基于JAK1/STAT3通路的壽胎丸對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)小鼠細(xì)胞自噬的影響

牟珍妮 ，申思楠 ，唐麗 ，劉瑩蝶 ，周紫薇 ，雷磊

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指與同一性伴侶在妊娠28周之前發(fā)生3次或以上的妊娠丟失[1]，是妊娠常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，給妊娠婦女造成極大身心痛苦。RSA的防治已成為國(guó)內(nèi)外生殖領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。因此，探索更加準(zhǔn)確、安全、有效的RSA診療方法是臨床亟需解決的難題。

RSA病因復(fù)雜，除染色體異常、解剖結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)分泌紊亂、免疫因素等已知原因外，目前仍有40%～60%患者病因不明[2]。細(xì)胞自噬是一種高度保守的細(xì)胞行為，可以為細(xì)胞修復(fù)損傷的細(xì)胞器提供能量，參與生物體發(fā)育、免疫反應(yīng)、代謝調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡和衰老等多種過(guò)程[3]。越來(lái)越多研究表明，細(xì)胞自噬與RSA密切相關(guān)[4-8]，但細(xì)胞自噬與RSA的具體作用關(guān)系尚存在爭(zhēng)議，且其參與RSA 的具體機(jī)制尚不清晰。JAK/STAT信號(hào)通路是RSA重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，該通路中轉(zhuǎn)錄因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）與細(xì)胞自噬密切相關(guān)。

壽胎丸出自《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，具有補(bǔ)腎安胎功效，壽胎丸聯(lián)合西藥治療不明原因RSA臨床療效顯著優(yōu)于單純西藥治療[9-10]?；A(chǔ)研究表明，壽胎丸具有改善黃體功能[11]，增強(qiáng)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、侵襲、遷移能力[12]，減少細(xì)胞凋亡等作用[13-17]。本研究通過(guò)建立RSA小鼠模型，觀察壽胎丸對(duì)RSA小鼠的妊娠保護(hù)作用，并從JAK1/STAT3信號(hào)通路和自噬角度探討其可能作用機(jī)制，為臨床治療RSA提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

40 只SPF 級(jí)雌性CBA/J 小鼠及15 只SPF 級(jí)雄性DBA/2小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，均購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2019-0008；5只雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2019-0004。動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，溫度（22±2）℃，濕度（50±5）%，自由攝食飲水，光照/黑暗周期12 h。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批（LL2021032501）。

1.2 藥物及制備

壽胎丸（菟絲子12 g，桑寄生6 g，續(xù)斷6 g，阿膠6 g），飲片購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科。取菟絲子、續(xù)斷、桑寄生飲片，加6～8倍量蒸餾水煎煮2 次，每次1.5 h，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.1～1.2（50～60 ℃）。加入乙醇使含醇量達(dá)65%，冷藏24 h，過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味。阿膠烊化，與濃縮后藥液合并，過(guò)濾，加蒸餾水稀釋至原藥材濃度為1.5 g/mL。地屈孕酮片，荷蘭Abbott Biologicals B.V.，批號(hào)364221，10 mg/片。取10 mg 地屈孕酮片溶于20 mL蒸餾水中，配制成0.5 mg/mL溶液。

1.3 主要試劑與儀器

小鼠孕酮、β-人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）ELISA試劑盒（上海撫生實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)分別為A119292-96T、A105057-96T），HE 染色液（白鯊生物，批號(hào)BL700B），BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（武漢伊萊瑞特，批號(hào)E-BC-K318-M），Janus 激酶1（JAK1）、p-JAK1、STAT3、p-STAT3 抗體（Affinity Biosciences，批號(hào)分別為AF5012、AF2012、AF6294、AF3293），ATG5抗體（成都正能生物技術(shù)有限公司，批號(hào)381320），Beclin1、LC3抗體（Proteintech，批號(hào)分別為11306-1-AP、14600-1-AP），超純總RNA提取試劑盒（杭州新景生物，批號(hào)5003050），反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR染料（蘇州近岸蛋白，批號(hào)分別為E047、E096）。

