肺結(jié)核患者血清趨化因子CXCL8、RANTES與療效的相關(guān)性

盧滔 彭春仙 盧偉力 吳志宇 方敏

[摘要]?目的?探究肺結(jié)核（pulmonary?tuberculosis，PTB）患者血清CXC趨化因子配體8（C-X-C?motif?chemokine?ligand?8，CXCL8）、調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（regulate?upon?activation?normal?T?cell?expressed?and?secreted，RANTES）水平與治療效果的關(guān)系。方法?選取2020年2月至2021年2月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬衢州醫(yī)院收治的450例初診涂陽的PTB患者為研究對(duì)象。所有患者均采用標(biāo)準(zhǔn)抗PTB治療，根據(jù)治療效果分為有效組（n=383）和無效組（n=67）。比較兩組一般資料及血清CXCL8、RANTES水平，采用Logistic回歸分析PTB患者治療效果的影響因素以及CXCL8、RANTES對(duì)PTB患者治療效果的預(yù)測價(jià)值。結(jié)果?治療后，450例PTB患者治療有效率為85.11%。無效組的全程督導(dǎo)占比低于有效組，吸煙、外地戶籍占比及治療前血清CXCL8、RANTES水平高于有效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），性別、職業(yè)、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，吸煙、戶籍類型、CXCL8及管理方式是PTB患者治療無效的影響因素（P<0.05）。血清CXCL8、RANTES預(yù)測PTB患者治療效果的曲線下面積（areas?under?the?curve，AUC）分別為0.877、0.865，敏感度分別為77.6%、79.1%，特異性分別為88.3%、89.3%；CXCL8、RANTES聯(lián)合預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.955，敏感度為94.0%，特異性為85.4%。結(jié)論?血清CXCL8、RANTES高水平與PTB患者治療不良密切相關(guān)，檢測血清CXCL8、RANTES有利于評(píng)估PTB患者治療效果，且二者聯(lián)合預(yù)測效果更佳。

[關(guān)鍵詞]?肺結(jié)核；調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子；治療效果；CXC趨化因子配體8

[中圖分類號(hào)]?R521??????[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.14.008

Correlation?between?serum?chemokines?CXCL8，?RANTES?and?curative?effect?in?pulmonary?tuberculosis?patients

LU?Tao1，?PENG?Chunxian1，?LU?Weili1，?WU?Zhiyu1，?FANG?min?2

1.Department?of?Infection，?Quzhou?Hospital?Affiliated?to?Wenzhou?Medical?University，?Quzhou?324000，?Zhejiang，?China;?2.Department?of?Oncology，?Kecheng?District?Peoples?Hospital，?Quzhou?324000，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?relationship?between?serum?C-X-C?motif?chemokine?ligand?8?（CXCL8），?regulate?upon?activation?normal?T?cell?expressed?and?secreted?（RANTES）?levels?and?the?therapeutic?effect?in?patients?with?pulmonary?tuberculosis?（PTB）.?Methods?A?total?of?450?patients?with?PTB?who?were?newly?diagnosed?with?smear-positive?in?Quzhou?Hospital?Affiliated?to?Wenzhou?Medical?University?from?February?2020?to?February?2021?were?gathered?as?the?research?objects，?all?of?whom?were?treated?with?standard?anti-PTB?treatment，?and?the?treatment?effects?of?all?PTB?patients?were?recorded，?and?they?were?separated?into?effective?group?（n=383）?and?ineffective?group?（n=67）?according?to?the?treatment?effect.?The?general?data?and?serum?CXCL8?and?RANTES?levels?of?the?two?groups?were?compared.?Logistic?regression?was?used?to?analyze?the?factors?affecting?the?treatment?outcome?of?PTB?patients?and?the?predictive?value?of?CXCL8?and?RANTES?on?the?treatment?outcome?of?PTB?patients.?Results?After?treatment，?the?effective?rate?of?450?patients?with?PTB?was?85.11%.?The?proportion?of?total?supervision?in?the?ineffective?group?was?lower?than?that?in?the?effective?group，?and?the?proportion?of?smoking，?non-resident?residence?and?serum?CXCL8?and?RANTES?before?treatment?were?higher?than?those?in?the?effective?group，?the?differences?were?statistically?significant?（P<0.05），?while?the?differences?in?gender，?occupation?and?age?were?not?statistically?significant?（P>0.05）.?Multiple?Logistic?regression?analysis?showed?that?smoking，?household?registration?type，?CXCL8?and?management?style?were?the?influencing?factors?of?treatment?ineffectiveness?in?patients?with?PTB?（P<0.05）.?The?areas?under?the?curve?（AUC）?of?serum?CXCL8?and?RANTES?were?0.877?and?0.865，?the?sensitivity?were?77.6%?and?79.1%，?and?the?specificity?was?88.3%?and?89.3%，?respectively.?AUC?of?CXCL8?and?RANTES?combined?to?predict?the?therapeutic?effect?of?PTB?patients?was?0.955，?the?sensitivity?was?94.0%，?and?the?specificity?was?85.4%.?Conclusion?The?high?levels?of?serum?CXCL8?and?RANTES?are?closely?related?to?the?poor?treatment?of?PTB?patients.?The?detection?of?serum?CXCL8?and?RANTES?is?helpful?to?evaluate?the?treatment?effect?of?PTB?patients，?and?the?combined?prediction?effect?of?the?two?is?better.

