柳葉蒿地上部分中酚酸類成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定

高茜，楊丁山，阮靜雅，張雅琦，王濤，張祎（天津中醫(yī)藥大學(xué) 天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津 301617）

柳葉蒿（Artemisia integrifoliaL.）為菊科（Compositae）蒿屬（Artemisia）多年生草本植物，別名柳蒿，主要分布于我國吉林省長白山、內(nèi)蒙古呼倫貝爾及黑龍江大興安嶺東部等地區(qū)，多生于低海拔或中海拔濕潤或半濕潤地區(qū)。其性寒、味苦，以全草入藥，具有清熱解毒之功效[1]。作為藥食兩用植物，其嫩枝葉（柳蒿芽）既可炒食、做湯菜，也可做成即食調(diào)味醬、香醋、發(fā)酵酒等；成熟的地上部分還可腌制成咸菜，或者晾曬成干菜食用，具有豐富的營養(yǎng)價值；臨床常用于治療肝炎、糖尿病、高血壓、高血脂等多種疾病[2]。民間用藥以及現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柳葉蒿全草和地上部分均具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗菌、降血脂、調(diào)節(jié)免疫等多種作用[2-3]，其化學(xué)成分主要為黃酮、奎寧酸酯、萜類及揮發(fā)油等[4]。目前對于柳葉蒿的研究多集中于黃酮類化合物，而對于其酚酸類化合物鮮有報道。為了進(jìn)一步明確其物質(zhì)基礎(chǔ)，本文對柳葉蒿地上部分的70%乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，共從中分離鑒定了14個酚酸類化合物，分別為苯甲醇-7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、金盞菊苷A（2）、對羥基苯甲酸（3）、原兒茶醛（4）、原兒茶酸（5）、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸（6）、丁香酸（7）、丁香酸葡萄糖苷（8）、云杉苷（9）、scolochinenoside B（10）、2，6-羥基-4-甲氧基苯乙酮-2'-O-β-葡萄糖苷（11）、2-甲氧基-4-（2-烯丙基）苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷（12）、4-烯丙基-2，6-二甲氧基苯基葡萄糖苷（13）和二氫丁香苷（14）。所有化合物均為首次從柳葉蒿中分離得到，其中化合物1、2、10、13和14為首次從蒿屬植物中分離得到。

1 儀器與試藥

液質(zhì)聯(lián)用儀（UHPLC：Ultimate 3000、MS：Q-Orbitrap，美國Thermo Fisher Scientific公司）；超導(dǎo)核磁共振波譜儀（Burker 500、600 NMR，德國Bruker公司）。大孔吸附樹脂（凈品級，天津海光化工有限公司）；正相柱色譜用硅膠（48～75 μm，青島海洋化工廠）；反相ODS（YMC*Gel ODS-A-HG，S-50μm，日本YMC株式會社）、高效液相色譜法（HPLC）用分析柱及制備柱[Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ柱（250 mm×4.6 mm，250 mm×20 mm，5 μm，日本Nacalai Tesque公司]；氘代甲醇（CD3OD）等氘代試劑（北京崇熙科技孵化器公司）；分析及色譜純二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、乙腈、冰醋酸等試劑（天津康科德科技有限公司）；薄層色譜高效硅膠GF254（天津思利達(dá)科技有限公司）。

柳葉蒿于2020年9月采自吉林省伊通滿族自治縣縣黃嶺子村，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院馬琳教授鑒定為菊科（Compositae）蒿屬（Artemisia）植物柳葉蒿（Artemisia integrifoliaL.）的干燥地上部分。

