白蠟花粉最佳離體萌發(fā)培養(yǎng)基篩選

劉 蓉,吳德軍,王因花,任 飛,李 麗,燕麗萍,周曉鋒

(1.山東省林業(yè)科學(xué)研究院,山東省林木遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 濟(jì)南 250014;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)煙臺(tái)研究院,山東 煙臺(tái) 264670)

白蠟屬(Fraxinus)植物具有耐寒、耐旱、耐澇、耐鹽堿,對(duì)土壤要求不嚴(yán),生長(zhǎng)速度快、樹齡長(zhǎng)、生長(zhǎng)繁殖比較容易、適應(yīng)性較強(qiáng)、樹木材質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于防護(hù)林和城市綠化中[1],是重要的園林綠化樹種。白蠟屬植物雌雄異株,風(fēng)媒傳粉,混栽時(shí)極易天然授粉雜交[2],種子變異性大,影響景觀效果。雜交育種可以對(duì)白蠟(Fraxinuschinensis)的優(yōu)良性狀進(jìn)行有目的的雜交組合,并且不需要繁雜的去雄等工作,因此可作為培育白蠟優(yōu)良樹種的重要手段之一?；ǚ刍盍Φ难芯繉?duì)植物后續(xù)的授粉受精具有重要的意義。白蠟單花花粉產(chǎn)量不高,適用于花枝采集法采集花粉,將花枝剪下后水培,花朵自然散粉后再進(jìn)行收集[3]。收集后的花粉需要進(jìn)行活力檢測(cè),通常分為萌發(fā)測(cè)定和非萌發(fā)測(cè)定[4];與后者相比,前者簡(jiǎn)單快速、應(yīng)用范圍廣、結(jié)果更可靠[5],分固體培養(yǎng)基法和液體培養(yǎng)基法兩種。體外花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)的研究是鑒定環(huán)境因素和基因型差異對(duì)花粉活力的影響的有效方式[6]。不同的植物適用的方法不同,如百合 (Lilium)花粉表面有一層油狀物質(zhì),使用固體培養(yǎng)基法難以操作且培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng),因此劉向東等[7]選擇了采用固體培養(yǎng)基法測(cè)定花粉活力,而屈海泳等[8]在檢測(cè)桃(Prunuspersica)花粉活性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),桃花花粉活力不適宜采用液體培養(yǎng)基法測(cè)定。采用花粉離體測(cè)定法最重要的是培養(yǎng)基的成分以及培養(yǎng)的適宜條件,研究表明蔗糖可以為花粉的萌發(fā)提供碳源,硼酸可以促進(jìn)蔗糖的吸收和代謝,在一定濃度范圍內(nèi)可以促進(jìn)花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng);鈣離子調(diào)控花粉管的生長(zhǎng)[9],外部施加鈣離子含量的高低取決于花粉自身鈣離子的含量,過多會(huì)抑制花粉管的生長(zhǎng)[10],在適宜的培養(yǎng)基上,能夠準(zhǔn)確地分析花粉萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)情況[11]。2007年,宛文鵬[12]通過研究初步得到了比較適宜水曲柳(Fraxinusmandshurica)花粉萌發(fā)的培養(yǎng)基,李淑娟[13]在此基礎(chǔ)上,采用基于BBD的響應(yīng)面法優(yōu)化了水曲柳花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基,但并沒有深入探討不同培養(yǎng)基中花粉萌發(fā)率及花粉管伸長(zhǎng)的情況。Kremer等[14]研究了不同培養(yǎng)溫度下美國(guó)紅梣(Fraxinuspennsylvanica)的變種‘Marshall’的花粉萌發(fā)率和花粉管生長(zhǎng)狀況,得出適宜的溫度應(yīng)該是高于20 ℃,但萌發(fā)率不高,均低于20%。然而,目前對(duì)于白蠟屬其他種的花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)條件以及不同物理狀態(tài)的培養(yǎng)基下白蠟花粉的萌發(fā)情況鮮有研究。