[Key?words]?Pulmonary?tuberculosis;?Regulate?upon?activation?normal?T?cell?expressed?and?secreted;?Therapeutic?effect;?C-X-C?motif?chemokine?ligand?8

肺結(jié)核（pulmonary?tuberculosis，PTB）是一種由結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium?tuberculosis，MTB）感染引起的肺部傳染性疾病，可影響神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)功能甚至威脅患者生命健康，需要及時(shí)采取合理方案進(jìn)行治療[1-2]。近年來化療藥物廣泛應(yīng)用于PTB的治療，可較好地控制病情[3]。目前臨床多利用痰菌培養(yǎng)等手段評(píng)估PTB治療效果，但其耗時(shí)較長[4-5]。因此，尋找可快速、有效評(píng)估PTB治療效果的方法，對(duì)及時(shí)改變治療策略、避免藥物濫用具有重要意義。既往研究發(fā)現(xiàn)，CXC趨化因子配體8（C-X-C?motif?chemokine?ligand?8，CXCL8）在PTB中呈高表達(dá)，CXCL8可參與免疫反應(yīng)進(jìn)而影響PTB病情發(fā)展，對(duì)于診斷PTB、評(píng)估PTB患者病情具有潛在價(jià)值[6]；同時(shí)有研究顯示，調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（regulate?upon?activation?normal?T?cell?expressed?and?secreted，RANTES）在PTB中水平較高，可作為診斷PTB的標(biāo)志物[7]。但CXCL8、RANTES與PTB治療效果的關(guān)系尚不清晰。因此，本文通過測定PTB患者血清CXCL8、RANTES水平，分析二者與PTB治療效果的關(guān)系，以期為臨床評(píng)估PTB治療效果提供新思路。

1??資料與方法

1.1??一般資料

選取2020年2月至2021年2月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬衢州醫(yī)院收治的450例初診涂陽的PTB患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《肺結(jié)核診斷和治療指南》[8]中PTB判定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)呈陽性；②患者初次確診，自愿參與本項(xiàng)研究；③患者用藥依從性良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝臟、心臟、腎臟等臟器功能不全、糖尿病者；②合并腫瘤或哮喘、肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病者；③合并高血壓、甲狀腺功能亢進(jìn)、冠心病者；④合并丙型肝炎病毒等慢性感染、認(rèn)知功能障礙者；⑤處于哺乳/妊娠期女性；⑥合并免疫缺陷病者。其中男253例，女197例；年齡23～65歲，平均（46.03±14.49）歲。本研究經(jīng)溫州醫(yī)科大學(xué)附屬衢州醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2019-05-93）。

1.2??方法

所有PTB患者均給予標(biāo)準(zhǔn)的抗PTB治療，2個(gè)月強(qiáng)化期治療，4個(gè)月鞏固期治療。具體治療方案[3]：2HRZE/4HR，2HRZE：異煙肼（生產(chǎn)單位：成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H51020788，規(guī)格：0.1g）0.3g、利福平（生產(chǎn)單位：廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H44020771，規(guī)格：0.15g）0.45g、吡嗪酰胺（生產(chǎn)單位：廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字：國藥準(zhǔn)字H44020761，規(guī)格：0.25g）1.5g，隔天1次，持續(xù)2個(gè)月；4HR：異煙肼0.3g、利福平0.45g，隔天1次，持續(xù)4個(gè)月。所有患者經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)抗PTB治療6個(gè)月后采集痰液標(biāo)本進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，其中，肺結(jié)核涂陽陰轉(zhuǎn)為有效，否則為無效。收集兩組PTB患者職業(yè)、管理方式、吸煙、戶籍類型等一般資料。

