淺談大口黑鱸無病毒親本選育技術(shù)

■ 文｜仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院 余明海

中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所 林強(qiáng) 付小哲 羅霞 梁紅茹 牛銀杰 李寧求

廣東德權(quán)漁業(yè)發(fā)展有限公司 鄧德基

大口黑鱸，近年來正如火如荼地在全國(guó)推廣養(yǎng)殖，據(jù)《2022中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》統(tǒng)計(jì)，2021年全國(guó)養(yǎng)殖產(chǎn)量已突破70萬噸。目前苗種繁育企業(yè)、養(yǎng)殖戶平均育苗成活率不足10%；其中，親魚產(chǎn)卵期間的損耗成為直接導(dǎo)致苗種繁育企業(yè)虧損的主要原因。如何做好后備親魚選擇以及親魚產(chǎn)前營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化、減少親魚損耗、增加產(chǎn)卵數(shù)量，公開研究報(bào)道較少。本研究選用：復(fù)合維生素、黃芪多糖、甘草提取物，制成復(fù)方強(qiáng)化劑；利用現(xiàn)代分子生物技術(shù)，通過突破大口黑鱸病原阻斷技術(shù)、無病毒親魚培育、親魚無創(chuàng)檢測(cè)、活體原位消殺、生物安保、工廠化繁育等關(guān)鍵技術(shù)，加州鱸親魚成活率維持在95%以上，總結(jié)出一些經(jīng)驗(yàn)，供大家參考。

親魚培育及繁殖期間主要疾病

1.病毒性疾病

目前針對(duì)大口黑鱸病毒性疾病，還沒有特效藥物，傳染性強(qiáng)、死亡率高。主要種類有：大口黑鱸虹彩病毒（LMBV）、傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）、神經(jīng)壞死病毒（VNN）、鱸彈狀病毒（SCRV）。其中，大口黑鱸虹彩病毒和傳染性脾腎壞死病毒在中大魚發(fā)病較多，提升魚體自身免疫力是控制病毒性疾病的關(guān)鍵（圖1）。

圖1 攜帶大口黑鱸虹彩病毒（LMBV）的魚體

2.細(xì)菌性疾病

大口黑鱸主要細(xì)菌性病原有：柱狀黃桿菌（Flavobacterium columnare）、諾卡氏菌（Nocardia）、維氏氣單胞菌（Aeromonas Veronii）等，保持水質(zhì)清爽、控制放養(yǎng)密度、定期檢測(cè)是防控關(guān)鍵（圖2）。

圖2 感染諾卡氏菌（Nocardia）的大口黑鱸

3.營(yíng)養(yǎng)性疾病

營(yíng)養(yǎng)性病變主要因?yàn)轱暳显厦棺?、配方不科學(xué)、投喂不合理等，導(dǎo)致苗種、成魚飼養(yǎng)過程中，畸形、發(fā)育不全、肝膽病變、腸道炎癥、代謝功能障礙等病癥。合理投喂、定期補(bǔ)充維生素、微量元素、中草藥等，保肝護(hù)膽、腸胃護(hù)理是關(guān)鍵應(yīng)對(duì)策略（圖3）。

圖3 發(fā)生肝臟病變的大口黑鱸

4.水質(zhì)病

水質(zhì)病主要指：由于水質(zhì)理化指標(biāo)不適宜魚類生長(zhǎng)而引起的疾病，例如：氨氮、亞硝酸鹽、pH值、透明度、總硬度、總堿度、藍(lán)綠藻和水華等。另外，水體總堿度過高，塘水長(zhǎng)期偏瘦、渾濁更容易引起錨頭鳋（釘蟲）滋生、亞硝酸鹽超標(biāo)、魚類攝食減弱等問題。適當(dāng)交換新鮮水源、定期補(bǔ)充微生態(tài)制劑和有益藻類維持水體菌藻平衡，是穩(wěn)定水質(zhì)的關(guān)鍵。