美國(guó)紅梣‘魯蠟5號(hào)’(Fraxinuspennsylvanica‘Lula 5’)為白蠟雄株,是山東省林業(yè)科學(xué)研究院(山東林科院)從山東省栽培的紅梣中選育出的優(yōu)良無性系,具有普通白蠟的一切優(yōu)點(diǎn),同時(shí)在生長(zhǎng)速度、出苗周期及觀賞價(jià)值方面是普通白蠟的2～3倍[15];絨毛白蠟‘金箭’(F.velutina‘Jinjian’)為白蠟雄株,是由山東林科院從收集的絨毛白蠟種質(zhì)資源中選育的白蠟新品種,具有速生、樹形優(yōu)美、耐鹽堿性強(qiáng)等觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值高的優(yōu)良特性,二者均具備特異性、一致性和穩(wěn)定性,樹干通直挺拔,分枝角度小,生長(zhǎng)量大,是速生白蠟的優(yōu)化樹種,可用作城市園林綠化和荒山造林。為此,本研究采用絨毛白蠟‘金箭’和美國(guó)紅梣‘魯蠟5號(hào)’的花粉進(jìn)行離體萌發(fā)測(cè)定,研究其適宜的培養(yǎng)條件,旨在為白蠟的雜交育種提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)地位于山東省濟(jì)南市山東林科院苗圃中試基地(117.094 27°E,36.726 22°N),海拔26 m,年均氣溫在 14.3 ℃左右,無霜期 178 d;年均降水量 665.7 mm,降雨多集中在 6—8 月,占全年降雨量的 65%以上。

1.2 試驗(yàn)材料

2020年 3 月選取生長(zhǎng)健壯、發(fā)育良好的絨毛白蠟‘金箭’和美國(guó)紅梣‘魯蠟5號(hào)’做采粉樹,于開花前 1～2 d,選取花質(zhì)均一、花期一致的花蕾套袋并掛牌標(biāo)記,防止花粉污染。在雄樹盛花期前,將花枝剪下,室內(nèi)20～25 ℃下水培,散粉后收集花粉,從8:00—16:00每2 h隨機(jī)采集2～5個(gè)花枝的花粉,連續(xù)3 d對(duì)同一花枝采集花粉,直至花朵萎蔫,分別收集花粉放入離心管中,貼上標(biāo)簽備用。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 固體和液體培養(yǎng)基法測(cè)定花粉活力

將花粉均勻撒布在固體培養(yǎng)基(瓊脂質(zhì)量濃度為5 g/L)和液體培養(yǎng)基上,將培養(yǎng)皿置于25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)2.5 h后觀察花粉萌發(fā)情況,統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率,培養(yǎng)基配方見表1。

表1 培養(yǎng)基配方表

觀察時(shí)突出的花粉管長(zhǎng)度大于寬度即視為萌發(fā),取3個(gè)視野的平均值作為該培養(yǎng)皿的花粉萌發(fā)率及花粉管長(zhǎng)度,每個(gè)視野花粉數(shù)不少于100粒,每個(gè)樣品設(shè)置3次重復(fù)?；ǚ勖劝l(fā)率為已萌發(fā)的花粉數(shù)占花粉總數(shù)之百分比。

1.3.2 花粉離體培養(yǎng)時(shí)間和花粉管長(zhǎng)度測(cè)量

采用固體培養(yǎng)基法進(jìn)行離體培養(yǎng),培養(yǎng)基成分為蔗糖 150 g/L+ 硼酸 20 mg/L+ 氯化鈣 30 mg/L,在 25 ℃ 條件下,在恒溫培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng) 0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 h 后檢測(cè)花粉萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)情況,每個(gè)視野花粉數(shù)不少于100粒,重復(fù) 3 次。隨機(jī)選擇20個(gè)花粉管,用顯微鏡觀測(cè)(操作軟件中自帶標(biāo)尺)測(cè)量花粉管長(zhǎng)度。

1.3.3 3因素3水平L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

分別將3種濃度的蔗糖、硼酸、氯化鈣按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法添加于瓊脂粉濃度為5 g/L的固體培養(yǎng)基中,測(cè)定白蠟花粉活力,因素及水平見表2。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素和水平

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用Excel 2010進(jìn)行處理,繪制圖表,用IBM SPSS Statistics 21進(jìn)行差異顯著性分析及Duncan多重比較,數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 固體與液體培養(yǎng)基法測(cè)定花粉活力對(duì)比

試驗(yàn)采用固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基分別測(cè)定‘金箭’‘魯蠟5號(hào)’花粉的萌發(fā)情況見圖1。由圖1可知,從培養(yǎng)基類型來說,‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’的花粉均在02號(hào)固體培養(yǎng)基上萌發(fā)率最高,固體培養(yǎng)基上‘金箭’的花粉萌發(fā)率均顯著高于液體培養(yǎng)基,02和03號(hào)固體培養(yǎng)基上的‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率顯著高于液體培養(yǎng)基,01和04號(hào)固液培養(yǎng)基無顯著差異。從品種來說,01號(hào)固體培養(yǎng)基上的 ‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率比‘金箭’高16.03百分點(diǎn),02、03、04號(hào)固體培養(yǎng)基上的‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率均比較小,01、02、03、04號(hào)液體培養(yǎng)基上的 ‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率分別比‘金箭’高25.63、11.42、15.66、19.53百分點(diǎn)。

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。Different lowercase letters indicate significant differences (P<0.05). The same below.

‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’花粉的萌發(fā)情況見圖2、圖3。

A.固體培養(yǎng)基solid medium;B.液體培養(yǎng)基liquid medium。數(shù)字為培養(yǎng)基編號(hào)Number is medium No.。下同。The same below.

圖3 固體培養(yǎng)基法與液體培養(yǎng)基法測(cè)定‘魯蠟5號(hào)’花粉活力Fig.3 Pollen vitality of ‘Lula 5’ was on solid and liquid medium

由圖2、圖3可知,固體培養(yǎng)基上較難均勻散播花粉,花粉易堆積,影響后續(xù)觀察,但花粉萌發(fā)率比液體培養(yǎng)基高;液體培養(yǎng)基上的花粉分布均勻,易于統(tǒng)計(jì)觀察,但花粉萌發(fā)率較低。綜上,‘金箭’‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率均為固體培養(yǎng)基優(yōu)于液體培養(yǎng)基,花粉萌發(fā)率以02號(hào)培養(yǎng)基最高,其中‘金箭’在02號(hào)固體培養(yǎng)基上的花粉萌發(fā)率比液體培養(yǎng)基的高21.86%,‘魯蠟5號(hào)’在02號(hào)固體培養(yǎng)基上的花粉萌發(fā)率比液體培養(yǎng)基的高12.15%,測(cè)定白蠟花粉活力仍是固體培養(yǎng)基更佳。

2.2 花粉離體培養(yǎng)時(shí)間和花粉管長(zhǎng)度測(cè)量

通過對(duì)白蠟花粉的萌發(fā)以及花粉管的生長(zhǎng)情況(圖4、圖5)觀察可以看出,‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’花粉的萌發(fā)率隨培養(yǎng)時(shí)間的變化趨勢(shì)相同,均為快速上升后趨于穩(wěn)定,其中‘金箭’的花粉萌發(fā)率在0.5～1.5 h和1.5～2.5 h內(nèi)均顯著上升,隨后保持穩(wěn)定;‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率在0.5～1.5 h內(nèi)顯著上升后保持穩(wěn)定,可知‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)的速度比‘金箭’快?！鸺汀斚?號(hào)’的花粉管長(zhǎng)度在0.5～5.5 h內(nèi)持續(xù)增加,‘金箭’在0.5～1.5 h和1.5～2.5 h內(nèi)增加幅度較大,‘魯蠟5號(hào)’在0.5～1.5 h內(nèi)增加幅度較大,‘魯蠟5號(hào)’初期增長(zhǎng)的速度高于‘金箭’,但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),‘金箭’的花粉管長(zhǎng)度逐漸大于‘魯蠟5號(hào)’。綜上,培養(yǎng)2.5 h左右的花粉適宜進(jìn)行花粉生活力的觀察和計(jì)數(shù);1.5 h后的花粉管長(zhǎng)且彎曲,不利于測(cè)量統(tǒng)計(jì),因此試驗(yàn)選擇在0.5 h時(shí)觀察并測(cè)量花粉管長(zhǎng)度。

圖4 離體培養(yǎng)時(shí)間對(duì)‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)及花粉管伸長(zhǎng)的影響Fig.4 Effects of germination time in vitro on pollen germination and pollen tube length of Jinjian’ and ‘Lula 5’

圖5 ‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’花粉的萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)隨培養(yǎng)時(shí)間的變化情況Fig.5 Changes of pollen germination and pollen tube growth with germination time of ‘Jinjian’ and ‘Lula 5’

2.3 花粉活力測(cè)定3因素正交試驗(yàn)

將培養(yǎng)基成分蔗糖、硼酸及氯化鈣3個(gè)影響白蠟花粉萌發(fā)特性的因素,按照L9(34)正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果見表3—表6。

