可變剪接在基因轉(zhuǎn)錄中的作用機(jī)制及其在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的研究進(jìn)展

蒙光雪?馬洪?廖德仲

【摘要】可變剪接的失調(diào)可能導(dǎo)致不同癌癥在多種病理狀態(tài)下的剪接缺陷，在癌癥診斷和治療過程中可變剪接事件可能作為潛在的分子標(biāo)志物。可變剪接不僅增加了人類蛋白質(zhì)的復(fù)雜性，還造成了轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組表達(dá)的多樣性。一個(gè)基因的不同編碼區(qū)以不同的方式剪接導(dǎo)致該基因的多種轉(zhuǎn)錄狀態(tài)，最終的蛋白產(chǎn)物可能會具有不同的甚至相互拮抗的功能和結(jié)構(gòu)特征，影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）中也發(fā)生可變剪接事件，該文就HNSCC中發(fā)生可變剪接事件及其機(jī)制進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】可變剪接；基因轉(zhuǎn)錄；頭頸部鱗狀細(xì)胞癌；RNA結(jié)合蛋白；腫瘤

Mechanism of alternative splicing in gene transcription and research progress in head and neck squamous cell carcinoma Meng Guangxue△， Ma Hong， Liao Dezhong. △School of Stomatology， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China

Corresponding author， Ma Hong， E-mail： mahong1966@126.com

【Abstract】Misregulation of alternative splicing may result in splicing defects in different types of cancers under multiple pathological conditions. Alternative splicing events may serve as potential molecular markers during the diagnosis and treatment for cancer. Alternative splicing is not only a key mechanism for increasing the complexity of proteins in human， but also causes a diversity of expression of transcriptomes and proteomes in a tissue-specific manner. Different coding regions of a certain gene can be spliced in different patterns， resulting in multiple transcription states of this gene， and the final protein product may have different or mutually-antagonistic functional and structural characteristics. It affects the occurrence and development of tumors. Alternative splicing events also occur in head and neck squamous cell carcinoma （HNSCC）. In this article， alternative splicing events in HNSCC and the underlying mechanism were reviewed..

【Key words】Alternative splicing； Genetic transcription； Head and neck squamous cell carcinoma；

RNA-binding protein； Tumor

頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）常發(fā)生于口腔、咽部和喉部的黏膜［1］。我國1990至2017年口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）的新發(fā)病例數(shù)增長了280.0％，死亡人數(shù)增長了196.8％［2］。OSCC的治療方法主要包括手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療和免疫治療［3］。在治療中DNA或RNA的分析有重要意義［4］。真核基因外顯子必須在RNA成熟過程中移除，才能使成熟的mRNA翻譯成蛋白質(zhì)，這一過程稱為剪接，超過95%的基因經(jīng)歷可變剪接，可變剪接是mRNA前體通過不同的剪接方式產(chǎn)生不同的RNA異構(gòu)體，是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程［5-6］。一個(gè)基因可以有多個(gè)異構(gòu)體［7］。Ding等（2020年）認(rèn)為可變剪接主要包括7種類型，而最常見的是外顯子跳躍，其可使蛋白質(zhì)組多樣化以便執(zhí)行復(fù)雜的生物學(xué)功能來適應(yīng)外部和內(nèi)部環(huán)境變化。可變剪接在癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起主導(dǎo)作用［8］。在HNSCC中有很多可變剪接事件，可能與HNSCC新的預(yù)后生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)有關(guān)［9］。

一、可變剪接

1.可變剪接的調(diào)控機(jī)制

1977年Chow等對前信使RNA（pre-mRNA）的剪接有了記錄。1985年Grabowski等分離出了負(fù)責(zé)剪接的分子機(jī)制——剪接體。剪接是由剪接體這個(gè)大型核糖核蛋白復(fù)合體來完成。Yan等（2015年）發(fā)現(xiàn)剪接體在組裝、激活、催化和解組裝4個(gè)過程中的結(jié)構(gòu)，剪接體包括5個(gè)（U1、U2、U4、U5、U6）不同的小核核糖核蛋白（snRNP）、19復(fù)合體（NTC）蛋白、19復(fù)合體相關(guān)（NTR）蛋白、8個(gè)高度保守的依賴RNA的ATP水解酶/解旋酶、剪接因子以及一些其他蛋白。Wilkinson等（2020年）認(rèn)為剪接過程是U1和U2 snRNP招募 U4/U6.U5 tri-snRNP，將5′剪接位點(diǎn)從U1轉(zhuǎn)移到U6 snRNP，觸發(fā)U6 snRNP從U4 snRNP解旋，U6與U2 snRNP進(jìn)入一個(gè)活性位點(diǎn)，分支點(diǎn)腺苷攻擊5′剪接位點(diǎn)，產(chǎn)生5′剪接位點(diǎn)外顯子，從活性位點(diǎn)移除分支點(diǎn)腺苷使3′剪接位點(diǎn)結(jié)合，從而使5′剪接位點(diǎn)外顯子攻擊3′剪接位點(diǎn)，產(chǎn)生成熟的mRNA和切除的內(nèi)含子套索。

