冠心病伴2型糖尿病患者外周血miR-6089水平與冠狀動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系

曹麗慧, 孟憲杰

唐山市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科,河北唐山 063001

隨著生活節(jié)奏加快、人口老齡化進(jìn)展,中國(guó)心血管疾病的發(fā)病人數(shù)逐漸增加,心血管疾病占死亡原因第一名[1]。近年來臨床關(guān)于糖尿病與心血管疾病間關(guān)系的研究逐漸增多,糖尿病患者的心血管疾病發(fā)生率明顯高于非糖尿病患者,且全因死亡率更高,血糖升高是心血管疾病發(fā)生的危險(xiǎn)因素[2]。血管平滑肌細(xì)胞增殖、遷移被認(rèn)為是冠狀動(dòng)脈狹窄的重要因素,分析血管平滑肌細(xì)胞增生的基因表達(dá)對(duì)防治冠狀動(dòng)脈狹窄有重要意義[3]。miRNA在細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、分化及轉(zhuǎn)移等多種病理、生理過程中具有重要作用,其中miR-6089是細(xì)胞周期調(diào)控因子下游小RNA,可通過靶向肌球蛋白重鏈9以激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,具有抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化作用,是潛在的腫瘤抑制因子[4]。本研究選取本院冠心病伴2型糖尿病患者,旨在分析miR-6089與冠狀動(dòng)脈狹窄關(guān)系,為臨床防治提供依據(jù),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2020年4月—2022年3月本院冠心病伴2型糖尿病患者183例為研究對(duì)象,其中男98例,女85例;年齡46～73歲,平均(59.19±6.08)歲。所有患者均符合冠心病[5]、2型糖尿病[6]診斷標(biāo)準(zhǔn),至少存在一支主要冠狀動(dòng)脈直徑狹窄≥50%,均排除合并免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)/減退、心力衰竭、急慢性感染、腫瘤。

1.2 miR-6089檢測(cè)

采集外周血3 mL,采用臺(tái)式離心機(jī)分離血漿,取血漿樣本200 μL,加入QIAzol裂解試劑1 mL,振蕩30 s,室溫下孵育5 min;EP試管內(nèi)加入氯仿200 μL與混合樣本,用力搖晃15 s,室溫下孵育3 min,4 ℃ 3 000 r/min離心15 min,取上層清液至新的EP管,添加1.5倍100%乙醇,上下顛倒混勻;吸取700 μL樣本至裝有離心柱的2 mL EP試管,室溫下3 000 r/min離心15 s,其余樣本重復(fù)本操作;樣本洗脫RNA并提取,確保RNA濃度、純度合格后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR法檢測(cè),正向引物:5′-CCAGCCTCCGAGGGCAGA-3′,反向引物:5′-TCCCTCCAGCAGTGAAGAAG-3′,計(jì)算相對(duì)水平。

1.3 冠狀動(dòng)脈狹窄程度評(píng)價(jià)

對(duì)患者實(shí)施冠狀動(dòng)脈造影,由本院3名經(jīng)驗(yàn)豐富的影像學(xué)醫(yī)師分別采用Gensini評(píng)分進(jìn)行冠狀動(dòng)脈狹窄程度評(píng)估[7],計(jì)算Gensini總分,其中Gensini評(píng)分≤30分判定為輕度狹窄,>30分為重度狹窄。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度患者的一般資料。②分析冠狀動(dòng)脈重度狹窄的影響因素。③分析冠狀動(dòng)脈狹窄程度與影響因素的相關(guān)性。④miR-6089水平預(yù)測(cè)冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的價(jià)值。⑤miR-6089水平與Gensini評(píng)分的劑量-效應(yīng)分析。⑥不同miR-6089表達(dá)水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈重度狹窄發(fā)生率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過SPSS 22.0處理數(shù)據(jù),計(jì)量資料采用方差分析;計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn);采用Logistic回歸模型分析冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈重度狹窄的影響因素;采用Spearman分析Gensini評(píng)分與冠狀動(dòng)脈狹窄影響因素的相關(guān)性;采用ROC分析miR-6089水平預(yù)測(cè)冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的價(jià)值;采用限制性立方樣條模型分析miR-6089水平與冠狀動(dòng)脈狹窄的線性劑量反應(yīng)關(guān)系。以P<0.05表示差異具有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度患者的一般資料比較

183例患者中冠狀動(dòng)脈輕度狹窄109例,重度狹窄74例。與輕度狹窄的冠心病伴2型糖尿病患者比較,重度狹窄的患者糖尿病病程更長(zhǎng),糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平更高,支架植入率、miR-6089水平更低(P<0.05;表1)。

表1 不同冠狀動(dòng)脈狹窄程度患者的一般資料比較

2.2 冠狀動(dòng)脈重度狹窄的影響因素分析

以冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度為因變量,以糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白、支架植入、miR-6089為自變量,根據(jù)狹窄程度(輕度=0,重度=1),支架植入(無=0,有=1),其他自變量按照實(shí)際值進(jìn)行賦值,采用Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,糖尿病病程延長(zhǎng)及糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高為冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈重度狹窄獨(dú)立危險(xiǎn)因素,miR-6089水平提高是重度狹窄的保護(hù)因素(P<0.05;表2)。