在進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)治療前，收集所有PTB患者清晨空腹外周血3～4ml，靜置25～30min，3700轉(zhuǎn)/min離心7min，分離血清，分裝，密封，于-80℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清CXCL8、RANTES水平。利用人CXCL8?ELISA?Kit（上海康朗生物科技有限公司，KL00521）、人RANTES?ELISA?Kit（上海恪敏生物科技有限公司，E-EL-H0023）配制CXCL8、RANTES的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，解凍血清，采用酶標(biāo)儀（北京北信科遠(yuǎn)儀器有限責(zé)任公司，JC12-WD-9417B）檢測血清及CXCL8、RANTES標(biāo)準(zhǔn)品溶液于450nm波長處的吸光度，繪制CXCL8、RANTES的回歸曲線，根據(jù)CXCL8、RANTES的標(biāo)準(zhǔn)回歸方程，計(jì)算血清CXCL8、RANTES水平。

1.3??統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS?25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者操作特征（receiver?operator?characteristic，ROC）曲線評(píng)估血清CXCL8、RANTES對(duì)PTB患者治療效果的預(yù)測價(jià)值，采用多因素Logistic回歸分析PTB患者治療效果的影響因素，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??治療效果

所有患者經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)抗PTB治療后進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示，450例PTB患者中有383例呈陰性，定義為治療有效（有效組，n=383），67例呈陽性，定義為治療無效（無效組，n=67），治療有效率為85.11%（383/450）。

2.2??基線資料比較

無效組的全程督導(dǎo)占比低于有效組，吸煙、外地戶籍占比及治療前血清CXCL8、RANTES水平高于有效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），性別、職業(yè)、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.3??Logistic回歸分析PTB患者治療效果的影響因素

以管理方式（其他=0，全程督導(dǎo)=1）、吸煙（否=0，是=1）、戶籍類型（本地=0，外地=1）、血清CXCL8（實(shí)測值）、RANTES（實(shí)測值）為自變量，以PTB患者治療效果（有效=0，無效=1）為因變量，采用Enter法進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示吸煙、戶籍類型、CXCL8及管理方式是PTB患者治療無效的影響因素（P<0.05），見表2。

2.4??血清CXCL8、RANTES對(duì)PTB患者治療效果的預(yù)測價(jià)值

ROC曲線顯示，血清CXCL8預(yù)測PTB患者治療效果的曲線下面積（area?under?curve，AUC）為0.877[95%置信區(qū)間（confidence?interval，CI）：0.817～0.937]，截?cái)嘀禐?30.95pg/ml，其敏感度、特異性分別為77.6%、88.3%，約登指數(shù)為0.659；血清RANTES預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.865（95%CI：0.805～0.925），截?cái)嘀禐?21.70pg/ml，其敏感度、特異性分別為79.1%、89.3%，約登指數(shù)為0.684；血清CXCL8、RANTES聯(lián)合預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.955（95%CI：0.926～0.983），其敏感度、特異性分別為94.0%、85.4%，約登指數(shù)為0.794，見圖1。

3??討論

PTB是由MTB感染引起的呼吸系統(tǒng)病變，其可表現(xiàn)為胸痛、咳嗽、低熱、盜汗等，可引發(fā)肺動(dòng)脈高壓、肺心病，嚴(yán)重者可危及生命[9-10]。隨著督導(dǎo)化學(xué)治療（directly?observed?treatment，DOT）的推行，PTB治愈率雖有所提高，但仍有部分PTB患者治療效果不佳[11]。本研究結(jié)果顯示，給予標(biāo)準(zhǔn)抗PTB治療后，所有患者的治療有效率為85.11%，表明標(biāo)準(zhǔn)抗PTB治療可治愈部分患者，但其治療有效率仍需提高。因此，尋找影響PTB治療效果且可用于評(píng)估PTB治療效果的標(biāo)志物，對(duì)提高PTB患者的生存質(zhì)量尤其重要。

趨化因子可招募免疫細(xì)胞，促進(jìn)肉芽腫形成，在MTB引起的免疫應(yīng)答中起重要作用[6]。CXCL8是一種趨化因子，主要由白細(xì)胞介素-1β等炎癥因子誘導(dǎo)分泌，其可在炎癥部位募集、激活免疫細(xì)胞，影響機(jī)體免疫反應(yīng)，還可影響細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，與肺炎、PTB等病變過程相關(guān)[12-13]。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL8在肺炎中呈高水平，與肺炎嚴(yán)重程度有關(guān)，可輔助判斷肺炎患兒病情[14]；另外，CXCL8在咳嗽變異性哮喘（cough?variant?asthma，CVA）患者中水平較高，有望成為預(yù)測CVA的標(biāo)志物[15]。本研究結(jié)果顯示，治療前無效組的血清CXCL8水平高于有效組，提示血清CXCL8表達(dá)可能與PTB患者治療效果有關(guān)。分析原因，可能是MTB感染宿主后引起炎癥反應(yīng)，而白細(xì)胞介素-1β等炎癥因子的釋放可誘導(dǎo)、激活CXCL8，參與炎癥反應(yīng)并促使CXCL8遷移至MTB感染部分，引發(fā)免疫反應(yīng)，影響MTB清除，推測低水平CXCL8的患者對(duì)抗PTB藥物更為敏感，但具體原因需進(jìn)一步探究。另有研究顯示，新輔助化療后CXCL8表達(dá)是術(shù)后無進(jìn)展生存期的獨(dú)立影響因素，且新輔助化療后CXCL8表達(dá)對(duì)評(píng)估化療療效及預(yù)后有一定價(jià)值[16]。本研究利用ROC曲線分析血清CXCL8對(duì)PTB治療效果的預(yù)測價(jià)值，結(jié)果顯示血清CXCL8預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.877，當(dāng)血清CXCL8水平>230.95pg/ml時(shí)，PTB患者治療無效風(fēng)險(xiǎn)較高，提示檢測血清CXCL8水平有益于臨床預(yù)測PTB患者治療效果，對(duì)臨床治療PTB有一定指導(dǎo)意義。

