連翹葉的化學(xué)成分研究

羅旋，沈霞，王薇，張東東*（. 咸陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，陜西 咸陽 7000；. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 7046）

連翹（Forsythiae Fructus）為木犀科（Oleaceae）連翹屬（Forsythia）植物連翹（Forsythia suspensa）的成熟干燥果實(shí)[1]，又稱旱連子、大翹子、空翹等[2]，文獻(xiàn)報(bào)道其主要化學(xué)成分為木脂素類、三萜類、黃酮類和苯乙醇苷類等[3-5]。連翹性涼味苦，具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗菌等藥理活性[6-7]。目前關(guān)于連翹的化學(xué)成分研究多集中于其果實(shí)和花，而連翹葉的化學(xué)成分研究并不系統(tǒng)[8]，為進(jìn)一步明確連翹葉的化學(xué)成分，為其臨床科學(xué)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。本文對(duì)其乙醇提取物的正丁醇萃取部位進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中共鑒定了7個(gè)化合物（結(jié)構(gòu)見圖1），分別為對(duì)羥基苯乙基-O-β-D-葡萄糖苷（1）、2-（4-羥基-3-甲氧基苯基）-乙基-O-β-D-葡萄糖苷（2）、（＋）-8-羥基松脂醇-4-O-β-葡萄糖苷（3）、異櫻花素-5-O-蕓香糖苷（4）、山柰酚（5）、槲皮素（6）和蘆丁（7），化合物1～4為首次從連翹葉中分離鑒定。

圖1 化合物1～7的結(jié)構(gòu)圖Fig 1 Chemical structures of compounds 1～7

1 材料

Avance400 核磁共振儀（Bruker公司）；島津LC-6AD半制備液相色譜儀（SPD-20A檢測器，日本島津公司）；6550Q-TOF 質(zhì)譜儀（美國安捷倫公司）；Ultimate XB-C18色譜柱（10 mm× 250 mm，5 μm，月旭科技上海股份有限公司）；恒溫水浴鍋（江蘇天翎有限公司）；Sephadex LH-20（美國GE公司）；薄層色譜硅膠、柱色譜用硅膠（青島海洋化工廠）；色譜甲醇和乙腈（Admas試劑公司）；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等均為分析純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

連翹葉于2019年9月采自陜西省咸陽市旬邑縣，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王薇教授鑒定為木犀科Oleaceae連翹屬Forsythia植物植物連翹Forsythia suspensa（Thunb）Vahl的干燥葉。標(biāo)本（編號(hào)：20190911LQ）保存于陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本館。

2 提取分離

干燥的連翹葉6.0 kg，粉碎后以80%乙醇回流提取3次，每次2 h。回收乙醇后濃縮至浸膏，加水稀釋，分別用乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取3次，得到乙酸乙酯部位88.5 g，正丁醇部位173.1 g。取正丁醇部位170 g，經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫（100∶0、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、7∶1、3∶1、2∶1和1∶1）薄層色譜檢測，合并相同流分后，得到A1～A11共11個(gè)組分。A4（13.2 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇-二氯甲烷（1∶1）洗脫，得到化合物5（31.8 mg）。A5（9.9 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，得到化合物6（17.6 mg）。A6（19.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，薄層色譜檢測合并后，得到A6-1～A6-7共7個(gè)組分。A6-4（0.4 g）經(jīng)半制備高效液相色譜分離，甲醇-水（44∶56）洗脫，流速1.5 ml·min－1，得到化合物1（8.5 mg，tR＝41.4 min）和2（13.2 mg，tR＝36.2 min）；A6-7（0.4 g）經(jīng)半制備HPLC分離，甲醇-水（20∶80）洗脫，流速1 mL·min－1，得到化合物3（6.9 mg，tR＝22.6 min）；A8（15.0 g）經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜分離，甲醇洗脫，TLC檢測合并后，得到A8-1～A8-5共5個(gè)組分。A8-4（0.5 g）經(jīng)半制備液相色譜分離，乙腈-水（18∶82）洗脫，流速2.0 mL·min－1，得到化合物4（7.1 mg，tR＝35.0 min）和化合物7（19.2 mg，tR＝38.4 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z301 [M＋H]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.74（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2，6），7.09（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，5），2.85（2H，t，J＝6.7 Hz，H-7），3.65（2H，m，H-8），4.32（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1'），3.17（1H，m，H-2'），3.29（1H，m，H-3'），3.34（1H，m，H-4'），3.41（1H，m，H-5'），3.60（1H，m，H-6'a），3.85（1H，m，H-6'b）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：156.7（C-1），116.1（C-2，6），130.7（C-3，5），131.0（C-4），36.3（C-7），71.6（C-8），104.3（C-1'），75.2（C-2'），77.8（C-3'），72.0（C-4'），77.9（C-5'），62.6（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[9]基本一致，故化合物1鑒定為對(duì)羥基苯乙基-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z331 [M＋H]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.67（1H，d，J＝8.4 Hz，H-2），6.64（1H，dd，J＝1.9，8.4 Hz，H-3），6.84（1H，d，J＝1.9 Hz，H-5），2.88（2H，t，J＝6.7 Hz，H-7），3.55（2H，m，H-8），3.66（3H，s，OCH3），4.31（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1'），3.16（1H，m，H-2'），3.25（1H，m，H-3'），3.35（1H，m，H-4'），3.43（1H，m，H-5'），3.63（1H，m，H-6'a），3.86（1H，m，H-6'b）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：148.8（C-1），113.7（C-2），116.0（C-3），131.5（C-4），122.5（C-5），145.9（C-6），36.3（C-7），71.7（C-8），104.3（C-1'），75.0（C-2'），78.0（C-3'），71.8（C-4'），77.9（C-5'），62.8（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[10]基本一致，故化合物2鑒定為2-（4-羥基-3-甲氧基苯基）-乙基-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z535 [MH]－，[α]20D＋10.4（c0.1，MeOH）。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.09（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），7.15（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），6.97（1H，dd，J＝1.8，8.2 Hz，H-6），4.71（1H，s，H-7），3.85（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9a），4.04（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9b），7.04（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2'），6.75（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5'），6.85（1H，dd，J＝1.8，8.1 Hz，H-6'），4.83（1H，s，H-7'），3.33（1H，m，H-8'），3.76（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9'a），4.45（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9'b），3.85（3H，s，3-OCH3），3.87（3H，s，3'-OCH3），4.85（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1''），3.34～3.70（6H，m，H-2''～H-6''）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：132.8（C-1），113.4（C-2），150.4（C-3），148.0（C-4），117.6（C-5），121.3（C-6），88.8（C-7），92.9（C-8），76.0（C-9），133.1（C-1'），111.2（C-2'），149.2（C-3'），147.8（C-4'），116.1（C-5'），120.5（C-6'），87.9（C-7'），62.3（C-8'），72.2（C-9'），56.6（3-OCH3），56.3（3'-OCH3），102.8（C-1''），74.9（C-2''），77.8（C-3''），71.2（C-4''），78.1（C-5''），62.4（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[11]基本一致，故化合物3鑒定為（＋）-8-羥基松脂醇-4-O-β-葡萄糖苷。