表3 正交L9(34)試驗(yàn)對(duì) ‘金箭’花粉萌發(fā)率及花粉管長(zhǎng)度的影響

表4 3個(gè)因素的不同水平對(duì)‘金箭’花粉生長(zhǎng)情況的影響

表5 正交L9(34)試驗(yàn)對(duì)‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)率及花粉管長(zhǎng)度的影響

表6 3個(gè)因素的不同水平對(duì)‘魯蠟5號(hào)’花粉生長(zhǎng)情況的影響

由表3可知,對(duì)于‘金箭’來說,4號(hào)培養(yǎng)基的萌發(fā)率最高,為60.86%,顯著高于除6號(hào)和9號(hào)以外的其余培養(yǎng)基;2號(hào)的萌發(fā)率最低,僅有11.29%,顯著低于除1號(hào)、3號(hào)外的其余培養(yǎng)基。從花粉管長(zhǎng)度來看,4號(hào)培養(yǎng)基的長(zhǎng)度為197.49 μm,顯著高于其余培養(yǎng)基, 8號(hào)的長(zhǎng)度最短,為95.66 μm。由表4可知,不同濃度的蔗糖對(duì)‘金箭’花粉萌發(fā)率的影響顯著,最佳的濃度為150 g/L,其次是200 g/L,二者之間差異不顯著;而不同濃度的硼酸和氯化鈣對(duì)花粉離體萌發(fā)率影響較小,硼酸的最優(yōu)濃度為20 mg/L,氯化鈣的最優(yōu)濃度為30 mg/L;不同水平的蔗糖、硼酸、氯化鈣對(duì)花粉管生長(zhǎng)的影響均不顯著。對(duì)表中數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析(表4),由Ⅲ型平方和比較可知,對(duì)‘金箭’花粉萌發(fā)率的影響從大到小依次為:蔗糖>硼酸>氯化鈣,最優(yōu)水平組合為A2B1C2,即150 g/L蔗糖+ 20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣;其次是A3B3C2。對(duì)‘金箭’花粉管伸長(zhǎng)的影響氯化鈣>蔗糖>硼酸,最優(yōu)水平組合為A2B1C2,即150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣,由此推論3個(gè)因子最佳組合為4號(hào)培養(yǎng)基150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣。

對(duì)于‘魯蠟5號(hào)’來說,4號(hào)培養(yǎng)基的萌發(fā)率最高,為69.12%,顯著高于除9號(hào)外的其余培養(yǎng)基;8號(hào)的萌發(fā)率最低,為21.6%,顯著低于除2號(hào)外的其余培養(yǎng)基。從花粉管長(zhǎng)度來看,4號(hào)培養(yǎng)基的長(zhǎng)度最長(zhǎng)為221.25 μm,顯著高于2號(hào)、5號(hào)、7號(hào)、8號(hào),與其余培養(yǎng)基無顯著差異;8號(hào)的長(zhǎng)度最短為118.88 μm,顯著低于4號(hào)培養(yǎng)基。綜合來看,4號(hào)培養(yǎng)基的花粉生長(zhǎng)情況最佳,其次為9號(hào),8號(hào)的花粉生長(zhǎng)情況最差。由表6可知,不同濃度的硼酸對(duì)‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)率的影響顯著,最佳的濃度為40 mg/L,其次是20 mg/L,二者之間差異不顯著。而不同濃度的蔗糖和氯化鈣對(duì)花粉離體萌發(fā)率影響較小,蔗糖的最優(yōu)濃度為150 g/L,氯化鈣的最優(yōu)濃度為30 mg/L。不同水平的蔗糖、硼酸、氯化鈣對(duì)花粉管生長(zhǎng)的影響均不顯著。由Ⅲ型平方和比較可得,對(duì)‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)率的影響從大到小依次為:硼酸>蔗糖>氯化鈣,最優(yōu)水平組合為A2B3C2,即蔗糖150 g/L、硼酸40 mg/L、氯化鈣30 mg/L。對(duì)花粉管伸長(zhǎng)的影響蔗糖>氯化鈣>硼酸,最優(yōu)水平組合為A2B1C2,與組合A2B3C2之間差異不顯著。因此,就‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)而言,3個(gè)因素的最優(yōu)組合是A2B3C2,即150 g/L蔗糖+40 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣,其次是4號(hào)培養(yǎng)基150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣。

