NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表達(dá)及臨床預(yù)后意義*

熊云剛,成克倫,趙 露,姜 森,顧延會(huì)

1.貴州航天醫(yī)院病理科,貴州遵義 563000;2.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸一科,貴州遵義 563000

肺癌是人類癌癥死亡的最常見原因,全球范圍內(nèi)每年新發(fā)病例達(dá)180萬(wàn)例,每年死亡病例達(dá)160萬(wàn)例[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌最常見的類型,占全部肺癌類型的80%以上。NSCLC的治療方式主要包括手術(shù)、放化療及靶向治療等,但術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是NSCLC治療失敗的主要原因[2]。因此,尋找新的有效預(yù)測(cè)NSCLC患者臨床預(yù)后的血清腫瘤標(biāo)志物,對(duì)于改善患者臨床預(yù)后具有重要臨床意義。多聚嘧啶束結(jié)合蛋白1(PTBP1)屬于異質(zhì)核糖核蛋白亞家族成員,其作為一種RNA結(jié)合蛋白,與異質(zhì)核RNA結(jié)合,影響mRNA前體的加工、代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn),PTBP1能夠與參與前mRNA剪接的內(nèi)含子多嘧啶束結(jié)合,促進(jìn)結(jié)直腸癌[3]、肺癌[4]等腫瘤的惡性進(jìn)展及轉(zhuǎn)移。含CUB結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)1(CDCP1)是含有3個(gè)細(xì)胞外CUB結(jié)構(gòu)域的跨膜蛋白,其作為Src家族激酶的底物,磷酸化激活后上調(diào)下游癌基因的表達(dá),促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[5-6]。本研究通過(guò)檢測(cè)NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平,探討二者與NSCLC患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年1月于貴州航天醫(yī)院就診的NSCLC患者90例為NSCLC組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)組織病理學(xué)檢查明確為NSCLC;(2)初次診治;(3)一般身體狀況良好,卡氏功能狀態(tài)評(píng)分>90分;(4)患者及家屬對(duì)本研究知情同意并簽字。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往有腫瘤放化療、靶向治療史;(2)合并其他部位惡性腫瘤;(3)妊娠、哺乳期女性;(4)臨床隨訪資料不完整。NSCLC組男62例,28例;年齡34～78歲,平均(62.54±6.98)歲;有吸煙史30例;肺腺癌59例,肺鱗癌31例;腫瘤分期:Ⅰ～Ⅱ期57例,Ⅲ～Ⅳ期33例;腫瘤分化程度:中高分化53例,低分化37例;腫瘤最大徑:≤5 cm 58例,>5 cm 32例;合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例。選取同期診治的40例肺部良性疾病患者為良性疾病組,其中男26例,女14例;年齡32～78歲,平均(61.72±7.51)歲;肺錯(cuò)構(gòu)瘤18例,肺炎癥病變22例。選取同期體檢的40例體檢健康者為對(duì)照組,其中男25例,女15例;年齡34～79歲,平均(61.80±7.39)歲。3組在性別、年齡上比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)貴州航天醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2方法

1.2.1檢測(cè)方法 留取NSCLC患者入院后第2天術(shù)前,良性疾病組和對(duì)照組清晨空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心10 min,離心半徑為10 cm,分離上層血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各組血清PTBP1、CDCP1水平。人PTBP1 ELISA試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。人CDCP1 ELISA試劑盒購(gòu)自上?？撇┤鹕锟萍脊?。實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行。根據(jù)血清PTBP1、CDCP1水平均值將NSCLC組患者分為PTBP1高表達(dá)組和低表達(dá)組,CDCP1高表達(dá)組和低表達(dá)組。

1.2.2隨訪方法 所有NSCLC組患者自確診之日起開始,以門診復(fù)查或電話的方式進(jìn)行隨訪。術(shù)后1年內(nèi)每3個(gè)月隨訪1次,術(shù)后第2年起每半年隨訪1次,隨訪截止時(shí)間2022年2月1日。隨訪內(nèi)容包括患者生存狀態(tài)及腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況。隨訪終點(diǎn)為隨訪結(jié)束或患者死亡。

2 結(jié) 果

2.1各組血清PTBP1、CDCP1水平比較 NSCLC組血清PTBP1、CDCP1水平明顯高于良性疾病組和對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);良性疾病組和對(duì)照組血清PTBP1、CDCP1水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清PTBP1、CDCP1水平比較

2.2NSCLC組血清PTBP1與CDCP1水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示,NSCLC組血清PTBP1與CDCP1水平呈正相關(guān)(r=0.721,P<0.001)。

2.3血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系 不同腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清PTBP1、CDCP1水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、性別、吸煙史、病理類型、病理分化程度、腫瘤最大徑患者血清PTBP1、CDCP1水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者臨床病理特征的關(guān)系