RANTES是一種具有趨化作用的細(xì)胞因子，當(dāng)機(jī)體處于感染狀態(tài)時(shí)，其由上皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等釋放，可趨化T淋巴細(xì)胞等遷移至MTB感染部分，執(zhí)行免疫應(yīng)答功能，并參與結(jié)核肉芽腫形成，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，與PTB、哮喘等病變進(jìn)程關(guān)系密切[17-18]。研究發(fā)現(xiàn)，RANTES在肺癌中呈高水平，其與氧化應(yīng)激顯著相關(guān)，RANTES可能在肺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用[19]；黃成等[20]研究發(fā)現(xiàn)慢性阻塞性肺疾病（chronic?obstructive?pulmonary?disease，COPD）患者的RANTES水平較高，且與氣道炎癥程度相關(guān)，表明RANTES可能通過影響氣道炎癥反應(yīng)，進(jìn)而參與COPD病理發(fā)展。以上研究表明RANTES可能參與肺部疾病發(fā)病進(jìn)程。本研究結(jié)果顯示，治療前無效組的RANTES水平高于有效組，說明對(duì)PTB患者進(jìn)行治療后，機(jī)體炎癥反應(yīng)減輕，RANTES水平降低，且RANTES水平越低者治療效果較好。賈瑞等[21]研究發(fā)現(xiàn)，治療后慢性乙型肝炎患者的RANTES水平降低，其早期下降可預(yù)測治療48周乙肝表面抗原清除。本研究ROC分析結(jié)果顯示，血清RANTES預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.865，當(dāng)血清RANTES水平高于221.70pg/ml時(shí)，PTB患者治療無效的概率較大，提示RANTES對(duì)PTB患者治療效果有較高的預(yù)測價(jià)值，RANTES可能是預(yù)測PTB患者治療效果的有效指標(biāo)。

此外，為更好地預(yù)測PTB患者治療效果，本研究進(jìn)一步分析了CXCL8、RANTES聯(lián)合預(yù)測PTB患者治療效果的價(jià)值，結(jié)果顯示，二者聯(lián)合預(yù)測PTB患者治療效果的AUC為0.955，敏感度為94.0%，高于二者單獨(dú)預(yù)測，且特異性為85.4%，提示CXCL8、RANTES聯(lián)合可提高對(duì)PTB患者治療效果的預(yù)測價(jià)值，更有助于臨床預(yù)測PTB患者治療效果，為及時(shí)調(diào)整治療方案打下基礎(chǔ)。此外，Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，吸煙、外地戶籍、CXCL8水平升高，不施行全程督導(dǎo)的管理方式均可增加PTB患者治療無效的風(fēng)險(xiǎn)，提示血清CXCL8水平、吸煙、人口流動(dòng)、管理方式均可能與PTB患者治療效果有關(guān)，且檢測血清CXCL8有利于臨床預(yù)測PTB患者治療效果。

綜上所述，血清CXCL8、RANTES水平與PTB患者治療效果關(guān)系密切，CXCL8、RANTES均可輔助預(yù)測PTB患者治療效果，且二者聯(lián)合對(duì)PTB患者治療效果的預(yù)測價(jià)值更高，更有益于臨床評(píng)估PTB患者的治療效果。但本研究仍存在局限性，首先，本研究屬于單中心、小樣本，可能導(dǎo)致回歸分析結(jié)果出現(xiàn)偏差；其次，因樣本收集、經(jīng)費(fèi)、時(shí)間限制，未能比較PTB患者治療前后血清CXCL8、RANTES水平及耐藥基因?qū)χ委熜Ч挠绊?；最后，CXCL8、RANTES參與PTB治療效果的調(diào)控機(jī)制尚未明確，故后期將就此展開深入探究、分析。

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