2 提取分離

干燥的柳葉蒿地上部分（5.0 kg）經(jīng)70%乙醇加熱回流提取3次，依次為3、2、2 h，減壓回收溶劑，得到70%乙醇提取物（1.0 kg）。該提取物（920.0 g）經(jīng)乙酸乙酯-水（體積比1∶1）萃取3次，得到乙酸乙酯萃取物（AIE，187.3 g）和水萃取物（703.1 g）。水萃取物經(jīng)D101大孔吸附樹脂分離，依次用水和95%乙醇溶液洗脫，得到水洗脫物（391.6 g）和95%乙醇洗脫物（AIH，123.0 g）。AIE（150.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，得到15個組分（AIE 1～AIE 15），再經(jīng)ODS以及制備型HPLC等現(xiàn)代分離技術(shù)分離純化，得到化合物1（12.5 mg）、3（15.0 mg）、4（7.9 mg）、5（12.0 mg）、6（15.0 mg）、7（7.5 mg）、8（3.0 mg）、9（11.5 mg）、10（3.3 mg）、12（19.1 mg）和13（35.3 mg）。AIH（90.0 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，得到AIH 1～AIH 13，再經(jīng)ODS以及制備型HPLC等現(xiàn)代分離技術(shù)分離純化，得到化合物2（25.2 mg）、11（12.6 mg）和14（51.7 mg）。化合物1～14的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 化合物1～14的結(jié)構(gòu)Fig 1 Structures of compound 1～14

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C18H26O10（m/z447.149 29 [M＋COOH]－；calcd for C19H27O12，Mr＝447.149 70）。1H NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.42（2H，brd，J＝7.2 Hz，H-2，6），7.32（2H，類三重峰，J＝7.2 Hz，H-3，5），7.26（1H，類三重峰，J＝7.2 Hz，H-4），[4.66（1H，d，J＝12.0 Hz），4.91（1H，d，J＝12.0 Hz），H2-7]，4.36（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.25～4.15（11H，m，H-2'～H-6'和H-2''～H-5''），4.34（1H，d，J＝6.6 Hz，H-1''）。13C NMR（CD3OD，150 MHz）δ：139.2（C-1），129.3（C-2，6），129.2（C-3，5），128.7（C-4），72.0（C-7），103.4（C-1'），75.1（C-2'），78.0（C-3'），71.7（C-4'），77.0（C-5'），69.5（C-6'），105.3（C-1''），72.4（C-2''），74.2（C-3''），69.6（C-4''），66.8（C-5''）。以上與文獻(xiàn)[5]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為苯甲醇-7-O-α-L-吡喃阿拉伯糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C22H22O11（m/z461.108 73 [M －H]－；calcd for C22H21O11，Mr＝461.107 84）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.32（1H，brd，J＝8.5 Hz，H-3），7.40（1H，類三重峰，J＝8.0、8.5 Hz，H-4），7.08（1H，類三重峰，J＝8.0 Hz，H-5），7.81（1H，brd，J＝8.5 Hz，H-6），4.91（1H，d，J＝8.0 Hz，H-1'），3.43～4.59（6H，m，H-2'～H-6'），7.06（1H，brs，H-2''），6.80（1H，d，J＝7.5 Hz，H-5''），6.96（1H，brd，J＝8.0 Hz，H-6''），7.58（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7''），6.30（1H，d，J＝16.0 Hz，H-8''）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：134.9（C-1），158.6（C-2），119.2（C-3），134.9（C-4），124.0（C-5），132.5（C-6），169.9（C-7），104.3（C-1'），74.9（C-2'），77.5（C-3'），71.7（C-4'），75.9（C-5'），64.6（C-6'），127.8（C-1''），115.2（C-2''），146.9（C-3''），149.7（C-4''），116.6（C-5''），123.1（C-6''），147.3（C-7''），115.0（C-8''），169.0（C-9''）。以上與文獻(xiàn)[6]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為金盞菊苷A。

化合物3：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C7H6O3（m/z137.023 09 [M －H]－；calcd for C7H5O3，Mr＝137.023 32）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.87（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3，5）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.9（C-1），133.0（C-2，6），116.1（C-3，5），163.4（C-6），170.2（C-7）。以上與文獻(xiàn)[7]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為對羥基苯甲酸。

化合物4：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C7H6O3（m/z137.023 41 [M －H]－；calcd for C7H5O3，Mr＝137.023 32）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.32（1H，brs，H-2），6.93（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），7.33（1H，brd，J＝8.5 Hz，H-6），9.72（1H，s，7-CHO）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：130.8（C-1），115.4（C-2），147.3（C-3），153.9（C-4），116.3（C-5），126.5（C-6），193.1（C-7）。以上與文獻(xiàn)[8]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為原兒茶醛。

