直腸癌患者血清TEM1、Sema3A水平與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系分析*

岳 峰,江旗琳,陳 淼,徐媛媛

邯鄲市中心醫(yī)院胃腸外科,河北邯鄲 056001

直腸癌是胃腸道常見的惡性腫瘤,全球范圍內(nèi)每年新發(fā)病例達180萬例,死亡病例達88萬例[1]。根治性手術(shù)是直腸癌最為有效的治療方式,但部分患者術(shù)后可發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。因此,尋找能夠預(yù)測直腸癌患者術(shù)后預(yù)后的標(biāo)志物具有重要意義。內(nèi)皮唾液酸蛋白(TEM1)又稱CD248,能夠與細胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合,參與調(diào)節(jié)細胞遷移、淋巴結(jié)發(fā)育和內(nèi)皮細胞凋亡等過程[2]。研究發(fā)現(xiàn),TEM1在惡性肉瘤、脈管系統(tǒng)腫瘤等惡性腫瘤中水平較高,其能夠通過結(jié)合C型凝集素,參與腫瘤血管生成,促進腫瘤惡性進展[2-3]。有研究發(fā)現(xiàn),胃癌中TEM1水平升高,其通過促進腫瘤血管淋巴管侵襲,促進腫瘤轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致患者不良預(yù)后[4]。信號素3A(Sema3A)是信號素家族的成員,具有C2型免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域,其作為一種分泌型蛋白,可以抑制樹突的生長,參與促進神經(jīng)元發(fā)育等生理過程[5-6]。研究表明,Sema3A在尿路上皮癌[5]、胃癌[6]等惡性腫瘤中水平上調(diào)或下調(diào),其通過促進腫瘤細胞的增殖、遷移及耐藥性的形成,導(dǎo)致患者不良預(yù)后。本研究通過檢測直腸癌患者血清TEM1、Sema3A水平,分析二者與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系,探討二者的臨床預(yù)后價值,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年2月至2019年2月于本院行直腸癌根治術(shù)的104例直腸癌患者作為研究組。納入標(biāo)準:(1)患者年齡≥18歲;(2)術(shù)后經(jīng)病理組織學(xué)檢查明確診斷為直腸癌;(3)初次診治;(4)臨床病歷資料完整,患者及家屬對本研究知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準:(1)合并其他惡性腫瘤;(2)TNM分期為Ⅳ期;(3)伴有心、肝、腎等臟器功能嚴重障礙,不能耐受手術(shù);(4)合并急性肺炎等感染性疾病;(5)術(shù)前發(fā)生淋巴結(jié)遠處轉(zhuǎn)移。研究組中男60例,女44例;年齡28～76歲,平均(57.69±6.17)歲;TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期57例,Ⅲ期47例;腫瘤分化程度:低分化38例,中高分化66例;病理類型:管狀腺癌68例,黏液腺癌36例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例;神經(jīng)侵犯20例;癌胚抗原(CEA)>3.54 ng/mL者70例,≤3.54 ng/mL者34例。選取同期于本院體檢的60例體檢健康者為對照組,其中男34例,女26例;年齡26～78 歲,平均(56.76±4.57)歲。兩組性別、年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會已批準本研究。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集及檢測 研究組入院后即刻、對照組體檢時,均采集空腹靜脈血5 mL,3 000 r/min離心10 min,留取上層血清進行檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測患者血清TEM1、Sema3A水平。TEM1酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒購自武漢菲恩生物科技公司(貨號EH-12892),Sema3A酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒購自廣州奧瑞達生物公司(貨號ARD200271),實驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行。根據(jù)血清TEM1、Sema3A水平中位數(shù)2.42 ng/mL、6.44 ng/mL,分為TEM1高表達組(n=51)和低表達組(n=53),Sema3A高表達組(n=50)和低表達組(n=54)。采用羅氏公司cobas8000生化免疫分析儀檢測血清CEA水平,試劑盒購于羅氏公司,以所有研究對象的檢測指標(biāo)水平均值為臨界值。

1.2.2隨訪與分組 出院后對所有直腸癌患者進行為期3年的隨訪,隨訪方式:電話或門診方式,術(shù)后第1年每3個月隨訪一次,術(shù)后第2年、第3年每半年隨訪1次,記錄患者腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況及生存情況,隨訪截止時間2022年3月1日,隨訪終點為患者死亡或隨訪時間結(jié)束。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清TEM1、Sema3A水平比較 研究組血清TEM1、Sema3A水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組血清TEM1、Sema3A水平比較