2.4血清PTBP1、CDCP1水平與NSCLC患者生存預(yù)后的關(guān)系 90例NSCLC患者隨訪6～36個(gè)月,平均隨訪時(shí)間(29.42±3.61)個(gè)月,死亡36例,失訪2例。PTBP1高表達(dá)組(44例)和低表達(dá)組(46例)NSCLC患者的平均生存時(shí)間分別為(27.59±3.32)個(gè)月、(31.47±3.68)個(gè)月。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示,PTBP1高表達(dá)組患者累積生存率低于PTBP1低表達(dá)組患者(χ2=5.910,P=0.015)。CDCP1高表達(dá)組(47例)和低表達(dá)組(43例)平均生存時(shí)間分別為(27.34±3.29)個(gè)月、(32.27±3.54)個(gè)月。CDCP1高表達(dá)組患者累積生存率低于CDCP1低表達(dá)組患者(χ2=7.544,P=0.006)。見圖1。

注:A、B分為血清CDCP1、PTBP1水平與NSCLC患者生存預(yù)后的生存曲線圖。

2.5影響NSCLC患者生存預(yù)后的單因素及多因素Cox回歸分析 以NSCLC患者的生存預(yù)后為因變量(死亡=1,存活=0,生存時(shí)間=t),納入年齡(≥60歲=1,<60歲=0)、性別(男=1,女=0)、吸煙史(有=1,無(wú)=0)、腫瘤最大徑(>5 cm=1,≤5 cm=0)、病理類型(肺鱗癌=1,肺腺癌=0)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有=1,無(wú)=0)、腫瘤分期(Ⅲ～Ⅳ期=1,Ⅰ～Ⅱ期=0)、病理分化程度(低分化=1,中高分化=0)、PTBP1(高表達(dá)=1,低表達(dá)=0)、CDCP1(高表達(dá)=1,低表達(dá)=0)為自變量,單因素及多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,腫瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PTBP1高表達(dá)、CDCP1高表達(dá)是影響NSCLC患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表3、4。

表3 影響NSCLC患者生存預(yù)后的單因素Cox回歸分析

表4 影響NSCLC患者生存預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

2019年中國(guó)肺癌的發(fā)病率為58.56/100 000,死亡率為53.23/100 000,并且發(fā)病率、死亡率均呈明顯上升趨勢(shì)[7]。NSCLC是最常見的肺癌類型,早期癥狀不明顯,多數(shù)患者就診時(shí)已處于晚期,已出現(xiàn)腫瘤血行或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。NSCLC的治療包括手術(shù)及放化療等,但對(duì)于晚期患者,即使經(jīng)積極綜合治療后患者遠(yuǎn)期預(yù)后仍然較差[8]。NSCLC診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是病理活檢,但具有一定的有創(chuàng)性及腫瘤播散的風(fēng)險(xiǎn)。血清腫瘤標(biāo)志物是理想的診斷方式,具有方便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。目前NSCLC的血清腫瘤標(biāo)志物包括癌胚抗原、鱗狀上皮癌抗原等,但上述指標(biāo)在其他疾病中水平也會(huì)升高,限制了臨床應(yīng)用[9]。深入研究NSCLC疾病機(jī)制,尋找能夠有效反映NSCLC患者生存預(yù)后的血清標(biāo)志物,具有重要臨床意義。

PTBP1蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為58×103,是異質(zhì)核糖核蛋白亞家族成員,其通過(guò)與RNA序列中的嘧啶富集區(qū)結(jié)合,影響mRNA成熟、定位和翻譯等過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn),PTBP1能夠通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞代謝和T/B淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng),促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致患者不良預(yù)后[10]。本研究中,NSCLC患者血清PTBP1水平升高,提示PTBP1可能參與NSCLC的發(fā)生過(guò)程。有學(xué)者證實(shí),NSCLC中CircGLIS4作為分子海綿結(jié)合并抑制miR-644a的表達(dá),miR-644a的表達(dá)降低導(dǎo)致其直接作用靶點(diǎn)PTBP1 mRNA穩(wěn)定性增加,進(jìn)而促進(jìn)PTBP1的表達(dá)[11]。本研究中,NSCLC患者血清PTBP1水平與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),表明PTBP1的水平升高促進(jìn)NSCLC的進(jìn)展。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞中PTBP1水平升高可通過(guò)激活磷酸酶張力蛋白同源物/磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶/蛋白激酶B通路,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬的發(fā)生,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[12]。有研究報(bào)道,細(xì)胞PTBP1水平升高能夠上調(diào)細(xì)胞周期素依賴激酶D1及B細(xì)胞淋巴瘤2的表達(dá),促進(jìn)誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1/S期的轉(zhuǎn)化,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,并抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[13]。本研究中,血清PTBP1高表達(dá)的NSCLC患者生存預(yù)后較差,并且是影響患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示通過(guò)檢測(cè)血清PTBP1水平有助于評(píng)估NSCLC患者的生存預(yù)后。分析其原因,可能是PTBP1的水平升高促進(jìn)腫瘤化療耐藥性形成。有研究發(fā)現(xiàn),腫瘤微環(huán)境處于缺氧狀態(tài),缺氧條件能夠誘導(dǎo)PTBP1的表達(dá),導(dǎo)致DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因的選擇性剪接發(fā)生改變,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞耐藥性的形成,導(dǎo)致患者不良預(yù)后[14]。