Gel Doc XR+凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司），Heraeus Fresco 17 型超速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），Cytation3型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek 公司），HM355S 型石蠟切片機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），T100TMThermal Cycler型RT-PCR 擴(kuò)增儀（美國(guó)Bio-Rad 公司），Mini-PROTEAN Tetra型電泳槽、Mini Trans-Blot型轉(zhuǎn)印槽（美國(guó)Bio-Rad公司），SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模

40只雌性CBA/J小鼠分別與15只雄性DBA/2小鼠和5只雄性BALB/c小鼠按2∶1合籠交配，前者建立RSA小鼠模型（30只），后者建立正常妊娠小鼠模型（10只）。于合籠次日早晨對(duì)雌鼠進(jìn)行陰道涂片，涂片出現(xiàn)大量精子或見(jiàn)陰道栓，記為妊娠第0日。

2.2 分組及給藥

將30只RSA模型小鼠隨機(jī)分為模型組、地屈孕酮組和壽胎丸組，每組10只；10只正常妊娠模型小鼠為空白組。妊娠第0日開始給藥，壽胎丸組予壽胎丸藥液12 g/kg灌胃，地屈孕酮組予地屈孕酮溶液4.55 mg/kg灌胃（相當(dāng)于60 kg成人等效劑量），模型組和空白組予等量生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)12 d。

2.3 取材

給藥結(jié)束后麻醉小鼠，摘眼球取血，靜置1 h，3 500 r/min離心15 min，取血清，于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。采血后將小鼠固定于鼠板，腹部做“U”形切口，打開腹腔，鈍性分離子宮，用眼科剪自宮角處打開子宮壁，小號(hào)彎鑷剝離胚胎及胎盤，分離著床部位蛻膜組織，每只小鼠取3個(gè)胚胎蛻膜組織和胎盤組織固定于多聚甲醛，余下蛻膜組織分裝于凍存管和離心管中，置于-80 ℃冰箱保存。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 胚胎丟失率

觀察胚胎形態(tài)，以胚胎體積明顯縮小，胎盤單位有明顯出血或壞死為胚胎丟失標(biāo)準(zhǔn)[18]，計(jì)算胚胎丟失率。胚胎丟失率（%）=丟失胚胎數(shù)÷總胚胎數(shù)×100%。

2.4.2 子宮臟器系數(shù)

稱量小鼠體質(zhì)量，分離子宮后稱量子宮質(zhì)量，計(jì)算子宮臟器系數(shù)。子宮臟器系數(shù)（%）=子宮質(zhì)量÷體質(zhì)量×100%。

2.4.3 HE染色

將蛻膜組織和胎盤組織從多聚甲醛中取出，梯度乙醇脫水后石蠟包埋，切片（厚度3 μm），烤片，脫蠟，蘇木素染色5 min，伊紅染色3 min，流水返藍(lán)，梯度乙醇復(fù)水，二甲苯透明后中性樹脂封片。采用顯微成像系統(tǒng)采集圖像。

2.4.4 ELISA檢測(cè)

按試劑盒說(shuō)明書配制標(biāo)準(zhǔn)品及樣品，依次加入樣品、酶標(biāo)試劑、洗滌液、顯色劑A、顯色劑B、終止液等試劑，酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm檢測(cè)各孔OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算血清孕酮和β-HCG含量。

2.4.5 Western blot檢測(cè)

將蛻膜組織制成勻漿，用含蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的RIPPA裂解液裂解，4 ℃、12 500 r/min離心15 min，取上清液，BCA法測(cè)定蛋白濃度，配制濃度為20 μg/μL的蛋白上樣液，依次進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、洗膜，加入JAK1一抗（1∶2 000）、p-JAK1一抗（1∶2 000）、STAT3一抗（1∶2 000）、p-STAT3一抗（1∶2 000）、ATG5一抗（1∶2 000）、Beclin1一抗（1∶5 000）、LC3一抗（1∶3 000），4 ℃震蕩孵育過(guò)夜。洗膜，二抗37 ℃震蕩孵育60 min。加ECL熒光底物顯色，曝光并采集圖片，分析蛋白表達(dá)量。