主要技術(shù)措施

1.生產(chǎn)區(qū)域隔離與布局

在后備親魚進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)前，首先應(yīng)當(dāng)確定好后備親魚培育基地和產(chǎn)卵池塘選址，要求周邊20km內(nèi)無加州鱸、鱖魚、生魚、蛙、蝦類養(yǎng)殖為宜。繁殖基地設(shè)置暫養(yǎng)區(qū)、繁育區(qū)、后備親魚培育區(qū)，中間應(yīng)有一定隔離區(qū)域。養(yǎng)殖用水以井水、山泉水為宜，經(jīng)專用沉淀池、預(yù)處理池、儲(chǔ)水池三級(jí)處理后再使用，并設(shè)置獨(dú)立的進(jìn)排水系統(tǒng)，產(chǎn)卵池一般選擇規(guī)格在5～8畝/口，水深1.5～2.0米為宜。

2.無病毒后備親魚選擇

目前大口黑鱸在市面上已經(jīng)形成幾大種系，代表品種有：優(yōu)鱸、加得豐、皖鱸一號(hào)、臺(tái)鱸、廣種等。從有資質(zhì)的品牌苗企、種苗來源清晰的基地，直接采購(gòu)現(xiàn)成的商品魚作為后備親魚，時(shí)間短、成本低、易操作。為保證后期品質(zhì)不退化，有規(guī)模的企業(yè)，還應(yīng)當(dāng)詳細(xì)標(biāo)注親魚不同來源池塘編號(hào)，以便后期的配對(duì)雜交。后備親魚的選擇：建議選擇養(yǎng)殖池塘遠(yuǎn)離主養(yǎng)區(qū)；近3年無重大疾病發(fā)生；投苗為正季早春苗，規(guī)格在150g～500g之間。苗種采購(gòu)前每口池塘選擇不低于10尾魚，采用熒光定量PCR方法檢測(cè)主要病原：大口黑鱸虹彩病毒（LMBV）、傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV）、神經(jīng)壞死病毒（VNN）、鱸彈狀病毒（SCRV）、諾卡氏菌（Nocardia），且建議每月1次，連續(xù)監(jiān)測(cè)3個(gè)月，檢測(cè)結(jié)果要求陰性。后備親魚經(jīng)徹底消毒后用專用運(yùn)輸車，運(yùn)送到暫養(yǎng)區(qū)，暫養(yǎng)一個(gè)月后再抽樣進(jìn)行病原檢測(cè)，存在風(fēng)險(xiǎn)隱患及時(shí)淘汰，并對(duì)場(chǎng)地進(jìn)行徹底消殺，確保種魚安全轉(zhuǎn)運(yùn)至后備親魚養(yǎng)殖區(qū)。

3.后備親魚營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化

開展無病毒親本篩選可杜絕85%的重大傳染性疾病，是保障苗種繁育和親魚成活率的關(guān)鍵步驟，有條件的企業(yè)，還可以選擇對(duì)親魚進(jìn)行疫苗接種。大口黑鱸同鱖魚、生魚等肉食性魚類相似，糖代謝能力較弱，長(zhǎng)期食用全價(jià)高蛋白膨化飼料，常表現(xiàn)出“二型糖尿病”特征，肝膽容易受到損傷、腸道結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而引起腸道菌群失調(diào)誘發(fā)腸道疾病。所以加強(qiáng)后備親魚的培育和產(chǎn)前營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化尤為重要。本方案選用復(fù)合維生素、黃芪多糖、甘草提取物，按質(zhì)量比為1∶2∶2的比例混合成為親魚營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑并長(zhǎng)期投喂，親魚肝臟紅潤(rùn)、脾臟體積適中，腸道結(jié)構(gòu)完整且富有彈性，親魚培育、繁殖期間健康情況均較好。

4.親魚飼養(yǎng)和苗種繁殖管理技術(shù)

