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    冠心病伴2型糖尿病患者外周血miR-6089水平與冠狀動脈狹窄程度的關(guān)系

    2023-06-06 01:51:20曹麗慧孟憲杰
    關(guān)鍵詞:冠心病糖尿病水平

    曹麗慧, 孟憲杰

    唐山市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科,河北唐山 063001

    隨著生活節(jié)奏加快、人口老齡化進展,中國心血管疾病的發(fā)病人數(shù)逐漸增加,心血管疾病占死亡原因第一名[1]。近年來臨床關(guān)于糖尿病與心血管疾病間關(guān)系的研究逐漸增多,糖尿病患者的心血管疾病發(fā)生率明顯高于非糖尿病患者,且全因死亡率更高,血糖升高是心血管疾病發(fā)生的危險因素[2]。血管平滑肌細胞增殖、遷移被認為是冠狀動脈狹窄的重要因素,分析血管平滑肌細胞增生的基因表達對防治冠狀動脈狹窄有重要意義[3]。miRNA在細胞增殖、遷移、侵襲、分化及轉(zhuǎn)移等多種病理、生理過程中具有重要作用,其中miR-6089是細胞周期調(diào)控因子下游小RNA,可通過靶向肌球蛋白重鏈9以激活Wnt/β-catenin信號通路,具有抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用,是潛在的腫瘤抑制因子[4]。本研究選取本院冠心病伴2型糖尿病患者,旨在分析miR-6089與冠狀動脈狹窄關(guān)系,為臨床防治提供依據(jù),現(xiàn)報告如下。

    1 資料和方法

    1.1 研究對象

    選取2020年4月—2022年3月本院冠心病伴2型糖尿病患者183例為研究對象,其中男98例,女85例;年齡46~73歲,平均(59.19±6.08)歲。所有患者均符合冠心病[5]、2型糖尿病[6]診斷標準,至少存在一支主要冠狀動脈直徑狹窄≥50%,均排除合并免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、甲狀腺功能亢進/減退、心力衰竭、急慢性感染、腫瘤。

    1.2 miR-6089檢測

    采集外周血3 mL,采用臺式離心機分離血漿,取血漿樣本200 μL,加入QIAzol裂解試劑1 mL,振蕩30 s,室溫下孵育5 min;EP試管內(nèi)加入氯仿200 μL與混合樣本,用力搖晃15 s,室溫下孵育3 min,4 ℃ 3 000 r/min離心15 min,取上層清液至新的EP管,添加1.5倍100%乙醇,上下顛倒混勻;吸取700 μL樣本至裝有離心柱的2 mL EP試管,室溫下3 000 r/min離心15 s,其余樣本重復(fù)本操作;樣本洗脫RNA并提取,確保RNA濃度、純度合格后進行反轉(zhuǎn)錄,采用實時定量熒光PCR法檢測,正向引物:5′-CCAGCCTCCGAGGGCAGA-3′,反向引物:5′-TCCCTCCAGCAGTGAAGAAG-3′,計算相對水平。

    1.3 冠狀動脈狹窄程度評價

    對患者實施冠狀動脈造影,由本院3名經(jīng)驗豐富的影像學(xué)醫(yī)師分別采用Gensini評分進行冠狀動脈狹窄程度評估[7],計算Gensini總分,其中Gensini評分≤30分判定為輕度狹窄,>30分為重度狹窄。

    1.4 觀察指標

    ①比較不同冠狀動脈狹窄程度患者的一般資料。②分析冠狀動脈重度狹窄的影響因素。③分析冠狀動脈狹窄程度與影響因素的相關(guān)性。④miR-6089水平預(yù)測冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的價值。⑤miR-6089水平與Gensini評分的劑量-效應(yīng)分析。⑥不同miR-6089表達水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈重度狹窄發(fā)生率。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

    通過SPSS 22.0處理數(shù)據(jù),計量資料采用方差分析;計數(shù)資料采用χ2檢驗;采用Logistic回歸模型分析冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈重度狹窄的影響因素;采用Spearman分析Gensini評分與冠狀動脈狹窄影響因素的相關(guān)性;采用ROC分析miR-6089水平預(yù)測冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的價值;采用限制性立方樣條模型分析miR-6089水平與冠狀動脈狹窄的線性劑量反應(yīng)關(guān)系。以P<0.05表示差異具有顯著性。

    2 結(jié) 果

    2.1 不同冠狀動脈狹窄程度患者的一般資料比較

    183例患者中冠狀動脈輕度狹窄109例,重度狹窄74例。與輕度狹窄的冠心病伴2型糖尿病患者比較,重度狹窄的患者糖尿病病程更長,糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平更高,支架植入率、miR-6089水平更低(P<0.05;表1)。

    表1 不同冠狀動脈狹窄程度患者的一般資料比較

    2.2 冠狀動脈重度狹窄的影響因素分析

    以冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度為因變量,以糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白、支架植入、miR-6089為自變量,根據(jù)狹窄程度(輕度=0,重度=1),支架植入(無=0,有=1),其他自變量按照實際值進行賦值,采用Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,糖尿病病程延長及糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高為冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈重度狹窄獨立危險因素,miR-6089水平提高是重度狹窄的保護因素(P<0.05;表2)。