化合物5：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C7H6O4（m/z153.018 60 [M－H]－；calcd for C7H5O4，Mr＝153.018 24）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.46（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2），6.81（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），7.44（1H，dd，J＝2.0、8.0 Hz，H-6）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：123.4（C-1），117.8（C-2），146.1（C-3），151.5（C-4），115.8（C-5），123.9（C-6），170.5（C-7）。以上與文獻(xiàn)[9]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為原兒茶酸。

化合物6：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C8H8O4（m/z167.033 89 [M －H]－；calcd for C8H7O4，Mr＝167.033 89）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.55（1H，brs，H-2），6.83（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5），7.56（1H，brd，J＝8.5 Hz，H-6），3.89（3H，s，3-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：123.1（C-1），113.8（C-2），148.7（C-3），152.7（C-4），115.9（C-5），125.3（C-6），170.1（C-7），56.4（3-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[7]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為3-甲氧基-4-羥基苯甲酸。

化合物7：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C9H10O5（m/z197.044 56 [M －H]－；calcd for C9H9O5，Mr＝197.044 45）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.33（2H，s，H-2，6），3.88（6H，s，3，5-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.2（C-1），108.4（C-2，6），148.9（C-3，5），141.7（C-4），170.2（C-7），56.8（3，5-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[10]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為丁香酸。

化合物8：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C15H20O10（m/z359.098 57 [M －H]－；calcd for C15H19O10，Mr＝359.097 27）。1H NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.35（2H，s，H-2，6），5.07（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1'），3.18～3.80（6H，m，H-2'～H-6'），3.88（6H，s，3，5-OCH3）。13C NMR（CD3OD，150 MHz）δ：128.1（C-1），108.5（C-2，6），154.1（C-3，5），139.9（C-4），169.7（C-7），104.5（C-1'），75.7（C-2'），77.9（C-3'），71.3（C-4'），78.5（C-5'），62.5（C-6'），57.0（3，5-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[11]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為丁香酸葡萄糖苷。

化合物9：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C14H18O7（m/z333.075 44 [M ＋Cl]－；calcd for C14H18O7Cl，Mr＝333.073 56）。1H NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.97（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2，6），7.16（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3，5），2.56（3H，s，H3-8），5.03（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1'），3.37～3.93（6H，m，H-2'～H-6'）。13C NMR（CD3OD，150 MHz）δ：132.7（C-1），131.7（C-2，6），117.3（C-3，5），163.1（C-4），199.5（C-7），26.5（C-8），101.6（C-1'），74.8（C-2'），78.0（C-3'），71.3（C-4'），78.3（C-5'），62.5（C-6'）。以上與文獻(xiàn)[12]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為云杉苷。結(jié)合HSQC譜中給出的碳?xì)湎嚓P(guān)信號以及1H NMR譜中H-3'和H-5'的裂分情況（H-5'裂分為ddd峰，H-3'裂分為dd峰），對文獻(xiàn)中C-3'與C-5'的化學(xué)位移值進(jìn)行了調(diào)換。

化合物10：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C21H22O9（m/z417.119 78 [M－H]－；calcd for C21H21O9，Mr＝417.118 01）。1H NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.78（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2，6），7.09（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3，5），2.50（3H，s，H3-8），5.03（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.39～4.67（6H，m，H-2'～H-6'），7.90（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2''，6''），6.84（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3''，5''）。13C NMR（CD3OD，150 MHz）δ：132.5（C-1），131.5（C-2，6），117.2（C-3，5），162.7（C-4），199.3（C-7），26.5（C-8），101.2（C-1'），74.8（C-2'），77.9（C-3'），72.1（C-4'），75.7（C-5'），64.9（C-6'），121.9（C-1''），133.1（C-2''，6''），116.3（C-3''，5''），164.1（C-4''），167.8（C-7''）。以上與文獻(xiàn)[13]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為scolochinenoside B。