2.2血清TEM1、Sema3A水平與直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 直腸癌患者術(shù)前血清TEM1、Sema3A水平與腫瘤分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與性別、年齡、腫瘤最大徑、病理類型、神經(jīng)侵犯及CEA水平無關(guān)(P>0.05),見表2。

表2 血清TEM1、Sema3A水平與直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3血清TEM1、Sema3A水平對直腸癌患者預(yù)后的影響 104例直腸癌患者隨訪4～36月,平均隨訪(25.7±6.2)個月,死亡48例。Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示,TEM1高表達組患者的中位生存時間為26個月,低于TEM1低表達組患者的中位生存時間(35個月),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.227,P<0.05);Sema3A高表達組患者的中位生存時間為27個月,低于Sema3A低表達組的中位生存時間(35個月),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.427,P<0.05)。見圖1。

注:A為不同TEM1水平的直腸癌患者的生存曲線圖;B為不同Sema3A水平的直腸癌患者的生存曲線圖。

2.4單因素及多因素Cox回歸分析直腸癌患者預(yù)后的影響因素 建立Cox比例風(fēng)險回歸模型,因變量為直腸癌患者預(yù)后。單因素分析的自變量為年齡、性別、腫瘤最大徑、腫瘤分化程度、TNM分期、病理類型、CEA、神經(jīng)侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TEM1、Sema3A等。賦值情況見表3。

表3 賦值表

單因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,腫瘤TNM分期Ⅲ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TEM1高表達、Sema3A高表達均是影響直腸癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),見表4。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示,腫瘤TNM分期Ⅲ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TEM1高表達、Sema3A高表達是影響直腸癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05),見表5。

表4 影響直腸癌患者預(yù)后的單因素Cox回歸分析結(jié)果

表5 影響直腸癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析結(jié)果

3 討 論

直腸癌發(fā)病較為隱匿,早期缺乏典型癥狀及體征,部分患者確診時已處于中晚期,即使積極進行手術(shù)治療,術(shù)后也易發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致患者不良預(yù)后[7]。近年來隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,高通量基因檢測有助于判斷患者治療的敏感性及預(yù)后,但由于費用昂貴、檢測較為復(fù)雜,難以在臨床上被廣泛應(yīng)用[8]。CEA、糖類抗原19-9等血清腫瘤標(biāo)志物有助于直腸癌患者的診斷及隨訪評估,其水平升高往往提示存在腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的風(fēng)險,但難以及時對直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后進行有效評估[9]。因此,尋找有效判斷直腸癌患者預(yù)后的血清腫瘤標(biāo)志物,對臨床直腸癌根治術(shù)后患者預(yù)后的防治具有積極意義。

TEM1屬于C型凝集素樣跨膜受體,位于活化間充質(zhì)細胞的質(zhì)膜上,能與纖連蛋白結(jié)合[10]。在健康成人組織中TEM1的水平較低,但在腫瘤患者中水平升高,其能夠?qū)⒛[瘤細胞束縛在基質(zhì)上,介導(dǎo)腫瘤細胞遷移至血管基底膜,促進腫瘤進展和轉(zhuǎn)移[11]。本研究中,研究組患者血清TEM1水平明顯高于對照組,表明TEM1可能參與促進直腸癌的發(fā)生進程。分析其原因可能與微小RNA的表達調(diào)控有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),miR-125b-5p能夠靶向結(jié)合細胞中TEM1的mRNA,調(diào)控TEM1的表達,直腸癌細胞中miR-125b-5p的水平下調(diào)導(dǎo)致TEM1水平異常升高,增強腫瘤細胞的侵襲能力[12]。本研究中,TEM1水平與腫瘤分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),表明TEM1的水平升高可能參與促進直腸癌的腫瘤進展。TEM1能夠重塑腫瘤微環(huán)境中免疫細胞功能,發(fā)揮腫瘤促進作用。研究表明,腫瘤相關(guān)成纖維細胞中TEM1水平升高,TEM1通過結(jié)合巨噬細胞表面的CD68,募集并活化巨噬細胞,促進巨噬細胞由M1型向M2型極化,進而促進腫瘤細胞免疫逃逸,導(dǎo)致腫瘤進展[13]。此外,有研究表明,TEM1能夠通過激活Wnt信號通路,促進腫瘤血管及淋巴管新生,促進腫瘤的增殖及血管淋巴管的轉(zhuǎn)移[14]。本研究中,術(shù)前血清TEM1水平較高的直腸癌患者預(yù)后較差,并且是影響患者預(yù)后的獨立危險因素,提示檢測直腸癌患者術(shù)前血清TEM1水平有助于評估患者臨床預(yù)后,可能是新的預(yù)后相關(guān)腫瘤標(biāo)志物。既往研究表明,直腸癌細胞中TEM1的水平升高能夠促進腫瘤細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進而增強腫瘤細胞對奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶等化療藥物的耐藥性,導(dǎo)致患者不良預(yù)后[12]。