表2 冠狀動(dòng)脈重度狹窄的影響因素分析

2.3 冠狀動(dòng)脈狹窄程度與影響因素的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析結(jié)果顯示,糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白水平與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.306、0.395、0.407、0.358,P<0.05),miR-6089水平與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.416,P<0.05)。

a為P<0.05,與輕度組比較。

2.4 miR-6089水平評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的ROC分析

miR-6089評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的AUC值為0.784,靈敏度為81.08%、特異度為60.55%,cut-off值為≤2.11,Youden指數(shù)為0.416,95%CI為(0.717～0.841),提示血清miR-6089評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度具有較高價(jià)值(P<0.001;圖1)。

圖1 miR-6089水平評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的ROC

2.5 miR-6089水平與Gensini評(píng)分的劑量-效應(yīng)分析

根據(jù)多因素分析結(jié)果,校正糖尿病病程、糖化血紅蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白等因素,采用限制性立方樣條模型分析miR-6089水平連續(xù)變化與Gensini評(píng)分的關(guān)系,以miR-6089水平為橫軸,預(yù)測(cè)OR值為縱軸,上下虛線代表95%CI,由圖2可看出,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089水平連續(xù)變化與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

圖2 miR-6089水平與Gensini評(píng)分的劑量-效應(yīng)分析

2.6 不同miR-6089表達(dá)水平的冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈重度狹窄發(fā)生率

以ROC中cut-off值為判定標(biāo)準(zhǔn),183例患者中miR-6089高表達(dá)105例、低表達(dá)78例。miR-6089低表達(dá)的患者冠狀動(dòng)脈重度狹窄發(fā)生率70.51%,高于高表達(dá)者的狹窄率18.10%(P<0.001)。

3 討 論

近年來冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈相關(guān)并發(fā)癥成為臨床研究熱點(diǎn),由于長(zhǎng)期高血糖可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化、加劇內(nèi)膜損傷及氧化應(yīng)激反應(yīng)、提高炎癥因子表達(dá),合并2型糖尿病的冠心病患者更易出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈損傷[7]。2型糖尿病發(fā)生血管并發(fā)癥的始動(dòng)因素與內(nèi)皮細(xì)胞功能有關(guān),高血糖可進(jìn)一步加重內(nèi)皮損傷,同時(shí)長(zhǎng)期糖尿病伴隨脂質(zhì)代謝紊亂、糖毒性,多種因素共同作用造成2型糖尿病冠狀動(dòng)脈并發(fā)癥[8]。關(guān)于糖尿病對(duì)冠狀動(dòng)脈損傷的具體機(jī)制尚不明確,一般認(rèn)為與血脂紊亂、胰島素抵抗、高血糖等密切相關(guān),這些因素可使包括內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞功能發(fā)生改變,最終造成冠狀動(dòng)脈狹窄[9]。越來越多的證據(jù)顯示,血管平滑肌細(xì)胞過度遷移、增殖對(duì)促進(jìn)冠狀動(dòng)脈狹窄有積極作用,研究[10]顯示,miR-6089對(duì)血管平滑肌增殖有一定抑制作用,但其是否能用于評(píng)估冠狀動(dòng)脈狹窄程度仍缺乏循證依據(jù)。

miR-6089有助于抑制卵巢癌的發(fā)生、進(jìn)展,但其在冠心病、2型糖尿病患者中的表達(dá)情況尚未有研究分析[11]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表達(dá)與Gensini評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,且冠狀動(dòng)脈重度狹窄的患者miR-6089表達(dá)水平更低,可能是由于影響冠狀動(dòng)脈狹窄的因素較多,而miR-6089僅為其中之一。miR-6089可抑制脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖及巨噬細(xì)胞活化,同時(shí)可有針對(duì)性地控制TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子分泌,抑制炎癥因子造成的內(nèi)皮損傷,對(duì)抑制冠心病進(jìn)展有積極作用[12];但miR-6089異常低表達(dá)時(shí),其生理作用明顯削弱,對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖控制能力降低,且加劇疾病進(jìn)展過程中的炎性損傷,促使冠心病病情加重,加快冠狀動(dòng)脈狹窄進(jìn)程[13-15]。因此,通過檢測(cè)miR-6089表達(dá)水平可一定程度上評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度。進(jìn)一步通過ROC分析,發(fā)現(xiàn)miR-6089評(píng)估冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的AUC值為0.784,且靈敏度、特異度均較高,表明采用miR-6089預(yù)測(cè)冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度具有較高準(zhǔn)確性。但需指出的是,僅把miR-6089作為連續(xù)變量納入Logistic回歸模型,結(jié)果偏移性較大,故本研究首次采用限制性立方樣條模型分析miR-6089連續(xù)變化對(duì)冠狀動(dòng)脈狹窄的影響,隨著miR-6089水平升高,冠狀動(dòng)脈重度狹窄的風(fēng)險(xiǎn)性明顯下降,進(jìn)一步表明miR-6089與冠狀動(dòng)脈重度狹窄之間的關(guān)系。因此,選擇miR-6089作為分析冠心病伴2型糖尿病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度及風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)具有一定價(jià)值,可為防治冠狀動(dòng)脈狹窄提供新的思路。

綜上,冠心病伴2型糖尿病患者miR-6089表達(dá)情況與冠狀動(dòng)脈密切相關(guān)。但關(guān)于引起miR-6089水平降低的上游因子及相關(guān)機(jī)制還需進(jìn)一步探究。