可變剪接調(diào)控的經(jīng)典機(jī)制：與外顯子或內(nèi)含子調(diào)控元件結(jié)合的RNA結(jié)合蛋白（RBP）、絲氨酸/精氨酸富集（SR）蛋白家族和異質(zhì)核核糖核蛋白（hnRNP）家族，上述蛋白能夠促進(jìn)或抑制snRNP 對5′剪接位點(diǎn)的識別和SF1、U2AF2、U2AF1及U2 snRNP對3′剪接位點(diǎn)的識別，從而影響剪接位點(diǎn)的選擇，內(nèi)含子和外顯子序列的差異性選擇以及選擇性啟動(dòng)子和3′端形成位點(diǎn)的不同導(dǎo)致了可變剪接異構(gòu)體的產(chǎn)生［5］。

2. 可變剪接的調(diào)控層面

可變剪接主要是從以下三個(gè)經(jīng)典層面進(jìn)行調(diào)控。RNA層面：Olson等（2007年）和Kishore等（2006年）認(rèn)為反式作用因子和順式作用元件相互作用，其中RNA可充當(dāng)反式作用因子和順式作用元件；轉(zhuǎn)錄層面：Zhang等［10］認(rèn)為RNA聚合酶Ⅱ的延伸速度影響外顯子跳躍；表觀遺傳學(xué)層面：DNA甲基化、組蛋白修飾、組蛋白變異和非編碼RNA（ncRNA）等?？勺兗艚雍捅碛^遺傳修飾之間相互聯(lián)系，且與腫瘤有密切關(guān)系［11］。在HNSCC中表觀遺傳學(xué)層面的研究甚少，Kelley等（2017年）和Anayannis等（2015年）認(rèn)為人乳頭瘤病毒（HPV）陽性 HNSCC的表觀遺傳學(xué)與癌癥預(yù)后密切相關(guān)。Guo等（2020年）認(rèn)為在HPV陽性O(shè)PSCC中，組蛋白H3K27ac的乙酰化修飾在表觀遺傳學(xué)層面調(diào)控可變剪接。

3.調(diào)控因子

參與剪接反應(yīng)和調(diào)控的順式作用RNA元件分為兩類。第一類是pre-mRNA反應(yīng)位點(diǎn)，Gao等［12］認(rèn)為主要包括5′剪接位點(diǎn)、分支點(diǎn)和3′剪接位點(diǎn)，用來識別和催化底物；而第二類包括其他RNA元件，統(tǒng)稱為剪接調(diào)節(jié)元件（SRE），通常是反式作用因子的靶位點(diǎn)。Shenasa等（2020年）認(rèn)為這些SRE位于pre-mRNA上的RNA結(jié)合位點(diǎn)的短核苷序列，順式作用元件包括外顯子剪接增強(qiáng)子（ESE）、外顯子剪接沉默子（ESS）、內(nèi)含子剪接增強(qiáng)子（ISE）和內(nèi)含子剪接沉默子（ISS）?？勺兗艚由婕霸S多順式作用元件和反式作用因子的組合調(diào)節(jié)。SR蛋白家族和hnRNP家族通常發(fā)揮相反的作用。Martinez-montiel等（2018年）認(rèn)為ESE和ISE主要招募SR蛋白作為剪接激活因子，而hnRNP蛋白則識別ESS和ISS作為剪接抑制因子。