化合物11：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C15H20O9（m/z343.102 91 [M－H]－；calcd for C15H19O9，Mr＝343.102 36）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.30（1H，d，J＝1.5 Hz，H-3），6.10（1H，d，J＝1.5 Hz，H-5），2.71（3H，s，H3-8），5.06（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1'），3.35～3.93（6H，m，H-2'～H-6'），3.81（3H，s，4-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：107.6（C-1），162.3（C-2），94.8（C-3），167.6（C-4），96.5（C-5），167.7（C-6），205.2（C-7），33.6（C-8），102.2（C-1'），74.8（C-2'），78.5（C-3'），71.3（C-4'），78.6（C-5'），62.5（C-6'），56.2（4-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[14]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為2，6-羥基-4-甲氧基苯乙酮-2'-O-β-葡萄糖苷。

化合物12：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C16H22O7（m/z371.135 22 [M＋COOH]－；calcd for C17H23O9，Mr＝371.133 66）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.82（1H，d，J＝2.0 Hz，H-3），6.72（1H，dd，J＝2.0、8.5 Hz，H-5），7.08（1H，d，J＝8.5 Hz，H-6），3.33（1H，m，H-7），5.95（1H，m，H-8），[5.02（1H，dd，J＝1.5、10.5 Hz），5.06（1H，dd，J＝1.5、17.0 Hz），H2-9]，4.84（1H，d，J＝7.0 Hz，H-1'），3.35～3.90（6H，m，H-2'～H-6'），3.83（3H，s，2-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：146.4（C-1），150.8（C-2），114.2（C-3），136.5（C-4），122.1（C-5），118.3（C-6），40.8（C-7），139.0（C-8），115.9（C-9），103.1（C-1'），75.0（C-2'），77.9（C-3'），71.4（C-4'），78.2（C-5'），62.5（C-6'），56.7（2-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[15]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為2-甲氧基-4-（2-烯丙基）苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物13：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C17H24O8（m/z401.145 78 [M＋COOH]－；calcd for C18H25O10，Mr＝401.144 22）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.52（2H，s，H-3，5），3.33（1H，m，H-7），5.94（1H，m，H-8），[5.05（1H，dd，J＝1.0、10.0 Hz），5.09（1H，dd，J＝1.0、17.5 Hz），H2-9]，4.81（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1'），3.38～3.80（6H，m，H-2'～H-6'），3.82（6H，s，2，6-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：134.7（C-1），154.2（C-2，6），107.5（C-3，5），138.4（C-4），41.4（C-7），138.7（C-8），116.2（C-9），105.6（C-1'），75.7（C-2'），77.8（C-3'），71.3（C-4'），78.3（C-5'），62.6（C-6'），57.0（2，6-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[16]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為4-烯丙基-2，6-二甲氧基苯基葡萄糖苷。結(jié)合1H NMR譜中H-3'和H-5'的裂分情況（H-5'裂分為m峰，H-3'裂分為dd峰）以及HSQC譜中給出的碳?xì)湎嚓P(guān)信號，對文獻(xiàn)中C-3'與C-5'的化學(xué)位移值進(jìn)行了調(diào)換。

化合物14：白色粉末。HR-ESI-MS測定其分子式為C17H26O9（m/z419.155 24 [M＋COOH]－；calcd for C18H27O11，Mr＝419.154 79）。1H NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.55（2H，s，H-2，6），2.63（2H，t，J＝7.5 Hz，H2-7），1.82（2H，類五重峰，J＝7.0 Hz，H2-8），3.57（2H，t，J＝6.5 Hz，H2-9），4.80（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1'），3.18～3.80（6H，m，H-2'～H-6'），3.83（6H，s，3，5-OCH3）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）δ：140.5（C-1），107.5（C-2，6），154.1（C-3，5），134.5（C-4），33.4（C-7），35.4（C-8），62.2（C-9），105.7（C-1'），75.7（C-2'），77.8（C-3'），71.3（C-4'），78.3（C-5'），62.6（C-6'），57.1（3，5-OCH3）。以上與文獻(xiàn)[17]報道數(shù)據(jù)基本一致，鑒定該化合物為二氫丁香苷。

4 結(jié)果與討論

本文采用多種色譜和波譜技術(shù)相結(jié)合的方法，從柳葉蒿地上部分分離鑒定出了14個酚酸類成分。通過SciFinder檢索，確定所有化合物均為首次從柳葉蒿中分離得到，其中化合物1、2、10、13和14為首次從蒿屬植物中分離得到，進(jìn)一步豐富了柳葉蒿的物質(zhì)基礎(chǔ)。