濾膜法、多管發(fā)酵法檢驗(yàn)生活飲用水中微生物的比較

劉素玉

摘 要：在枯水期采集200份水樣（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份），豐水期采集水樣200份（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份）。對(duì)所有水樣分別采取濾膜法、多管發(fā)酵法檢驗(yàn)，比較兩種檢測(cè)方法的微生物檢出情況。結(jié)果表明，多管發(fā)酵法對(duì)枯水期的大腸菌群總檢出率（23.50%）高于濾膜法（16.00%），豐水期的大腸菌群總檢出率（15.00%）高于濾膜法（9.00%），出廠水的大腸菌群總檢出率（13.50%）高于濾膜法（8.50%），末梢水的大腸菌群總檢出率（24.50%）高于濾膜法（16.50%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在生活飲用水的微生物檢驗(yàn)中，采用多管發(fā)酵法的檢出效果優(yōu)于濾膜法，可作為水監(jiān)測(cè)的首選方法。

關(guān)鍵詞：生活飲用水；微生物檢驗(yàn)技術(shù)；濾膜法；多管發(fā)酵法

Abstract： In the dry period， 200 water samples were collected （100 water samples from the factory， 100 water samples from the end water）， and 200 water samples were collected in the rich period （100 water samples from the factory， 100 water samples from the end water）. All water samples were tested by the filter membrane method and multi-tube fermentation method， and the microbial detection of the two testing methods were compared. The results show that the total detection rate of coliform in the dry water period （23.50%） is higher than that in the membrane method （16.00%）， the total detection rate of coliform in the rich water period （15.00%） is higher than that in the membrane method （9.00%）， the total detection rate of coliform in the factory water （13.50%） is higher than that in the membrane method （8.50%）， and the total detection rate of coliform in the end water （8.50%） is higher than that in the membrane method. The total coliform detection rate （24.50%） is higher than the membrane test （16.50%）， the difference is statistically significant （P＜0.05）. In the microbiological testing of drinking water， the detection effect of the multi-tube fermentation method is better than that of the membrane test， which can be used as the preferred method for water monitoring.

Keywords： domestic drinking water; microbiological testing technology; filter membrane method; multi-tube fermentation method

生活飲用水是人們?nèi)粘；顒?dòng)中不可缺少的物質(zhì)，合格的水質(zhì)量是保障居民日常生活的基礎(chǔ)。大腸菌群超標(biāo)是常見(jiàn)的生活飲用水質(zhì)量問(wèn)題，當(dāng)生活飲用水中的大腸埃希菌、耐熱大腸菌群等超標(biāo)時(shí)，使用人群容易爆發(fā)水源性腸道傳染病，給家庭、社會(huì)醫(yī)療增加負(fù)擔(dān)[1]。在生活飲用水日常監(jiān)測(cè)工作中，通常需要經(jīng)過(guò)微生物檢驗(yàn)來(lái)了解水中大腸菌群的含量，以便采取措施來(lái)改善飲用水質(zhì)量，而不同微生物檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)效果存在差異。本研究觀察比較了濾膜法、多管發(fā)酵法兩種方法對(duì)生活飲用水中大腸菌群的檢驗(yàn)效果。

1 材料和方法

1.1 材料與設(shè)備

試管、微孔濾膜（廣東環(huán)凱生物科技有限公司，規(guī)格：直徑47 mm，孔徑0.45 μm）、顯微鏡（重慶市奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司，愈械注準(zhǔn)20192220096，型號(hào)規(guī)格B203）、無(wú)齒鑷子、無(wú)油隔膜真空泵（四川福茂元生物科技有限公司，規(guī)格型號(hào)VP-10L）、培養(yǎng)皿（90 mm×90 mm）、恒溫培養(yǎng)箱（松下冷鏈大連有限公司，遼械注準(zhǔn)20182220097，規(guī)格MIR-180）、臺(tái)式蒸汽壓力滅菌器（騰氏常州醫(yī)療設(shè)備有限公司，蘇械注準(zhǔn)20182570922，規(guī)格型號(hào)2540EKA）。

1.2 水樣采集

依據(jù)工作的要求，選取本地區(qū)20個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，開(kāi)展供水工程的水質(zhì)采樣監(jiān)測(cè)。在枯水期采集水樣200份（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份），豐水期采集水樣200份（出廠水水樣100份，末梢水水樣100份），對(duì)所有水樣開(kāi)展研究。

1.3 檢測(cè)方法

檢測(cè)依據(jù)為《中華人民共和國(guó)水污染防治法》《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法 微生物指標(biāo)》（GB/T 5750.12—2006），檢測(cè)結(jié)果判定依據(jù)《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749—2022）。

1.3.1 濾膜法檢驗(yàn)

將蒸餾水裝入燒杯內(nèi)，使用酒精燈對(duì)微孔濾膜加熱滅菌，沸騰水浴15 min/次，取出換水繼續(xù)煮沸滅菌，共3次。用鑷子夾出濾膜，以粗糙面向上置于無(wú)菌濾床上。取待檢測(cè)水樣100 mL注入，進(jìn)行抽濾，抽氣5 s，使細(xì)菌被截留。用鑷子將濾膜轉(zhuǎn)移到紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，裝入恒溫箱，37 ℃條件培養(yǎng)1 d。將濾膜置于顯微鏡下計(jì)數(shù)和鑒定大腸菌群數(shù)。