在HNSCC中RBP表達(dá)異常從而調(diào)控可變剪接。SR蛋白是RBP，在剪接體組裝和構(gòu)象轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用，SR蛋白與剪接體中U1 snRNP、U2小核核糖核蛋白輔助因子（U2AF65）有相互作用，SR蛋白與pre-mRNA的結(jié)合阻止了剪接體特異性招募U1 snRNP和 U2AF65，而促進(jìn)非特異性招募［13］。而且不同SR蛋白在早期剪接體組裝中還有相互作用。Peiqi等（2016年）發(fā)現(xiàn)在OSCC組織中富含絲氨酸和精氨酸的剪接因子 3（SRSF3）過表達(dá)，并與癌前病變和癌癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。Radhakrishnan等（2016年）發(fā)現(xiàn)沉默絲氨酸/精氨酸蛋白特異性激酶2降低了HNSCC細(xì)胞的侵襲性。

Xie等（2021年）認(rèn)為另一種RBP是hnRNP，作為“RNA支架”和招募信使RNA（mRNA）和ncRNA以影響mRNA剪接和加工，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后翻譯。Huang等（2020年）認(rèn)為過表達(dá)hnRNPC促進(jìn)OSCC的增殖、遷移、侵襲和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）。Wang等（2019年）認(rèn)為hnRNP E1與外顯子中的剪接沉默元件相互作用，并抑制外顯子的包含。在HNSCC中hnRNP E1與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）的第23外顯子中的ESS結(jié)合，促進(jìn)第23外顯子遠(yuǎn)端3′剪接位點(diǎn)的使用和STAT3β的表達(dá)，過表達(dá)hnRNP E1明顯降低了STAT3α/STAT3β亞型的比例和STAT3α蛋白的表達(dá)，而較長的STAT3α編碼全長的致癌STAT3α蛋白，較短的STAT3β則編碼截短和抑制腫瘤的STAT3β蛋白。

Ellis等（2012年）和Kosti等（2012年）認(rèn)為RBP表達(dá)能自動(dòng)調(diào)節(jié)和交叉調(diào)控。Xu等（2019年）認(rèn)為在HNSCC中SR和hnRNP之間存在自動(dòng)調(diào)節(jié)和交叉調(diào)控。Jia等（2016年）認(rèn)為hnRNP L

是一種多功能剪接因子，在OSCC中既能調(diào)控SRSF3的表達(dá)，也能調(diào)控SRSF3的第4外顯子的包含，SRSF3在C端包含一個(gè)富含精氨酸/絲氨酸的RS結(jié)構(gòu)域，RS結(jié)構(gòu)域的作用是與其他蛋白質(zhì)相互作用，促進(jìn)剪接體成份的招募。SRSF3包含一個(gè)框內(nèi)終止密碼子的第4外顯子，包含第4外顯子的SRSF3將降解或編碼一個(gè)缺失RS功能域截短的SRSF3，hnRNP L可能在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后可變剪接兩個(gè)層面調(diào)控SRSF3的表達(dá)。后來研究發(fā)現(xiàn)SRSF3也調(diào)控hnRNP L的可變剪接， Xu等（2019年）認(rèn)為hnRNP L的第7外顯子包含一個(gè)框內(nèi)終止密碼子。hnRNP L具有自動(dòng)調(diào)節(jié)機(jī)制促進(jìn)其自身的第7外顯子的包含，SRSF3也具有一種自動(dòng)調(diào)節(jié)機(jī)制促進(jìn)其自身的第4外顯子包含，以維持細(xì)胞中相對穩(wěn)定的SRSF3水平。包含第7外顯子的轉(zhuǎn)錄本可以降解或編碼一個(gè)截短的hnRNP L蛋白，第7外顯子的轉(zhuǎn)錄本可以編碼全長的功能性hnRNP L蛋白。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)SRSF3抑制hnRNP L

的自動(dòng)調(diào)節(jié)，促進(jìn)hnRNP L全長功能蛋白的表達(dá)。SRSF3和hnRNP L相互抑制其自動(dòng)調(diào)節(jié)，且hnRNP L第7外顯子和SRSF3第4外顯子包含率均較低的HNSCC患者，其生存率較低。