    表2 冠狀動脈重度狹窄的影響因素分析

    2.3 冠狀動脈狹窄程度與影響因素的相關(guān)性分析

    相關(guān)性分析結(jié)果顯示,糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平與Gensini評分呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.306、0.395、0.407、0.358,P<0.05),miR-6089水平與Gensini評分呈負相關(guān)關(guān)系(r=-0.416,P<0.05)。

    a為P<0.05,與輕度組比較。

    2.4 miR-6089水平評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的ROC分析

    miR-6089評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的AUC值為0.784,靈敏度為81.08%、特異度為60.55%,cut-off值為≤2.11,Youden指數(shù)為0.416,95%CI為(0.717~0.841),提示血清miR-6089評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度具有較高價值(P<0.001;圖1)。

    圖1 miR-6089水平評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的ROC

    2.5 miR-6089水平與Gensini評分的劑量-效應(yīng)分析

    根據(jù)多因素分析結(jié)果,校正糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白等因素,采用限制性立方樣條模型分析miR-6089水平連續(xù)變化與Gensini評分的關(guān)系,以miR-6089水平為橫軸,預(yù)測OR值為縱軸,上下虛線代表95%CI,由圖2可看出,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089水平連續(xù)變化與Gensini評分呈負相關(guān)關(guān)系。

    圖2 miR-6089水平與Gensini評分的劑量-效應(yīng)分析

    2.6 不同miR-6089表達水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈重度狹窄發(fā)生率

    以ROC中cut-off值為判定標準,183例患者中miR-6089高表達105例、低表達78例。miR-6089低表達的患者冠狀動脈重度狹窄發(fā)生率70.51%,高于高表達者的狹窄率18.10%(P<0.001)。

    3 討 論

    近年來冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈相關(guān)并發(fā)癥成為臨床研究熱點,由于長期高血糖可促進動脈粥樣硬化、加劇內(nèi)膜損傷及氧化應(yīng)激反應(yīng)、提高炎癥因子表達,合并2型糖尿病的冠心病患者更易出現(xiàn)冠狀動脈損傷[7]。2型糖尿病發(fā)生血管并發(fā)癥的始動因素與內(nèi)皮細胞功能有關(guān),高血糖可進一步加重內(nèi)皮損傷,同時長期糖尿病伴隨脂質(zhì)代謝紊亂、糖毒性,多種因素共同作用造成2型糖尿病冠狀動脈并發(fā)癥[8]。關(guān)于糖尿病對冠狀動脈損傷的具體機制尚不明確,一般認為與血脂紊亂、胰島素抵抗、高血糖等密切相關(guān),這些因素可使包括內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞在內(nèi)的多種細胞功能發(fā)生改變,最終造成冠狀動脈狹窄[9]。越來越多的證據(jù)顯示,血管平滑肌細胞過度遷移、增殖對促進冠狀動脈狹窄有積極作用,研究[10]顯示,miR-6089對血管平滑肌增殖有一定抑制作用,但其是否能用于評估冠狀動脈狹窄程度仍缺乏循證依據(jù)。

    miR-6089有助于抑制卵巢癌的發(fā)生、進展,但其在冠心病、2型糖尿病患者中的表達情況尚未有研究分析[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表達與Gensini評分呈負相關(guān)關(guān)系,且冠狀動脈重度狹窄的患者miR-6089表達水平更低,可能是由于影響冠狀動脈狹窄的因素較多,而miR-6089僅為其中之一。miR-6089可抑制脂多糖誘導(dǎo)的細胞增殖及巨噬細胞活化,同時可有針對性地控制TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子分泌,抑制炎癥因子造成的內(nèi)皮損傷,對抑制冠心病進展有積極作用[12];但miR-6089異常低表達時,其生理作用明顯削弱,對脂多糖誘導(dǎo)的細胞增殖控制能力降低,且加劇疾病進展過程中的炎性損傷,促使冠心病病情加重,加快冠狀動脈狹窄進程[13-15]。因此,通過檢測miR-6089表達水平可一定程度上評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度。進一步通過ROC分析,發(fā)現(xiàn)miR-6089評估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度的AUC值為0.784,且靈敏度、特異度均較高,表明采用miR-6089預(yù)測冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度具有較高準確性。但需指出的是,僅把miR-6089作為連續(xù)變量納入Logistic回歸模型,結(jié)果偏移性較大,故本研究首次采用限制性立方樣條模型分析miR-6089連續(xù)變化對冠狀動脈狹窄的影響,隨著miR-6089水平升高,冠狀動脈重度狹窄的風險性明顯下降,進一步表明miR-6089與冠狀動脈重度狹窄之間的關(guān)系。因此,選擇miR-6089作為分析冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動脈狹窄程度及風險的指標具有一定價值,可為防治冠狀動脈狹窄提供新的思路。

    綜上,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表達情況與冠狀動脈密切相關(guān)。但關(guān)于引起miR-6089水平降低的上游因子及相關(guān)機制還需進一步探究。

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