胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變與NSCLC患者>外周血NLR、LMR的關(guān)系

南陽(yáng)光, 朱曉明, 付海琴, 江美兵, 唐偉, 周俊

宣城市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科,安徽宣城 242000

目前,靶向治療逐漸發(fā)展成為治療非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的主要手段,吉非替尼治療表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因具有敏感突變的局部晚期NSCLC或轉(zhuǎn)移性NSCLC效果顯著[1]。多數(shù)NSCLC患者因各種因素導(dǎo)致難以對(duì)腫瘤組織進(jìn)行EGFR基因檢測(cè),故尋找EGFR檢測(cè)的替代組織樣本具有重要臨床意義。胸腔積液采集方便,對(duì)患者影響較小,因此胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因檢測(cè)逐漸被應(yīng)用于臨床,但其與肺癌腫瘤組織樣本可能存在差異[2]。既往研究報(bào)道,外周血中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值(neutrophil/lymphocyte ratio,NLR)、淋巴細(xì)胞/單核細(xì)胞比值(lymphocyte/monocyte ratio,LMR)在鑒別肺腺癌EGFR基因突變及病理亞型方面有一定的參考價(jià)值[3]?；诖?本研究擬探討胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變狀態(tài)與NSCLC患者外周血NLR、LMR水平的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2020年4月—2022年4月收治的伴有胸腔積液的NSCLC患者82例,男45例,女37例,年齡(62.14±7.07)歲,吸煙史40例;根據(jù)患者是否有胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變分為突變組和野生組。納入標(biāo)準(zhǔn):符合NSCLC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],經(jīng)病理確診為NSCLC;均可進(jìn)行肺部穿刺采集胸腔積液;患者及其家屬愿意配合完成本研究,并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):入組前已接受放化療或分子靶向治療;存在其他惡性腫瘤史;存在其他感染性疾病;存在血液系統(tǒng)障礙疾病;存在自身免疫性疾病。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已對(duì)本研究進(jìn)行審核,并批準(zhǔn)通過(guò)。收集所有患者性別、年齡、吸煙史、病理分型、腫瘤位置等臨床資料。

1.2 Sanger測(cè)序法檢測(cè)EGFR基因突變

入組后抽取新鮮胸腔積液樣本15 mL,2 000 r/min離心10 min,去除上清液,保留沉渣。將沉渣進(jìn)行石蠟包埋,切取石蠟切片,經(jīng)HE染色及免疫組化染色后高倍鏡下觀察有無(wú)腫瘤細(xì)胞。使用Qiagen DNA提取試劑盒提取胸腔積液癌細(xì)胞DNA,采用紫外分光光度儀進(jìn)行檢測(cè)。采用Sanger測(cè)序法檢測(cè)EGFR基因18～21外顯子突變。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書執(zhí)行。

1.3 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血NLR、LMR水平

入組后采集空腹靜脈血5 mL,使用貝克曼LH 750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)水平,試劑盒均為貝克曼配套試劑盒。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書執(zhí)行。計(jì)算NLR和LMR水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床特征的比較

82例NSCLC患者中胸腔積液癌細(xì)胞出現(xiàn)EGFR突變共24例(29.27%),其中18外顯子點(diǎn)突變2例,19外顯子缺失突變7例,20外顯子點(diǎn)突變3例,21外顯子點(diǎn)突變12例。EGFR基因突變與腫瘤位置有關(guān)系,周圍型者EGFR基因突變率較中央型高(P<0.05;表1),與其他臨床特征無(wú)關(guān)系(P>0.05;表1)。

表1 兩組臨床特征的比較

2.2 EGFR基因突變與外周血NLR、LMR水平的關(guān)系

EGFR基因突變型者外周血NLR水平低于野生型者,LMR水平高于野生型者(P<0.05;表1)。ROC曲線分析以截?cái)嘀禐榕R界水平,將患者分為NLR低水平和高水平、LMR高水平和低水平,NLR低水平、LMR高水平患者胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變率較高(P<0.05;表2)。

表2 EGFR基因突變與外周血NLR、LMR水平的關(guān)系 例(%)