二、HNSCC中RNA的可變剪接

1.增殖、遷移和侵襲

1.1絲氨酸/蘇氨酸激酶3（AKT3）

AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對HNSCC有重要作用。Guo等（2017年）RNA測序分析發(fā)現(xiàn)在HPV陽性口咽鱗狀細(xì)胞癌（OPSCC）中有一個(gè)AKT3剪接異構(gòu)體，AKT3剪接異構(gòu)體在腫瘤組織中的表達(dá)高于正常組織，而且還含有一個(gè)獨(dú)特的第1外顯子，促進(jìn)了OPSCC的生長，沉默AKT3異構(gòu)體抑制了多個(gè)頭頸癌細(xì)胞系生長，可能與pAKT1和pAKT1的靶點(diǎn)獨(dú)立介導(dǎo)有關(guān)。

1.2胞質(zhì)分裂作用因子5（DOCK5）

Liu等（2018年）認(rèn)為DOCK5異構(gòu)體在HPV陰性的HNSCC患者中高表達(dá)，表達(dá)量較高的患者總生存率降低，并激活HPV陰性的HNSCC的p38和MAPK/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

1.3賴氨酰氧化酶樣蛋白2（LOXL2）

Zhu等［14］認(rèn)為LOXL2驅(qū)動(dòng)非缺氧HNSCC細(xì)胞局部侵襲和刺激轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的形成。Liu等（2020年）在HPV陰性的HNSCC中發(fā)現(xiàn)了一種剪接異構(gòu)體LOXL2-Var，是另外一個(gè)新的120 bp的外顯子插入第1和2外顯子之間，形成的一個(gè)不同于LOXL2的5′非翻譯區(qū)的異構(gòu)體。LOXL2-Var在HPV陰性HNSCC患者中高表達(dá)，通過磷酸化激活FAK/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

2.自噬轉(zhuǎn)化酸性螺旋-螺旋蛋白1（TACC1）

TACC1是TACC家族的一個(gè)成員，具有TACC基因家族典型的羧基端大螺旋-螺旋結(jié)構(gòu)域（TACC的結(jié)構(gòu)域）。TACC1異構(gòu)體25（TACC1v25）在HNSCC組織和細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)，通過改變ERK的磷酸化和Akt/mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)自噬發(fā)揮抗增殖作用［15］。

3.血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）

血管生成是腫瘤生長的必要機(jī)制之一，Eswarappa等（2015年）研究顯示前體mRNA中第8外顯子的可變剪接產(chǎn)生VEGFA的兩個(gè)異構(gòu)體：VEGFAxxx和VEGFAxxxb（xxx表示編碼的氨基酸的數(shù)量），VEGFAxxx在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗血管生成活性。VEGFAxxx異構(gòu)體通常在所有組織中都表達(dá)，而VEGFA165和VEGFA165b是主要的表達(dá)異構(gòu)體類型。BISELLI-CHICOTE等研究顯示在HNSCC中VEGFAxxx和VEGFA165b過表達(dá)，而VEGFA異構(gòu)體在頭頸腫瘤的各個(gè)解剖部位上有差異表達(dá)。VEGFAxxx在咽部腫瘤中過表達(dá)，而VEGFA165b異構(gòu)體在口腔腫瘤中表達(dá)上調(diào)。VEGFA165b異構(gòu)體也與剪接因子SRSF1、SRSF6和SRSF5的表達(dá)呈正相關(guān)。

4.腫瘤免疫

4.1 CXC類趨化因子受體3（CXCR3）

Reynders等（2019年）認(rèn)為CXCR3有三種異構(gòu)體：CXCR3-A、CXCR3-B和alt，CXCR3-A異構(gòu)

體是CXCR3基因第1外顯子和第3外顯子剪接的產(chǎn)物，CXCR3-B異構(gòu)體是第2外顯子和第3外顯子剪接的產(chǎn)物。在腫瘤微環(huán)境中的CXCR3-A有助于腫瘤的生長和擴(kuò)散，而CXCR3-B異構(gòu)體有一個(gè)更長的細(xì)胞外n端，具有抗增殖作用。Chakraborty等（2008年）研究免疫抑制HNSCC患者中趨化因子CXCL10和CXCL9以及它們的受體CXCR3的兩個(gè)剪接異構(gòu)體（CXCR3-A、CXCR3-B），干擾素-α2b（IFN-α2b）通過調(diào)節(jié)CXC受體配體的相互作用，恢復(fù)HNSCC患者外周血單個(gè)核細(xì)胞受損的趨化活性。在HNSCC患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中CXCR3表達(dá)上調(diào)，而其趨化功能降低，經(jīng)過