CDCP1也稱為CD318,是相對(duì)分子質(zhì)量為135×103的蛋白,結(jié)構(gòu)上有3個(gè)CUB樣結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)域、1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和1個(gè)短的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域,多表達(dá)于胃腸道、呼吸道等上皮組織中。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn),CDCP1在前列腺癌[6]、乳腺癌[15]等多種惡性腫瘤中水平升高,CDCP1可以從細(xì)胞表面脫落,分泌到細(xì)胞外及外周血中從而被檢測(cè)到,是一種新的腫瘤標(biāo)志物。本研究中,NSCLC患者血清CDCP1水平明顯升高,提示CDCP1可能參與NSCLC的腫瘤發(fā)生。CDCP1水平升高的機(jī)制與NSCLC中RAS通路的激活有關(guān)[16]。有研究發(fā)現(xiàn),具有RAS基因突變患者的人肺癌細(xì)胞中的CDCP1的水平明顯高于沒有RAS基因突變的患者,體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí),Ras的過(guò)度激活能夠明顯誘導(dǎo)CDCP1的表達(dá)及磷酸化激活,促進(jìn)腫瘤的遷移和侵襲[17]。本研究中,血清CDCP1水平與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),提示CDCP1水平促進(jìn)NSCLC的腫瘤進(jìn)展。有研究表明,腫瘤中CDCP1的水平升高能夠激活Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路,促進(jìn)β-連環(huán)蛋白進(jìn)入細(xì)胞核,誘導(dǎo)N-鈣黏蛋白的水平升高,E-鈣黏蛋白水平降低,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力[18]。此外,有研究發(fā)現(xiàn),腫瘤中CDCP1的水平升高能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞干性形成,促使腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生,增強(qiáng)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力,導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展[19]。本研究發(fā)現(xiàn),血清CDCP1高表達(dá)的NSCLC患者生存預(yù)后較差,是影響患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,表明血清CDCP1是新的NSCLC腫瘤標(biāo)志物,檢測(cè)NSCLC患者血清CDCP1表達(dá)有助于評(píng)估NSCLC患者的臨床預(yù)后。有研究表明,在T790M突變的肺癌細(xì)胞系中存在AXL/CDCP1/SRC通路過(guò)度激活的現(xiàn)象,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥性的形成,而沉默CDCP1或AXL的表達(dá)后,恢復(fù)了對(duì)化療藥的敏感性[20]。因此,臨床醫(yī)生可根據(jù)血清CDCP1水平,對(duì)NSCLC患者的預(yù)后進(jìn)行評(píng)估,對(duì)于高?；颊哂枰苑e極治療和隨訪,以改善患者生存預(yù)后。

本研究通過(guò)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),NSCLC患者血清PTBP1與CDCP1水平呈正相關(guān),表明二者可能共同參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。分析其原因是腫瘤中PTBP1水平升高能夠穩(wěn)定CDCP1 mRNA,促進(jìn)CDCP1蛋白表達(dá),導(dǎo)致腫瘤惡性進(jìn)展。有研究表明,腫瘤中hsa_circ_0005358作為一種抑癌因子,通過(guò)其215-224序列與PTBP1相互作用,阻止PTBP1穩(wěn)定CDCP1 mRNA,減少CDCP1蛋白翻譯,進(jìn)而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移[21]。

綜上所述,NSCLC患者血清PTBP1與CDCP1水平升高,二者與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),共同促進(jìn)NSCLC的發(fā)生發(fā)展。血清PTBP1與CDCP1高表達(dá)是影響NSCLC患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,是潛在的NSCLC預(yù)后相關(guān)腫瘤標(biāo)志物。但本研究也存在一定的不足,本研究樣本量有限,隨訪時(shí)間較短,未對(duì)不同臨床病理特征的NSCLC患者進(jìn)行分層分析,結(jié)果可能存在一定的偏倚,有待今后開展多中心、前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究,深入探索二者的臨床應(yīng)用價(jià)值。