實驗條件下BT肽對南美白對蝦副溶血性弧菌的攻毒試驗

潘雪央 陸俊鍇 華建權

摘要：副溶血弧菌引起的急性肝胰腺壞死病是南美白對蝦的主要病害之一。通過在飼料中添加BT肽并進行攻毒實驗來探究BT肽是否能夠增強南美白對蝦的天然免疫力。結果表明，在飼料中添加BT肽可以顯著提高南美白對蝦對副溶血弧菌的抗病能力，但是免疫保護的持續(xù)時間稍顯不足，其原因有待進一步研究。

關鍵詞：南美白對蝦；BT肽；副溶血弧菌；免疫

中圖分類號：S941??? 文獻標識碼：A

經過幾十年的發(fā)展，南美白對蝦（Litopenaeus vananmei）已經成為我國水產養(yǎng)殖的主導品種；但同時，疾病爆發(fā)、養(yǎng)殖環(huán)境惡化和種質退化等問題都嚴重困擾著該產業(yè)的進一步發(fā)展，尤其是副溶血性弧菌引起的急性肝胰腺壞死病，每年都給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失，成為制約南美白對蝦養(yǎng)殖發(fā)展的一個關鍵性因素。目前并無有效快速的方法防治對蝦疾病。

BT肽是土壤細菌Brevibacillus texasporus分泌的一種帶正電的含13個氨基酸殘基的非核糖體脂肽。體外試驗表明，BT肽是天然免疫受體TLR2的特異配體，其可作為“標志性微生物產物”（PAMP）被TLR2識別后激活Toll/TLRs天然免疫信號通道而增強天然免疫能力。飼料添加BT肽喂養(yǎng)雞，可以顯著的增加活性氧和一氧化氮的含量，并抑制雞大腸桿菌病、壞死性腸炎、沙門氏菌病等疾病的爆發(fā)。慈溪市農業(yè)農村局金湯東高級工程師在對同為節(jié)肢動物的昆蟲蜜蜂的研究中發(fā)現，發(fā)現飼喂含BT肽飼料的10箱蜜蜂沒有爆發(fā)任何疾病，但飼喂不含BT肽的常規(guī)飼料的10箱蜜蜂中有3箱爆發(fā)了歐洲幼蟲病。

目前，BT肽在水產動物上的應用還未有報道，如能對其在水產動物疾病爆發(fā)的效果進行評價，將可能極大地推動水產動物無抗養(yǎng)殖和疾病預防的發(fā)展。本試驗目的是在南美白對蝦喂食含BT肽的飼料與常規(guī)飼料下，經過副溶血性弧菌的攻毒，來證實BT肽是否對南美白對蝦的成活具有保護效果。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗在寧波市海洋與漁業(yè)研究院創(chuàng)新基地進行；副溶血性弧菌由寧波市海洋與漁業(yè)研究院提供，菌株來源于寧波市域送檢的南美白對蝦樣本中提取且?guī)в卸玖蚋比苎曰【?；南美白對蝦苗種由慈溪市傅金利水產養(yǎng)殖場采購且為其大田生產的同一批次，平均規(guī)格0.8厘米。飼料由強普公司生產，蛋白含量42%，不同階段投喂不同粒徑的飼料，分別是含96ppmBT肽的0#破碎、0#、1號破碎、1號料及不含BT肽的0#破碎、0#、1號破碎、1號料。

1.2 試驗時間

6月10日開始至7月30日結束。

1.3 試驗方法

取同一批次同規(guī)格的對蝦苗430尾，放置于6個活水箱（設3個實驗并行組、3個對照組），每個活水箱容積約5m3，先暫養(yǎng)7天，淘汰部分因移植造成的折損（見表1）；對照組投喂普通飼料、實驗組投喂BT肽添加飼料（普通飼料混合96 ppm BT肽加工而成），進行攻毒實驗；在各組飼料中加入活性副溶血弧菌（每kg飼料加入約6×109CFU），隨后分別投喂連續(xù)投喂七天，而后各組對蝦在相同條件下養(yǎng)殖50天；及時撈去死蝦，觀察并記錄各活水箱中對蝦的死亡情況及最后存活對蝦數量（見表2）。

2 試驗結果

攻毒實驗結果顯示（如圖），副溶血弧菌侵染對蝦后，實驗組的成活率顯著高于對照組，說明實驗組對蝦對副溶血弧菌的抗病能力比對照組強。

3 討論

副溶血性弧菌引起的肝胰腺壞死綜合癥是目前南美白對蝦養(yǎng)殖生產過程中影響最大、養(yǎng)殖戶的最為關心的問題，如果能找到一個解決方案，必將給南美白對蝦生產帶來巨大的影響和利好。目前生產中，控制副溶血性弧菌的最常用的方法，一是改善養(yǎng)殖生產環(huán)境，二是飼料中添加乳酸菌類微生態(tài)制劑，來抑制弧菌在腸道中的繁殖。

實驗條件下BT肽對南美白對蝦主要疾病-副溶血性弧菌的攻毒試驗，目的是為了了解BT肽對南美白對蝦主要疾病-副溶血性弧菌的抑制效果，也為大田試驗打下理論上的基礎。試驗表明，BT肽對副溶血弧菌侵染南美白對蝦后，其抗病能力顯著提高。

試驗數據也表明，攻毒前二天的對蝦死亡明顯高于攻毒后幾天；攻毒的保護率也顯不足；說明單一的攻毒其效果有限，其原因需要進一步進行研究；使用方法需要進一步完善。

另外，在系統改進方面，沈美雄等［10］在鰻鱺自循環(huán)水養(yǎng)殖系統中，發(fā)現了一種水面雙路排污器，具體是通過攔魚孔板將排污器分為進污區(qū)與排污區(qū)，進污區(qū)共有通向養(yǎng)殖池底及養(yǎng)殖池水面的帶有池面污物收集臂板的兩路進污通道，具備導流養(yǎng)殖池池底及池面污物至魚廁所，截留大顆粒雜物及病死鰻鱺的功能，值得借鑒和后期改進。

本次試驗在實施養(yǎng)殖過程中取得了一定的成效，但也不可避免的發(fā)現了一些問題，以便在后期的循環(huán)水養(yǎng)殖中引起注意，少走彎路，減少損失，提高養(yǎng)殖產量和經濟效益。建議如下：（1）水流推動設備養(yǎng)殖前期每天1次，每次1～2個小時；中后期每天2～3次，每次1～2個小時。（2）糞污收集設備耗電較高，建議養(yǎng)殖前期每隔5～7天開啟一次；后期每隔3～5天開啟一次，以減輕用電消耗。（3）加州鱸發(fā)病較為頻繁，成活率略低，建議加強養(yǎng)殖期間的池塘消毒和魚病防治工作。（4）相比3種魚類，湘云鯽抗逆性最強，成活率最高，值得優(yōu)先推廣。（5）減少非必要人員驚擾，為魚類營造安全的生長與攝食環(huán)境。

參考文獻

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