2.3 ROC曲線分析NLR、LMR診斷EGFR基因突變的效能

以是否EGFR基因突變?yōu)闋顟B(tài)變量(EGFR突變型=1,EGFR野生型=0),NLR、LMR為檢驗(yàn)變量,ROC曲線分析顯示(圖1),NLR診斷EGFR基因突變的曲線下面積(area under curve,AUC)為0.731(95%CI 0.622～0.823),約登指數(shù)為0.468,截?cái)嘀禐?.02,靈敏度為91.67%,特異度為55.17%。LMR診斷EGFR基因突變的AUC為0.743(95%CI 0.635～0.833),約登指數(shù)為0.385,截?cái)嘀禐?.50,靈敏度為83.33%,特異度為55.17%。

圖1 外周血NLR、LMR診斷EGFR基因突變的ROC曲線圖

3 討 論

靶向治療是肺癌領(lǐng)域在近10年來(lái)突出的進(jìn)展,也就是針對(duì)肺癌細(xì)胞本身特有的基因變化采用的治療手段[5]。EGFR基因靶向治療藥物的出現(xiàn)給晚期NSCLC的治療帶來(lái)革命性變化。EGFR-TKI已成為EGFR敏感突變NSCLC患者的一線(首選)標(biāo)準(zhǔn)治療方案[6]。手術(shù)切除標(biāo)本是檢測(cè)EGFR基因突變的最佳樣本,但是對(duì)于晚期病人缺乏手術(shù)的指征,不能通過(guò)手術(shù)獲取切除標(biāo)本,因此,尋找能夠替代進(jìn)行EGFR檢測(cè)的有效樣本已成為臨床研究的熱點(diǎn)。胸腔積液是晚期肺癌患者常見的并發(fā)癥之一,胸水標(biāo)本獲取比較簡(jiǎn)單、安全。國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道,惡性腫瘤患者胸腔積液可用于EGFR基因突變檢測(cè),其結(jié)果可指導(dǎo)臨床EGFR-TKI使用[7-8]。本研究對(duì)82例NSCLC患者胸腔積液癌細(xì)胞進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),EGFR總突變率為29.27%,且21外顯子點(diǎn)突變比例最高。

本研究發(fā)現(xiàn),胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變與患者性別、年齡、吸煙史、病理分型無(wú)顯著關(guān)系,與腫瘤位置相關(guān),周圍型NSCLC患者胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變率較中央型高。梅馨方等[9]的研究報(bào)道,女性、未吸煙、腺癌、周圍型NSCLC患者更易發(fā)生EGFR基因突變。本研究與上述報(bào)道部分一致,可能是由于本研究為胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因檢測(cè),可能與腫瘤組織差異有一定的關(guān)系,且本次納入樣本數(shù)量較少,也可能存在數(shù)據(jù)偏倚,后期需進(jìn)一步采用多中心、大樣本臨床試驗(yàn)進(jìn)行深入驗(yàn)證。

NLR、LMR是系統(tǒng)性炎癥的簡(jiǎn)單生物標(biāo)志物,目前已被證實(shí)是包括前列腺癌、腎癌、胃癌、腦癌和胸腺上皮性腫瘤在內(nèi)的幾種實(shí)體癌的預(yù)后標(biāo)志物[10]。本研究發(fā)現(xiàn),EGFR基因突變型患者外周血NLR水平低于EGFR基因野生型,LMR水平高于EGFR基因野生型,與徐朝娜等[11]報(bào)道基本一致,提示胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變狀態(tài)與外周血NLR、LMR水平存在一定關(guān)聯(lián)。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示,外周血NLR、LMR水平對(duì)EGFR基因突變有較好診斷價(jià)值,進(jìn)一步提示控制胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變可能會(huì)對(duì)NSCLC患者病情發(fā)展起到一定控制作用。

本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示,NLR低水平、LMR高水平患者胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變率較高,再次提示胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變狀態(tài)與NSCLC患者外周血NLR、LMR水平有一定的關(guān)系。既往研究報(bào)道,炎癥指標(biāo)LMR、NLR與NSCLC患者EGFR突變具有相關(guān)性,LMR對(duì)EGFR突變有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值,且優(yōu)于NLR[12]。本研究結(jié)合上述報(bào)道,提示外周血NLR、LMR水平可能會(huì)對(duì)EGFR基因突變?cè)斐梢欢ㄓ绊?但具體作用機(jī)制仍需后期驗(yàn)證。

綜上所述,胸腔積液癌細(xì)胞EGFR基因突變狀態(tài)與NSCLC患者外周血NLR、LMR水平可能存在一定的關(guān)聯(lián),且NLR低水平者、LMR高水平者更易發(fā)生EGFR基因突變。本研究為單中心研究、樣本數(shù)量較少,可能存在數(shù)據(jù)偏倚,后期需深入探討。