水溫在18～30℃時(shí)是大口黑鱸適宜的產(chǎn)卵水溫，華南地區(qū)一般在每年10月至次年5月都可以實(shí)現(xiàn)自然產(chǎn)卵，經(jīng)人為干預(yù)調(diào)節(jié)出合適的環(huán)境，可以實(shí)現(xiàn)反季節(jié)繁殖。繁殖前對(duì)后備親魚進(jìn)行一次病原檢測(cè)，挑選1冬齡以上，規(guī)格在750g以上、體型健碩、肥滿度在2.5左右、尾柄長(zhǎng)3～5cm以上、無典型畸形個(gè)體，抽樣觀察性腺發(fā)育時(shí)相達(dá)到Ⅳ期以上進(jìn)入待選（圖4）。檢測(cè)合格的后備親魚，按照雌雄1.2～1.5∶1進(jìn)行配對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)至繁殖池，每畝魚塘350～400組親魚為宜，工廠化繁育放養(yǎng)密度一般為每1.5～1.8m3水體1組親魚。為避免親魚打斗過激，規(guī)格應(yīng)當(dāng)盡量統(tǒng)一。繁殖期間選擇飼料粗蛋白在42%～45%之間為宜，每日早、晚各1餐，投喂率控制在2%以內(nèi)，池塘定期補(bǔ)充微生態(tài)制劑控制水質(zhì)，并維持適當(dāng)?shù)姆柿σ苑€(wěn)定藻相，繁殖期間還應(yīng)當(dāng)每口池塘配備1臺(tái)水車式增氧機(jī)加強(qiáng)水流刺激。

圖4 強(qiáng)化后即將繁殖的大口黑鱸

5.繁殖結(jié)束后的養(yǎng)殖管理

一般一個(gè)繁殖高峰期持續(xù)時(shí)間在25-40天，魚類相對(duì)懷卵量在123±29粒/g體重，大口黑鱸屬于分批產(chǎn)卵魚類，在一個(gè)產(chǎn)卵高峰期結(jié)束后，應(yīng)當(dāng)及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)親魚，淘汰產(chǎn)卵后病、殘個(gè)體，并將雌雄親魚分開飼養(yǎng)，投喂率恢復(fù)到體重的2.5%～3%，做好消毒和抗真菌處理，同時(shí)內(nèi)服5-7日抗菌素配合亞硫酸甲萘醌、免疫增強(qiáng)中草藥等，緩解性腺炎癥，盡快恢復(fù)體質(zhì)，并維持水質(zhì)清新。

魚類性腺發(fā)育研究，目前主要依靠組織學(xué)、組織化學(xué)以及電鏡、免疫、分子生物學(xué)和離體培養(yǎng)等來實(shí)現(xiàn)，水生動(dòng)物魚類產(chǎn)前強(qiáng)化培育較少關(guān)注。魚類性腺發(fā)育，受機(jī)體內(nèi)部的生理機(jī)制和外部環(huán)境雙重調(diào)節(jié)。影響魚類性腺發(fā)育的生態(tài)因素包括：營(yíng)養(yǎng)、溫度、鹽度、光照、水流和溶氧量等。親魚產(chǎn)前強(qiáng)化培育，主要通過投喂冰鮮魚作補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)親本性腺發(fā)育，提高卵子和精子質(zhì)量，然而該方法存在病原交叉污染和不符合漁業(yè)健康養(yǎng)殖指南規(guī)范的問題。

本研究按照無病毒苗種繁育標(biāo)準(zhǔn)，開展大口黑鱸親魚培育及苗種繁殖，極大降低了親魚損耗，保證苗種不帶病毒，提高了苗種質(zhì)量，促進(jìn)了大口黑鱸產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。2020-2023年期間，該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)在廣東德權(quán)漁業(yè)發(fā)展有限公司投入實(shí)踐生產(chǎn)應(yīng)用。成功篩選出8萬余組親魚，實(shí)現(xiàn)連續(xù)三年生產(chǎn)，親魚損耗率在5%以內(nèi)，培育無特定病毒大口黑鱸水花超10億尾，規(guī)格朝苗3000余萬尾。