1.3.2 多管發(fā)酵法檢驗(yàn)

培養(yǎng)液制備：蒸餾水1 000 mL+蛋白胨25 g+氯化鈉15 g+乳糖15 g，加熱牛肉膏10 g使其充分溶解，調(diào)節(jié)pH值為7.1～7.5，加1.5%溴甲酚紫乙醇溶液2 mL，混合均勻，裝入試管內(nèi)后高溫（110～120 ℃）高壓滅菌20 min，取出貯存?zhèn)溆谩?/p>

準(zhǔn)備15個(gè)試管，分成3份，每份5管。第1份5個(gè)管內(nèi)裝有培養(yǎng)液5 mL，分別加水樣10 mL。第2份5個(gè)管內(nèi)裝有培養(yǎng)液10 mL，分別加水樣1 mL。3份5個(gè)管內(nèi)裝有10 mL培養(yǎng)液，加入1∶10稀釋的水樣。將所有裝有樣本的試管置于37 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 d。取出試管進(jìn)行觀察，無(wú)產(chǎn)酸產(chǎn)氣說(shuō)明陰性；有產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況則轉(zhuǎn)種植于伊紅美藍(lán)瓊脂板上，放入恒溫箱37 ℃培養(yǎng)1 d。取出，肉眼觀察菌落形態(tài)，取染色顏色較深區(qū)域的中心部位菌落，使用顯微鏡計(jì)數(shù)及鑒定大腸菌群數(shù)。

1.4 觀察比較指標(biāo)

①比較濾膜法、多管發(fā)酵法對(duì)枯水期水樣的大腸菌群檢出情況。②比較濾膜法、多管發(fā)酵法對(duì)豐水期水樣的大腸菌群檢出情況。③比較濾膜法、多管發(fā)酵法對(duì)出廠水的大腸菌群檢出情況。④比較濾膜法、多管發(fā)酵法對(duì)末梢水的大腸菌群檢出情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)分析SPSS 25.0，計(jì)數(shù)資料用%表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯水期大腸菌群檢出情況對(duì)比

如表1所示，多管發(fā)酵法對(duì)枯水期的大腸菌群總檢出率（23.50%）高于濾膜法（16.00%）（P＜0.05）。

2.2 豐水期大腸菌群檢出情況對(duì)比

如表2所示，多管發(fā)酵法對(duì)豐水期的大腸菌群總檢出率（15.00%）高于濾膜法（9.00%）（P＜0.05）。

2.3 出廠水大腸菌群檢出情況對(duì)比

如表3所示，多管發(fā)酵法對(duì)出廠水的大腸菌群總檢出率（13.50%）高于濾膜法（8.50%）（P＜0.05）。

2.4 末梢水大腸菌群檢出情況對(duì)比

如表4所示，多管發(fā)酵法對(duì)末梢水的大腸菌群總檢出率（24.50%）高于濾膜法（16.50%）（P＜0.05）。

3 結(jié)論與討論

當(dāng)前，居民的飲用水主要來(lái)源是地表水、淡水湖泊、泉眼、地下水等，通常水源有大量動(dòng)植物繁衍，加上水產(chǎn)養(yǎng)殖、各類(lèi)垃圾排泄物的影響，水的質(zhì)量難以保證[2]。生活飲用水質(zhì)量會(huì)直接影響居民的生活及其身體健康，長(zhǎng)期飲用微生物超標(biāo)的飲用水，容易發(fā)生介水傳染病，隨著水污染越來(lái)越嚴(yán)重，居民飲用水的安全系數(shù)不斷降低[3]。目前，為使水質(zhì)符合生活飲用水質(zhì)量相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，一般都會(huì)對(duì)水進(jìn)行常規(guī)過(guò)濾、消毒等處理，但水質(zhì)不合格情況仍時(shí)有發(fā)生，需要進(jìn)行監(jiān)測(cè)[4]。

多管發(fā)酵法、濾膜法檢驗(yàn)是常用的生活飲用水檢驗(yàn)方法，均不需要昂貴的設(shè)備，人員經(jīng)過(guò)基本的技術(shù)培訓(xùn)便可以操作，易于在基層中推廣普及。其中多管發(fā)酵法是將待檢測(cè)水樣稀釋后，分別接種到培養(yǎng)液中培養(yǎng)，再通過(guò)觀察、計(jì)數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)情況判斷水質(zhì)，其優(yōu)勢(shì)是不受濁度的影響，但檢測(cè)操作煩瑣、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)[5]。濾膜法檢驗(yàn)是將待測(cè)水樣注入已滅菌的微孔濾膜上，抽濾使微生物被截留在濾膜上，再進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定，該方法操作簡(jiǎn)單、檢查快速，可以去除樣品中其他雜質(zhì)的干擾[6]。本研究結(jié)果顯示，多管發(fā)酵法、濾膜法檢驗(yàn)均可以檢驗(yàn)出飲用水中的大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、雜菌，其中多管發(fā)酵法對(duì)枯水期、豐水期、出廠水、末梢水的大腸菌群總檢出率均高于濾膜法檢驗(yàn)（P＜0.05）。因此，在生活飲用水豐水期、枯水期、出廠水、末梢水的監(jiān)測(cè)中，使用多管發(fā)酵法檢驗(yàn)對(duì)大腸菌群、雜菌等微生物的檢出率更高、更加準(zhǔn)確，可作為優(yōu)先選擇的水監(jiān)測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)

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