IFN-α2b處理后CXCR3下調(diào)，CXCR3-A、CXCR3-B則上調(diào)，趨化活性恢復(fù)，間接使CXCR3-A異構(gòu)體上調(diào)，且誘導(dǎo)了細(xì)胞遷移，同時(shí)誘導(dǎo)與CXCL10/CXCL9的相互作用，從而獲得更多T淋巴細(xì)胞/自然殺傷細(xì)胞/自然殺傷T淋巴細(xì)胞在腫瘤部位的遷移，影響腫瘤的免疫反應(yīng)。

4.2 細(xì)胞程序性死亡-配體1（PD-L1）

免疫檢查點(diǎn)療法對腫瘤治療有重要意義，其中細(xì)胞程序性死亡受體-1（PD-1）/PD-L1 軸很關(guān)鍵。阻斷 PD-1/PD-L1 通路有效地減少腫瘤的生長和改善大多數(shù)實(shí)體瘤的生存率［16］。PD-1/PD-L1軸的阻斷性治療法成為有效的治療方法。PD-1/PD-L1信號軸和其他T淋巴細(xì)胞抑制通路驅(qū)動(dòng)免疫逃避的生物學(xué)機(jī)制，Hassounah等（2019年）研究提示PD-L1的異構(gòu)體通過PD-L1受體抑制T淋巴細(xì)胞的功能，并可能影響PD-1/PD-L1阻斷抗體的反應(yīng)。

5.外泌體肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ANLN）

在HNSCC組織和細(xì)胞系中檢測到ANLN的兩種主要剪接異構(gòu)體的表達(dá)：ANLN的轉(zhuǎn)錄本ANLN-201和ANLN-210，且均為高表達(dá)。敲除ANLN可抑制OSCC細(xì)胞SCC-9的增殖、遷移和侵襲。在機(jī)制上，ANLN-201與C-myc相互作用來保持其蛋白的穩(wěn)定性，在HNSCC中發(fā)揮致癌作用。而ANLN-210則通過與hnRNPC結(jié)合，然后通過外泌體轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞中，外泌體在巨噬細(xì)胞釋放ANLN-210后，通過PTEN/PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化，從而刺激HNSCC的生長［17］。

6.轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)與CD44的關(guān)系

Han等（2020年）認(rèn)為CD44是腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物之一。CD44的異構(gòu)體CD44v1、CD44v2在正常的口腔角質(zhì)形成細(xì)胞中表達(dá)，而異構(gòu)體CD44v4、CD44v6只在HNSCC中表達(dá)。Athanassiou-papaefhymiou等（2014年）研究發(fā)現(xiàn)晚期轉(zhuǎn)移性HNSCC中CD44v6高表達(dá)，表明CD44v6表達(dá)與HNSCC轉(zhuǎn)移之間存在相關(guān)性，而在Ⅳ期HNSCC中檢測到CD44v4高表達(dá)，患者也表現(xiàn)出復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的增加趨勢。

三、HNSCC中ncRNA的可變剪接及其調(diào)控機(jī)制

ncRNA也參與了人類癌癥中可變剪接的調(diào)節(jié)［18］。ncRNA可以直接或間接影響多個(gè)分子靶點(diǎn)，在多個(gè)水平上調(diào)節(jié)順式作用元件、反式作用因子或pre-mRNA轉(zhuǎn)錄，影響可變剪接過程。ncRNA介導(dǎo)的可變剪接還影響多種細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［19］。

Romero-Barrios等（2018年）研究提示長鏈非編碼RNA（lncRNA）與pre-mRNA相互作用，從而選擇不同的剪接位點(diǎn)和募集剪接因子，最終調(diào)節(jié)靶向RNA 可變剪接。lncRNA也與RNA結(jié)合蛋白相互作用來調(diào)控其靶向基因，調(diào)控可變剪接。Xu等（2018年）認(rèn)為剪接標(biāo)記組蛋白H3的36位賴氨酸位點(diǎn)的三甲基化修飾（H3K36me3）在纖維生長因子外顯子中招募hnRNP E1并參與間充質(zhì)細(xì)胞的可變剪接，Hu等（2018年）研究發(fā)現(xiàn)表皮生長因子受體（EGFR）與其反義非編碼轉(zhuǎn)錄本lncRNA EGFR-AS1的表達(dá)呈正相關(guān)。此外，EGFR-AS1通過影響EGFR依賴的PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來影響癌細(xì)胞的增殖。2021年Dhamodharan等［20］研究發(fā)現(xiàn)在HNSCC中H3K36me3的富集和EGFR第15a和15b外顯子周圍內(nèi)含子poly A位點(diǎn)促進(jìn)15b外顯子的跳躍，從而促進(jìn)EGFR-A異構(gòu)體的表達(dá)，PTBP1及其結(jié)合位點(diǎn)在EGFR和EGFR-AS1中的高表達(dá)增強(qiáng)了EGFR-A異構(gòu)體，表明EGFR-AS1與 hnRNP E1相互作用參與可變剪接。Aarunkumar等（2018年）認(rèn)為EGFR-AS1和HuR結(jié)合蛋白相互作用，并通過染色質(zhì)修飾調(diào)控可變剪接。