2.4.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

將蛻膜組織加入Trizol 研磨后用氯仿萃取RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。RT-PCR 反應(yīng)條件：95 ℃、3 min；95 ℃、10 s，58 ℃、5 s，共40個(gè)循環(huán)。生成擴(kuò)增曲線及熔解曲線，得出Ct 值，各目的基因的表達(dá)量以GAPDH為內(nèi)參基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，采用2-ΔΔCt法計(jì)算各基因相對(duì)表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表1。

表1 各基因PCR引物序列

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

4 結(jié)果

4.1 壽胎丸對(duì)模型小鼠胚胎丟失率的影響

正常組小鼠子宮體顏色淡紅，胚胎大小均勻、如串珠，胚胎無(wú)明顯瘀血及出血情況；模型組小鼠子宮顏色黯紅，胚胎發(fā)育不均勻，部分胚胎出現(xiàn)瘀血、壞死、吸收情況；地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠胚胎發(fā)育情況較模型組明顯改善，僅個(gè)別胚胎出現(xiàn)瘀血。見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠胚胎形態(tài)

除地屈孕酮組1只小鼠見(jiàn)陰栓而未妊娠外，其余小鼠均成功妊娠。與正常組比較，模型組小鼠胚胎丟失率顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠胚胎丟失率顯著降低（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠胚胎丟失率比較

4.2 壽胎丸對(duì)模型小鼠子宮臟器系數(shù)的影響

與空白組比較，模型組小鼠子宮臟器系數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠子宮臟器系數(shù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠子宮臟器系數(shù)比較（±s）

表3 各組小鼠子宮臟器系數(shù)比較（±s）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01

組別空白組模型組地屈孕酮組壽胎丸組子宮臟器系數(shù)/%10.66±2.85 6.01±2.48**9.15±2.25▲▲9.38±2.17▲▲只數(shù)10 10 9 10體質(zhì)量/g 25.30±2.04 23.18±0.87 25.25±2.39 25.98±1.44子宮質(zhì)量/g 2.67±0.59 1.39±0.57 2.33±0.73 2.43±0.52

4.3 壽胎丸對(duì)模型小鼠蛻膜組織和胎盤組織病理形態(tài)的影響

正常組小鼠蛻膜組織細(xì)胞呈卵圓形，排列緊密，胞質(zhì)豐富，核仁明顯，血管分布均勻，管壁完整；模型組小鼠蛻膜組織細(xì)胞排列雜亂，胞核固縮、部分消失，胞質(zhì)水腫，部分呈空泡樣變，血管分布較少；地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠胎盤組織細(xì)胞排列相對(duì)有序，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，僅有少量細(xì)胞水腫壞死，血管分布較均勻，管壁完整。見(jiàn)圖2。

圖2 各組小鼠蛻膜組織形態(tài)（HE染色，×200）

正常組小鼠胎盤組織致密，細(xì)胞排列整齊，形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞核呈橢圓形，胞質(zhì)充盈，血管豐富，分布均勻，管壁完整；模型組小鼠胎盤組織疏松，細(xì)胞排列雜亂，部分細(xì)胞增生肥大，胞核固縮，胞漿廣泛空泡樣變，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管分布較少；地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠胎盤組織細(xì)胞排列較整齊，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，僅少量細(xì)胞出現(xiàn)水腫、核固縮，血管分布較均勻。見(jiàn)圖3。

圖3 各組小鼠胎盤組織形態(tài)（HE染色，×200）

4.4 壽胎丸對(duì)模型小鼠血清孕酮、β-人絨毛膜促性腺激素含量的影響

與空白組比較，模型組小鼠血清孕酮、β-HCG含量顯著減少（P＜0.01）；與模型組比較，地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠血清孕酮、β-HCG 含量顯著增加（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組小鼠血清孕酮、β-HCG含量比較（±s）

表4 各組小鼠血清孕酮、β-HCG含量比較（±s）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

β-HCG/（pg/mL）1 996.89± 85.24 1 766.33± 58.41**1 903.74±139.35▲1 894.48± 95.19▲組別空白組模型組地屈孕酮組壽胎丸組只數(shù)6666孕酮/（ng/mL）2.78±0.04 2.54±0.08**2.67±0.06▲▲2.71±0.09▲▲

