA的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制,59其中涉及的甲型流感病毒蛋白可以為聚合酶復(fù)合體本身和(或)甲型流感病毒轉(zhuǎn)錄與復(fù)制過(guò)程中導(dǎo)入細(xì)胞核中的蛋白,比如NS1。同時(shí)通過(guò)紫外線或用特定藥物抑制甲型流感病毒的轉(zhuǎn)錄與翻譯,會(huì)消除共感染后的增強(qiáng)作用[16]。

2.2乙型流感病毒的傳播性 由于乙型流感病毒缺乏明確的動(dòng)物宿主,所以一般認(rèn)為不會(huì)造成世界范圍的流行。自1940年發(fā)現(xiàn)乙型流感病毒以來(lái),乙型流感病毒主要在人群中進(jìn)行傳播,潛伏期為1～4 d(平均為2 d),在南北半球的溫帶地區(qū),乙型流感病毒主要在冬季或春季流行,而在熱帶或亞熱帶地區(qū),任何時(shí)候都有可能引起流行傳播[17-18]。乙型流感病毒是呼吸道病毒,人為主要的傳染源。雖然海豹中也發(fā)現(xiàn)了一些零散感染,但仍以人類為單一感染源。主要以打噴嚏、咳嗽等空氣飛沫傳播,少數(shù)情況下也通過(guò)接觸傳播,如人與人接觸或與被污染物接觸等情況。病毒在空氣中大約能存活半小時(shí)。

3 乙型流感病毒的診斷

目前流感病毒診斷主要依據(jù)流行病學(xué)資料,再通過(guò)與典型臨床癥狀表現(xiàn)結(jié)合進(jìn)行診斷,但一般在流行前期,一些癥狀較輕的患者診斷相對(duì)比較困難,因?yàn)楦腥静糠制渌粑啦《疽部稍斐赏瑯拥陌Y狀,其中包括新型冠狀病毒、甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒等。需要進(jìn)一步監(jiān)控及采用相應(yīng)的檢查措施,結(jié)合快速流感病毒抗原檢測(cè)、病毒核酸檢測(cè)等病原體檢測(cè)結(jié)果才可確診。

乙型流感病毒感染的診斷主要依賴于實(shí)驗(yàn)室檢查。目前快速抗原檢測(cè)因使用方便、成本低等原因被醫(yī)院門急診等廣泛應(yīng)用,但此方法的靈敏度、特異度相對(duì)較低。KIM等[19]評(píng)估一種基于量子點(diǎn)的檢測(cè)方法:QuantumPACK Easy檢測(cè),此方法不僅保留了快速抗原檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn),同時(shí)也提高了特異度、靈敏度,有著更低的成本,但此方法還存在一定的局限性,本研究為回顧性研究,仍需進(jìn)一步的前瞻性研究來(lái)評(píng)估其臨床效用。乙型流感病毒核酸檢測(cè)越來(lái)越受到重視,主要采用反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)病毒核酸進(jìn)行檢測(cè),該方法可以明顯提高檢測(cè)靈敏度和特異度;而運(yùn)用分子POCT方法檢測(cè)乙型流感病毒核酸,在提高檢測(cè)靈敏度和特異度的同時(shí),能夠提高檢測(cè)的速度。此外,實(shí)驗(yàn)室檢查的其他方法對(duì)乙型流感病毒的輔助診斷也有一定幫助,如血常規(guī)檢查:乙型流感病毒患者結(jié)果通常出現(xiàn)白細(xì)胞計(jì)數(shù),C-反應(yīng)蛋白水平輕微升高[20]。研究人員還發(fā)現(xiàn)外周血淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞比值(LMR)和中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)與乙型流感病毒感染高度相關(guān),可能在促進(jìn)機(jī)體炎癥反應(yīng)和抗病毒反應(yīng)中,LMR、NLR參與了其平衡狀態(tài)。從而可以運(yùn)用這些數(shù)據(jù),結(jié)合相關(guān)診斷、患者情況等,進(jìn)行更明確的對(duì)癥治療[21]。與此同時(shí),當(dāng)NLR>3.25時(shí)是感染乙型流感病毒患兒預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,NLR對(duì)于不同年齡段的患者有著較高的療效及預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值[22]。

4 乙型流感病毒的治療及預(yù)防

4.1乙型流感病毒的治療 患者在感染乙型流感病毒之后應(yīng)及時(shí)到醫(yī)院進(jìn)行治療,以避免病情進(jìn)一步惡化,從而引起一系列并發(fā)癥,甚至可能會(huì)危及患者生命。感染后應(yīng)盡快隔離,如若癥狀嚴(yán)重的患者則要住院隔離,如并發(fā)其他癥狀,需及時(shí)給予患者對(duì)應(yīng)的治療,時(shí)刻關(guān)注患者身體狀況。藥物類治療乙型流感主要包括帕拉米韋(單劑量靜脈輸液)、拉尼米韋(吸入性NA抑制劑)、奧司他韋(NA抑制劑)等,NA抑制劑是世界上大部分地區(qū)對(duì)乙型流感的一線治療藥物,該藥物競(jìng)爭(zhēng)性地抑制乙型流感病毒表面的NA,阻止形成的病毒顆粒上的唾液酸殘基裂解,防止病毒顆粒從被感染宿主細(xì)胞中釋放出來(lái)[23]。

