超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅康牟淮_定度評(píng)定

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摘 要：本文依據(jù)GB 31658.5—2021，建立雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅繙y(cè)定的不確定度評(píng)定方法。通過(guò)對(duì)測(cè)量過(guò)程中不確定度來(lái)源的分析以及對(duì)不確定度分量進(jìn)行評(píng)定，探討影響測(cè)定結(jié)果不確定度的主要因素。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性擬合是影響不確定度的主要因素，在檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)加以控制。雞肉中氟苯尼考的測(cè)量結(jié)果為（75.3±6.4） μg·kg^-1（k=2）。

關(guān)鍵詞：不確定度評(píng)定；氟苯尼考；雞肉；超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Uncertainty Evaluation of Determination of Florfenicol Residues in Chicken by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

SHAN Changhai， LI Xiang， YANG Zhou， LONG Yang， HU Rong， SUN Hui

（National Quality Supervision and Testing Center for Selenium Rich Products， Enshi 445000， China）

Abstract： Based on GB 31658.5—2021， an uncertainty evaluation method for the determination of florfenicol residues in chicken was established. By analyzing the source of uncertainty and evaluating the component of uncertainty， the main factors affecting the uncertainty of measurement results were discussed. The results show that the linear fitting of the standard curve is the main factor affecting the uncertainty， which should be controlled in the testing process. The results of florfenicol in chicken were （75.3±6.4） μg·kg^-1（k=2）.

Keywords： uncertainty evaluation; florfenicol; chicken; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

氟苯尼考是一種畜禽動(dòng)物專(zhuān)用的酰胺醇類(lèi)的廣譜抗菌藥，治療畜禽動(dòng)物的細(xì)菌性疾病，尤其對(duì)呼吸道系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著[1-2]。氟苯尼考具有一定的毒性，畜牧農(nóng)產(chǎn)品中氟苯尼考累積到一定限量，會(huì)對(duì)人體造成危害[3-4]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）規(guī)定，雞肉中氟苯尼考?xì)埩粝蘖啃∮?00 μg·kg-1，是國(guó)家對(duì)農(nóng)產(chǎn)品重點(diǎn)監(jiān)督項(xiàng)目?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 31658.5—2021）自2022年2月1日起開(kāi)始實(shí)施，是國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)督抽檢指定的唯一檢測(cè)方法。在獸藥殘留的分析檢測(cè)工作中，由于試劑耗材質(zhì)量等級(jí)的不同、檢測(cè)設(shè)備的精密度和靈敏度的不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的偏差，通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測(cè)量不確定度分析并關(guān)注主要不確定度來(lái)源，能夠提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度[5-6]。

本文依據(jù)GB 31658.5—2021、《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》（CNAS—GL006：2019），對(duì)雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅繙y(cè)定的不確定度進(jìn)行評(píng)定，旨在為采用新標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)找出關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)并加以控制，以降低檢驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

雞肉樣品，市場(chǎng)采購(gòu)。

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品（100.0 mg·L^-1，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，濃度不確定度U=3.0 mg·L^-1）；乙腈、甲酸、正己烷、乙酸乙酯（色譜純，德國(guó)CNW公司）；實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q超純水，雞肉中氟苯尼定量分析質(zhì)控樣（自制）。

Triple Quad 5500三重四級(jí)桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)ABSCIEX公司）；ST 40R離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher公司）；Vac Elut SPS 24半自動(dòng)固相萃取儀（美國(guó)Agilent Technologies公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制以及樣品處理

標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)配制：精密量取1.0 mL氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，得到10 μg·mL^-1氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)工作液；同樣方法制備100 ng·mL^-1內(nèi)標(biāo)工作溶液。按照GB 31658.5—2021中8.3的方法制備得濃度分別為10 ng·mL^-1、50 ng·mL^-1、100 ng·mL^-1、200 ng·mL^-1、500 ng·mL^-1和1 000 ng·mL^-1的校準(zhǔn)工作溶液。

樣品處理按GB 31658.5—2021中8.1、8.2、8.3的方法處理，色譜和質(zhì)譜條件按照8.4的條件設(shè)置。

1.2.2 數(shù)學(xué)模型的建立

根據(jù)測(cè)量方法建立雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅慷糠治龅臄?shù)學(xué)模型為

X=（c×v）/m（1）

式中：X為雞肉中氟苯尼考含量，μg·kg^-1；c為試樣溶液中氟苯尼考濃度，μg·L^-1；m為供試試料質(zhì)量，g；v為試樣定容體積，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來(lái)源的識(shí)別

根據(jù)GB 31658.5—2021標(biāo)準(zhǔn)方法的測(cè)量過(guò)程和測(cè)量模型，影響雞肉中氟苯尼考定量分析的不確定度來(lái)源有：①樣品稱(chēng)量引入的不確定度urel（a）；②氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性引入的不確定度urel（c）；③校準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel（q）；④檢測(cè)方法重復(fù)性引入的不確定度urel（r）；⑤檢測(cè)方法加標(biāo)回收率引入的不確定度urel（h）。由于檢測(cè)方法加標(biāo)回收率引入的不確定度包含了提取凈化過(guò)程引入的不確定度，因此在評(píng)定過(guò)程中忽略了提取凈化過(guò)程引入的不確定度。

2.2 不確定度測(cè)量

2.2.1 樣品稱(chēng)量引入的不確定度urel（a）

2.2.2 氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性引入的不確定度urel（c）

2.2.3 校準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel（q）

2.2.4 檢測(cè)方法重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度urel（r）

2.2.5 檢測(cè)方法回收率引入的不確定度urel（h）

2.2.6 合成不確定度urel

2.2.7 擴(kuò)展不確定度U

3 結(jié)論

本研究依據(jù)GB 31658.5—2021標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅繙y(cè)量過(guò)程中的不確定度來(lái)源進(jìn)行了分析，對(duì)測(cè)量不確定度分量進(jìn)行評(píng)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度影響最主要的因素為標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，而校準(zhǔn)曲線擬合與人員操作檢測(cè)熟練程度和儀器性能有關(guān)。因此，在檢測(cè)過(guò)程中，需要對(duì)人員檢測(cè)能力和儀器維護(hù)保養(yǎng)進(jìn)行定期監(jiān)控，以降低檢驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。

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