4.5 壽胎丸對(duì)模型小鼠蛻膜組織JAK1/STAT3 通路蛋白及自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組小鼠蛻膜組織p-JAK1、p-STAT3、ATG5、Beclin1蛋白表達(dá)及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）；與模型組比較，地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠蛻膜組織p-JAK1、p-STAT3、ATG5、Beclin1 蛋白表達(dá)及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。見(jiàn)圖4、表5。

圖4 各組小鼠蛻膜組織JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3、ATG5、Beclin1、LC3蛋白免疫印跡

表5 各組小鼠蛻膜組織JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3、ATG5、Beclin1、LC3蛋白表達(dá)比較（±s）

表5 各組小鼠蛻膜組織JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3、ATG5、Beclin1、LC3蛋白表達(dá)比較（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ1.98±0.54 0.91±0.25*2.05±0.72▲2.01±0.60▲組別空白組模型組地屈孕酮組壽胎丸組只數(shù)3333 p-JAK1/JAK1 0.94±0.07 0.52±0.07**0.92±0.15▲▲0.87±0.11▲▲p-STAT3/STAT3 0.72±0.16 0.26±0.10**0.64±0.06▲▲0.65±0.17▲▲ATG5/GAPDH 1.43±0.26 0.57±0.27*1.36±0.48▲1.42±0.34▲Beclin1/GAPDH 1.46±0.20 0.91±0.27*1.52±0.31▲1.45±0.27▲

4.6 壽胎丸對(duì)模型小鼠蛻膜組織JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表達(dá)的影響

與空白組比較，模型組小鼠蛻膜組織JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）；與模型組比較，地屈孕酮組和壽胎丸組小鼠蛻膜組織JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA 表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。見(jiàn)表6。

表6 各組小鼠蛻膜組織JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表達(dá)比較（±s）

表6 各組小鼠蛻膜組織JAK1、STAT3、ATG5、Beclin1 mRNA表達(dá)比較（±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別空白組模型組地屈孕酮組壽胎丸組Beclin1 1.00±0.09 0.13±0.02**0.81±0.05▲▲0.77±0.22▲▲只數(shù)3333 JAK1 1.02±0.23 0.26±0.12*0.70±0.05▲0.74±0.06▲STAT3 1.00±0.10 0.23±0.01*0.75±0.01▲▲0.76±0.04▲▲ATG5 1.02±0.25 0.23±0.03**0.77±0.10▲▲0.78±0.04▲▲

5 討論

RSA是女性妊娠常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，發(fā)病率約為1%～5%[1]。RSA 屬中醫(yī)學(xué)“滑胎”“數(shù)墮胎”范疇，具有屢孕屢墮及應(yīng)期而下的特點(diǎn)。腎主生殖，胞絡(luò)系于腎，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為滑胎本于腎虛所致沖任虛衰，胎失所養(yǎng)，胎結(jié)不實(shí)?！夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》壽胎丸是治療RSA的經(jīng)典方劑，由菟絲子、桑寄生、續(xù)斷、阿膠四藥組成。菟絲子滋補(bǔ)肝腎，益陰而固陽(yáng)；桑寄生補(bǔ)肝腎，養(yǎng)血而固沖任，安胎；續(xù)斷甘溫助陽(yáng)，補(bǔ)益肝腎、調(diào)理沖任、固本安胎；阿膠滋陰養(yǎng)血，止血。四藥合用，共奏補(bǔ)腎安胎功效。臨床和實(shí)驗(yàn)研究均表明，壽胎丸能改善RSA的妊娠結(jié)局[19-20]。本研究結(jié)果顯示，壽胎丸干預(yù)能明顯提高RSA小鼠的胚胎丟失率、子宮臟器系數(shù)，并能改善RSA小鼠蛻膜及胎盤組織病理狀態(tài)，提示壽胎丸對(duì)RSA 小鼠具有明顯的妊娠保護(hù)作用。