lncRNA也可作為剪接產(chǎn)物來調(diào)控腫瘤的生物學(xué)行為?？谇话┻^表達(dá)序列1（ORAOV1） pre-mRNA的第2外顯子和第3外顯子跳躍產(chǎn)生lncRNA ORAOV1-B亞型， ORAOV1-B與熱休克蛋白90相互作用激活TNF-κB/TNF-α環(huán)，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT，促進(jìn)OSCC的侵襲和轉(zhuǎn)移［21］。

非編碼小分子RNA（miRNA）也參與了可變剪接，Manikandan等（2015年）研究顯示，雖然miR-125b-2*和miR-125b是同一pre-mRNA，但它具有不同的種子序列，可能也具有不同的功能，在OSCC中miR-125b-2*的表達(dá)與可變剪接相關(guān)。ncRNA 可以作為可變剪接的產(chǎn)物，影響腫瘤的生物學(xué)行為，也可能通過pre-mRNA的調(diào)控、編碼小肽以及與剪接因子的關(guān)聯(lián)等參與某些癌癥相關(guān)基因的可變剪接過程。與編碼RNA相比，對lncRNA 功能的研究較少，但lncRNA也是可變剪接過程中不能忽視的參與者和調(diào)控者，鑒于以高通量測序?yàn)榇淼男录夹g(shù)的使用和創(chuàng)新設(shè)計(jì)的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)，可以預(yù)測將發(fā)現(xiàn)更多相關(guān)的ncRNA、異構(gòu)體和癌癥進(jìn)展的新調(diào)控機(jī)制［22］。

四、小結(jié)與展望

可變剪接形成不同異構(gòu)體，各自發(fā)揮著不同的功能，如STAT3受到hnRNP E1的調(diào)控產(chǎn)生相反的功能。Sun等（2013年）認(rèn)為核糖體S6 蛋白激酶4在不同腫瘤的矛盾功能，可變剪接就是影響因素之一，Chen等（2022年）揭示了其異構(gòu)體在不同的腫瘤中的作用不同?？勺兗艚訉Π℉NSCC在內(nèi)的許多癌癥的發(fā)生、發(fā)展有明顯影響。但對剪接異構(gòu)體產(chǎn)物的檢測還很少，需要開發(fā)技術(shù)提高檢測效率，且對于可變剪接在腫瘤中的機(jī)制研究還需進(jìn)一步加深。

此外，研究者們正努力開發(fā)靶向可變剪接的抗腫瘤藥物，主要包括小分子剪接調(diào)節(jié)劑和反義寡核苷酸。Sun等（2019年）認(rèn)為在OSCC中紫杉醇和抗SRSF3的反義寡核苷酸——SR-3都可能通過抑制OSCC細(xì)胞中SRSF3的第4外顯子包含，下調(diào)全長SRSF3蛋白的表達(dá)，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Seiler等（2018年）認(rèn)為用于血液系統(tǒng)腫瘤的小分子調(diào)節(jié)劑H3B-8800是剪接因子3b蛋白復(fù)合物的亞單位1的抑制劑，對剪接體基因突變的癌細(xì)胞有協(xié)同致死作用，并且已經(jīng)進(jìn)入了Ⅰ期臨床試驗(yàn)?？傮w而言藥物開發(fā)處于起步階段。這些研究讓我們了解HNSCC中的可變剪接，為精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)和個(gè)體化治療提供參考。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ Johnson D E， Burtness B， Leemans C R， et al. Head and neck squamous cell carcinoma. Nat Rev Dis Primers， 2020， 6： 92.