信號素是一類分泌型或膜結(jié)合型信號蛋白家族,結(jié)構(gòu)上具有特征性的N端Sema結(jié)構(gòu)域,包含信號蛋白二聚化和受體結(jié)合位點,參與調(diào)節(jié)血管生成、腫瘤發(fā)生、炎癥、細胞凋亡和免疫反應(yīng)等多種病理生理過程[15]。Sema3A是脊椎動物信號蛋白中的分泌型蛋白,能夠結(jié)合細胞表面受體蛋白激活下游信號級聯(lián)反應(yīng),在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、血管生成、癌癥轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用[15]。本研究中,研究組患者血清Sema3A水平明顯高于對照組,提示Sema3A可能參與直腸癌的發(fā)生。Sema3A的表達受轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤中miR-145的水平升高能夠促進RNA聚合酶Ⅱ結(jié)合到Sema3A啟動子上,并誘導(dǎo)Sema3A啟動子的激活,在轉(zhuǎn)錄水平上促進Sema3A基因的表達[16]。本研究中,直腸癌患者血清的Sema3A水平與腫瘤分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),提示Sema3A促進直腸癌的惡性進展。研究表明,缺氧條件下能夠誘導(dǎo)腫瘤細胞Sema3A的表達,Sema3A作為一種巨噬細胞招募誘導(dǎo)因子,能夠與巨噬細胞表面神經(jīng)纖毛蛋白-1受體結(jié)合,促進血管內(nèi)皮生長因子受體1磷酸化,使巨噬細胞向M2型轉(zhuǎn)化,從而促進腫瘤細胞的增殖和遷移[17]。有學(xué)者利用產(chǎn)生靶向神經(jīng)纖毛蛋白-1受體的納米抗體阻斷其與Sema3A的相互作用,增加了結(jié)直腸癌腫瘤微環(huán)境中促炎癥M1型巨噬細胞和腫瘤特異性CD8+T細胞的百分比,從而增強機體的抗腫瘤免疫能力[18]。此外,Sema3A屬核基質(zhì)蛋白,能夠?qū)⒛[瘤蛋白富集在核基質(zhì)上,可為腫瘤DNA的復(fù)制提供支架,進而促進腫瘤細胞的惡性增殖[19]。本研究中,術(shù)前血清Sema3A水平較高的患者預(yù)后較差,是影響直腸癌患者預(yù)后的獨立危險因素,提示Sema3A可能是一種新的評估直腸癌患者臨床預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物。其機制可能與Sema3A能夠增強靶向治療藥物的耐藥性有關(guān)。研究表明,Sema3A的水平升高能夠誘導(dǎo)Met酪氨酸激酶受體及缺氧依賴性信號通路的激活,抑制小分子酪氨酸抑制劑舒尼替尼的抗腫瘤作用,促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[20]。此外,本研究中,TNM分期Ⅲ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是影響直腸癌根治術(shù)患者預(yù)后的獨立危險因素[21]。以上3項為危險因素的原因可能是因為TNM分期Ⅲ期、腫瘤低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者病情程度更嚴重,往往導(dǎo)致不良預(yù)后的發(fā)生。因此,臨床上對于直腸癌患者術(shù)后應(yīng)明確腫瘤TNM分期,腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài),對于TNM分期Ⅲ期,腫瘤低分化及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,應(yīng)密切監(jiān)測患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況,制訂全面的治療方案,以改善患者的臨床預(yù)后。

綜上所述,直腸癌患者血清TEM1、Sema3A水平升高,二者水平與腫瘤分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。血清高TEM1、Sema3A水平的直腸癌患者預(yù)后較差,是影響直腸癌預(yù)后的獨立危險因素。臨床上可根據(jù)血清TEM1、Sema3A水平對直腸癌患者臨床預(yù)后進行評估,指導(dǎo)臨床診治及隨訪。但本研究尚存在一定不足,一方面由于樣本量較少,研究可能存在一定的偏倚,另一方面隨訪時間較短,有待今后擴大樣本量,并延長隨訪時間進行深入研究。