自噬通過(guò)泛素蛋白酶系統(tǒng)維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定，由雙層膜性結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)胞內(nèi)成分進(jìn)行包裹，之后通過(guò)與溶酶體結(jié)合從而將包裹的內(nèi)容物進(jìn)行分解、再利用[21-22]。研究發(fā)現(xiàn)，自噬反應(yīng)活性失調(diào)對(duì)妊娠期并發(fā)癥的發(fā)生存在不可忽視的影響[23]。卵母細(xì)胞受精、胚胎植入前后的發(fā)育，以及妊娠期并發(fā)癥均涉及自噬的誘導(dǎo)，當(dāng)滋養(yǎng)細(xì)胞早期處于炎癥、缺氧和營(yíng)養(yǎng)有限的環(huán)境下，自噬對(duì)其有重要的保護(hù)作用，利于其適應(yīng)早期發(fā)育的微環(huán)境[24-25]。有研究顯示，與正常妊娠孕婦胎盤絨毛組織相比，流產(chǎn)、子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限、妊娠期糖尿病等病理妊娠的孕婦胎盤絨毛組織均出現(xiàn)自噬過(guò)程受損[4，26-28]。ATG5、Beclin1、LC3是自噬過(guò)程中3種標(biāo)志性分子，其中ATG5和Beclin1是自噬體形成必需的蛋白，ATG5通過(guò)組成泛素化系統(tǒng)ATG5-ATG12-ATG16L介導(dǎo)自噬體的形成[29]，Beclin1通過(guò)參與組成PI3K復(fù)合體誘導(dǎo)細(xì)胞自噬[30]。當(dāng)自噬發(fā)生時(shí)，胞漿型LC3-Ⅰ會(huì)酶解掉一小段多肽轉(zhuǎn)變?yōu)槟ば蚅C3-Ⅱ，其轉(zhuǎn)化率增加與自噬小體數(shù)量增加有關(guān)，因此，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值大小可反映自噬水平高低[31]。本研究結(jié)果表明，RSA模型小鼠自噬相關(guān)分子ATG5、Beclin1蛋白及mRNA表達(dá)顯著降低，且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明顯下調(diào)，而壽胎丸組及地屈孕酮組均升高，說(shuō)明RSA與自噬過(guò)程受到抑制相關(guān)，而壽胎丸可能通過(guò)激活自噬起到妊娠保護(hù)作用。

自噬受多種信號(hào)通路調(diào)控，JAK/STAT通路是參與自噬的重要通路[32-33]。STAT3 是STAT 家族的重要成員，有研究顯示，在小鼠妊娠的胚胎著床期，p-STAT3在胚泡植入部位的子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)組織高表達(dá)，并且隨著胚胎著床過(guò)程的進(jìn)行，STAT3的表達(dá)及活化過(guò)程主要在蛻膜細(xì)胞內(nèi)，推測(cè)STAT3可能在子宮內(nèi)膜蛻膜化及胚胎著床過(guò)程中起關(guān)鍵作用。而敲除STAT3基因的小鼠在妊娠第7日胚胎即死亡[34]。本研究發(fā)現(xiàn)，RSA小鼠蛻膜組織p-JAK1、p-STAT3蛋白及mRNA表達(dá)降低，說(shuō)明JAK1/STAT3通路激活被抑制，而壽胎丸組和地屈孕酮組p-JAK1、p-STAT3蛋白及mRNA表達(dá)較模型組均顯著升高，表明壽胎丸可激活JAK1/STAT3通路，從而改善RSA小鼠的妊娠結(jié)局。

綜上所述，壽胎丸可能通過(guò)調(diào)控JAK1/STAT3信號(hào)通路激活自噬，改善RSA蛻膜組織及胎盤組織病理狀態(tài)、提高血清激素水平、降低胚胎丟失率，從而起到與地屈孕酮相似的保胎效果。但目前細(xì)胞自噬在RSA方面的研究仍處于起步階段，對(duì)細(xì)胞自噬涉及的相關(guān)通路及具體機(jī)制仍不完全明確，且細(xì)胞自噬在RSA方面的研究仍存在一定爭(zhēng)議，今后將進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)胞自噬在RSA中的作用機(jī)制及壽胎丸的干預(yù)作用。