化合物4：淡黃色粉末，ESI-MSm/z593 [MH]－。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.43（1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-2），2.76（1H，m，H-3a），3.15（1H，m，H-3b），6.20（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），6.18（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），7.43（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2'，6'），6.95（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3'，5'），3.79（3H，s，4'-OCH3），4.93（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1''），3.29～3.73（6H，m，H-2''～6''），4.65（1H，br s，H-1'''），3.33～3.69（4H，m，H-2''～5''），1.18（3H，d，J＝6.5 Hz，H-6'''）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：78.8（C-2），41.7（C-3），196.9（C-4），163.5（C-5），96.5（C-6），165.4（C-7），95.6（C-8），163.0（C-9），103.5（C-10），130.5（C-1'），127.6（C-2'，6'），113.6（C-3'，5'），160.0（C-4'），54.4（4'-OCH3），100.8（C-1''），75.6（C-2''），76.6（C-3''），71.0（C-4''），76.4（C-5''），66.1（C-6''），99.6（C-1'''），70.8（C-2'''），70.6（C-3'''），72.6（C-4'''），68.4（C-5'''），16.4（C-6'''）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[12]基本一致，故化合物4鑒定為異櫻花素-5-O-蕓香糖苷。

化合物5：黃色粉末，ESI-MSm/z287 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.19（1H，d，J＝1.9 Hz，H-6），6.39（1H，d，J＝1.9 Hz，H-8），8.13（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2'，H-6'），6.93（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3'，H-5'）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：146.6（C-2），135.9（C-3），175.7（C-4），156.8（C-5），97.8（C-6），164.2（C-7），93.3（C-8），161.2（C-9），103.4（C-10），122.3（C-1'），129.5（C-2'），114.8（C-3'），159.3（C-4'），114.9（C-5'），129.5（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[13]基本一致，故化合物5鑒定為山柰酚。

化合物6：黃色粉末，ESI-MSm/z301 [MH]－。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.49（1H，br s，5-OH），6.19（1H，d，J＝1.9 Hz，H-6），6.40（1H，d，J＝1.9 Hz，H-8），7.67（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.88（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5'），7.53（1H，dd，J＝2.0，8.5 Hz，H-6'）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：147.1（C-2），136.0（C-3），176.4（C-4），161.0（C-5），98.7（C-6），164.4（C-7），93.9（C-8），156.4（C-9），103.6（C-10），122.5（C-1'），115.6（C-2'），147.3（C-3'），145.4（C-4'），115.6（C-5'），120.3（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[14]基本一致，故化合物6鑒定為槲皮素。

化合物7：黃色粉末，ESI-MS：m/z611 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.56（1H，br s，5-OH），6.18（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.35（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.53（2H，d，J＝8.4 Hz，H-2'，6'），6.83（2H，d，J＝8.4 Hz，H-3'，5'），5.31（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1''），3.22～3.73（6H，m，H-2''～6''），4.36（1H，br s，H-1'''），3.05～3.68（4H，m，H-2'''～5'''），1.00（3H，d，J＝6.4 Hz，H-6'''）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.4（C-4），161.3（C-7），160.2（C-5），157.5（C-9），156.6（C-2），148.5（C-4'），144.9（C-3'），133.3（C-3），121.7（C-1'），121.2（C-6'），117.1（C-5'），116.2（C-2'），100.9（C-10），98.8（C-6），93.7（C-8），100.8（C-1''），74.1（C-2''），76.5（C-3''），70.4（C-4''），75.9（C-5''），67.0（C-6''），100.6（C-1'''），70.0（C-2'''），70.6（C-3'''），71.9（C-4'''），68.3（C-5'''），17.8（C-6'''）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[15]基本一致，故化合物7鑒定為蘆丁。

4 討論

本研究從連翹葉中共分離鑒定了7個(gè)化合物，包括2個(gè)苯乙醇苷類，1個(gè)木脂素類和 4個(gè)黃酮類化合物，其中化合物1～4為首次從連翹葉中分離得到，可為連翹葉的臨床應(yīng)用提供參考，關(guān)于所得化合物后續(xù)藥理活性篩選需繼續(xù)深入研究。