近年來(lái),出現(xiàn)一些新型流感治療藥物,包括單劑量口服藥物Baloxavir marboxil及口服和靜脈注射抗病毒藥物Favipiravir。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明,Baloxavir marboxil的療效在一些情況下優(yōu)于奧司他韋(如在高危的成人患者中),且其活性形式Baloxavir acid (BXA)是一種新型帽依賴性核酸內(nèi)切酶CEN(位于流感病毒的PA亞基中)的抑制劑,BXA可通過(guò)選擇性抑制CEN的活性來(lái)抑制病毒RNA轉(zhuǎn)錄[24]。Favipiravir則抑制RNA依賴性RNA聚合酶[23]。

由于長(zhǎng)期或頻繁使用某些抗流感藥物,導(dǎo)致耐藥菌株的產(chǎn)生,因此需要尋找、發(fā)現(xiàn)新藥物。研究人員通過(guò)篩選化合物庫(kù)發(fā)現(xiàn)了抑肽酶(一種絲氨酸蛋白酶抑制劑),可作為一種抗流感候選藥物,其對(duì)多種流感病毒具有抑制作用,包括乙型流感病毒[25]。病毒作為病原體,需要利用宿主完成感染與復(fù)制等過(guò)程,所以針對(duì)宿主與病毒之間作用的方法采取干預(yù)措施為治療病毒感染提供一種新的有效的手段,比如識(shí)別并有效抑制重要的宿主因子等。NOSHI等[26]發(fā)現(xiàn)人小分子泛素相關(guān)修飾物蛋白(SUMO)化途徑對(duì)病毒生命周期十分重要,而且病毒可以被新型SUMOylation特異性抑制劑STE025有效抑制,證明了可以通過(guò)抑制人類SUMO化途徑來(lái)對(duì)抗乙型流感病毒的感染,同時(shí)也為之后抗感染藥物的研發(fā)提供了新策略。

4.2乙型流感病毒的預(yù)防 接種流感疫苗是現(xiàn)階段預(yù)防流感的最佳選擇之一。由于流感病毒的突變率很高,因此需要經(jīng)常性地重新接種和不斷更換疫苗配方,以解決抗原漂移問(wèn)題?；诒O(jiān)測(cè)及預(yù)測(cè)對(duì)疫苗的毒株進(jìn)行選擇,一旦選錯(cuò)毒株,疫苗的有效性也會(huì)大幅度下降。為了盡快解決問(wèn)題,需要早日研發(fā)出具有廣泛保護(hù)性和通用性的流感病毒疫苗。

目前疫苗主要包括四階流感疫苗即四種流感病毒亞型疫苗(甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒的H3N2、乙型流感病毒Victoria系、乙型流感病毒Yamagata系)等。接種疫苗的對(duì)象主要包括兒童、老年人、免疫力低下者和嚴(yán)重慢性疾病患者等。注射疫苗一段時(shí)間后,體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)抗體,可有效預(yù)防流感病毒的感染。

有研究發(fā)現(xiàn),可從哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中獲取分泌型表達(dá)的三聚體HA-ecto蛋白,此蛋白具有較好的免疫原性,實(shí)驗(yàn)證明該蛋白可誘導(dǎo)小鼠生成水平較高同源、異源染色體,提示可以利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的乙型流感病毒HA蛋白作為亞單位重組流感疫苗的選擇,也提示這種方法會(huì)是一種疫苗研制的新方向[27]。同時(shí)可以利用基因組重排的技術(shù)作為一個(gè)安全有效的減毒乙型流感病毒活疫苗開發(fā)方法,研究人員將重新排列的M(FluB-RAM)和NS(FluB-RANS)開發(fā)了兩個(gè)替代IBV骨架,經(jīng)多次傳代后可在小鼠體內(nèi)減毒,且重排病毒會(huì)誘導(dǎo)生成抗HA抗體,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,接種過(guò)該疫苗的小鼠在感染乙型流感病毒之后,完全免受臨床疾病和死亡的影響[28]。

同時(shí)有研究人員評(píng)估重組NA疫苗接種預(yù)防及限制病毒傳播的能力,利用重組乙型流感病毒NA肌內(nèi)或鼻內(nèi)接種豚鼠,評(píng)估是否可以防止同源病毒傳播給天然受體,結(jié)果表明接種過(guò)NA的豚鼠顯示病毒滴度降低,發(fā)現(xiàn)僅通過(guò)鼻內(nèi)途徑接種才可完全阻止病毒傳播給豚鼠,進(jìn)一步在鼻腔沖洗液中發(fā)現(xiàn)高水平的抗NA抗體,能夠抑制NA的酶活性,數(shù)據(jù)顯示,用NA補(bǔ)充疫苗制劑并通過(guò)鼻內(nèi)途徑接種疫苗可以廣泛預(yù)防乙型流感病毒的傳播[29-30]。

除了可以注射疫苗來(lái)預(yù)防乙型流感病毒的感染之外,也通過(guò)及時(shí)控制管理傳染源,切斷傳播途徑等方式來(lái)預(yù)防感染。

5 小 結(jié)

綜上所述,現(xiàn)階段我國(guó)大部分地區(qū)乙型流感病毒的感染率、病死率呈現(xiàn)不斷上升趨勢(shì),甚至與甲型流感病毒發(fā)生了共循環(huán),所以需要更加重視乙型流感病毒。不斷了解乙型流感病毒的特征,熟悉其致病性、傳播性,掌握相關(guān)診斷及預(yù)防方法等,提前進(jìn)行疫苗接種,降低患病率。但是由于病毒有一定的變異性,存在抗原漂移現(xiàn)象,所以仍需要繼續(xù)開發(fā)快速篩查方法,研究新型治療藥物及廣泛、通用的疫苗來(lái)解決相關(guān)問(wèn)題。