［2］ Yang Y， Zhou M， Zeng X， et al. The burden of oral cancer in China， 1990-2017： an analysis for the Global Burden of Disease， Injuries， and Risk Factors Study 2017. BMC Oral Health， 2021， 21（1）： 44.

［3］ Armstrong D K， Alvarez R D， Bakkum-Gamez J N， et al. NCCN guidelines insights： ovarian cancer， version 1.2019. J Natl Compr Canc Netw， 2019， 17（8）： 896-909.

［4］ Donoghue M T A， Schram A M， Hyman D M， et al. Discovery through clinical sequencing in oncology. Nat Cancer， 2020， 1（8）： 774-783.

［5］ Bonnal S C， López-Oreja I， Valcárcel J. Roles and mechanisms of alternative splicing in cancer - implications for care. Nat Rev Clin Oncol， 2020， 17（8）： 457-474.

［6］ Wright C J， Smith C W J， Jiggins C D. Alternative splicing as a source of phenotypic diversity. Nat Rev Genet， 2022， 23（11）： 697-710.

［7］ Murphy A J， Li A H， Li P， et al. Therapeutic targeting of alternative splicing： a new frontier in cancer treatment. Front Oncol， 2022， 12： 868664.

［8］ Bernard A， Boidot R， Végran F. Alternative splicing in cancer and immune cells. Cancers， 2022， 14（7）： 1726.

［9］ Zhang S， Wu X， Diao P， et al. Identification of a prognostic alternative splicing signature in oral squamous cell carcinoma. J Cell Physiol， 2020， 235（5）： 4804-4813.

［10］ Zhang J， Zhang Y Z， Jiang J， et al. The crosstalk between epigenetic mechanisms and alternative RNA processing regulation. Front Genet， 2020， 11： 998.

［11］ Gimeno-Valiente F， López-Rodas G， Castillo J， et al. Alternative splicing， epigenetic modifications and cancer： a dangerous triangle， or a hopeful one？ Cancers， 2022， 14（3）： 560.

［12］ Gao Y， Lin K T， Jiang T， et al. Systematic characterization of short intronic splicing-regulatory elements in SMN2 pre-mRNA. Nucleic Acids Res， 2022， 50（2）： 731-749.

［13］ Wan L， Deng M， Zhang H. SR splicing factors promote cancer via multiple regulatory mechanisms. Genes， 2022， 13（9）： 1659.

［14］ Zhu G， Wang L， Meng W， et al. LOXL2-enriched small extracellular vesicles mediate hypoxia-induced premetastatic niche and indicates poor outcome of head and neck cancer. Theranostics， 2021， 11（19）： 9198-9216.

［15］ Xu P， Zhao R， Zhang C Y， et al. Loss of TACC1 variant25 inducing cell proliferation and suppressing autophagy in head and neck squamous carcinoma. Cell Death Discov， 2021， 7（1）： 386.

［16］ Guo E， Mao X， Wang X， et al. Alternatively spliced ANLN isoforms synergistically contribute to the progression of head and neck squamous cell carcinoma. Cell Death Dis， 2021， 12（8）： 764.

［17］ Gao A， Pan X， Yang X， et al. Predictive factors in the treatment of oral squamous cell carcinoma using PD-1/PD-L1 inhibitors. Invest New Drugs， 2021， 39（4）： 1132-1138.

［18］ Wang X， Hua J， Li J， et al. Mechanisms of non-coding RNA-modulated alternative splicing in cancer. RNA Biol， 2022， 19（1）： 541-547.

［19］ Liu Y， Liu X， Lin C， et al. Noncoding RNAs regulate alternative splicing in Cancer. J Exp Clin Cancer Res， 2021， 40（1）： 11.

［20］ Dhamodharan S， Rose M M， Chakkarappan S R， et al. Genetic variant rs10251977 （G>A） in EGFR-AS1 modulates the expression of EGFR isoforms A and D. Sci Rep， 2021， 11： 8808.

［21］ Luo X， Jiang Y， Chen F， et al. ORAOV1-B promotes OSCC metastasis via the NF-κB-TNFα loop. J Dent Res， 2021， 100（8）： 858-867.

［22］ Ouyang J， Zhong Y， Zhang Y， et al. Long non-coding RNAs are involved in alternative splicing and promote cancer progression. Br J Cancer， 2022， 126（8）： 1113-1124.

（收稿日期：2022-10-25）

（本文編輯：楊江瑜）