3 討 論

1)培養(yǎng)基不同的物理狀態(tài)對(duì)花粉的生長(zhǎng)與萌發(fā)有影響,試驗(yàn)結(jié)果得出白蠟花粉在固體培養(yǎng)基上的萌發(fā)和生長(zhǎng)均優(yōu)于液體培養(yǎng)基,與屈海泳等[8]對(duì)桃(Prunuspersica)花粉萌發(fā)得出的結(jié)論一致,出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能有兩方面,一是由于花粉萌發(fā)需要一定的空氣,液體培養(yǎng)基完全使花粉與外界隔離,花粉得不到充足的空氣影響其發(fā)育,導(dǎo)致花粉萌發(fā)率降低;二是花粉的密度不合適,屈海泳等[8]表示培養(yǎng)基中花粉密度越大萌發(fā)率越低,而武沖等[16]的研究發(fā)現(xiàn)液體培養(yǎng)基培養(yǎng)花粉時(shí)密度至少要達(dá)到10 000粒/mL,兩種截然不同的結(jié)論還有待后續(xù)進(jìn)行研究分析。前人研究表明,采用適宜配方的液體培養(yǎng)基測(cè)定茅蒼術(shù)(Atractylodeslancea)花粉活力,萌發(fā)率能夠達(dá)到62.1%[17];林開勤等[10]使用液體培養(yǎng)基法測(cè)定浙江紅山茶(Camelliachekiangoleosa)花粉的活力高達(dá)88.36%,說明對(duì)于部分植物,使用液體培養(yǎng)基法測(cè)定花粉活力是可行的,并且本試驗(yàn)中使用02號(hào)液體培養(yǎng)基測(cè)定‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率也達(dá)到了39.6%,顯著高于液體培養(yǎng)基的其他處理。因此綜合來看,液體培養(yǎng)法具有方便、快捷、易操作,花粉分布比較均勻,便于統(tǒng)計(jì)計(jì)算[18]等優(yōu)點(diǎn),但很多試驗(yàn)表明,液體培養(yǎng)基中花粉的萌發(fā)率較低,且培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)出現(xiàn)花粉管破裂的現(xiàn)象[19],僅適合部分植物,而固體培養(yǎng)基法更適宜大部分植物的花粉進(jìn)行萌發(fā),花粉散布不均勻、易堆積等問題可以通過改進(jìn)實(shí)驗(yàn)操作方法來解決,比解決液體培養(yǎng)基法存在的問題更容易。

2)花粉能否正常萌發(fā)和花粉管能否正常伸長(zhǎng)直接影響植物的受精作用?！鸺汀斚?號(hào)’的花粉在0.5 h后均出現(xiàn)萌發(fā)跡象且花粉管長(zhǎng)度相近,在培養(yǎng)時(shí)間內(nèi),花粉管長(zhǎng)度隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)在不斷增加,2.5 h后萌發(fā)率均能達(dá)到最高,且花粉管生長(zhǎng)速度也趨于平緩,萌發(fā)速度比遼寧楊(Populus×liaoningensis)、日本海棠(Malus×floribunda)和大葉相思(Acaciaauriculiformis)等花粉快[20-22],比鐘花櫻(Prunuscampanulata)稍慢[23],萌發(fā)速度相較于其他樹種偏快。相關(guān)性分析表明‘金箭’的花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度存在顯著正相關(guān),而‘魯蠟5號(hào)’的花粉萌發(fā)率和花粉管長(zhǎng)度無相關(guān)關(guān)系,研究時(shí)應(yīng)區(qū)別對(duì)待。

3)目前許多研究表明,在離體培養(yǎng)條件下,適宜濃度的蔗糖、硼和鈣能有效提高花粉的萌發(fā)率,對(duì)花粉管的伸長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用[24]。本試驗(yàn)表明3個(gè)影響因素中蔗糖對(duì)‘金箭’花粉萌發(fā)有顯著影響,與李淑娟[13]得出的蔗糖對(duì)絨毛白蠟花粉萌發(fā)至關(guān)重要的結(jié)論一致,對(duì)‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)有顯著影響的是硼酸,氯化鈣均無顯著影響,與Luo等[25]的研究一致。適合白蠟最優(yōu)的花粉離體培養(yǎng)最優(yōu)蔗糖濃度為150 g/L,高于或低于此濃度萌發(fā)率均會(huì)有所降低,與茶樹[10]、浙江紅山茶[10]、桂櫻(Prunuslaurocerasus)[26]等所需的蔗糖濃度一致,說明150 g/L的蔗糖濃度對(duì)于大多數(shù)種類植物的花粉離體萌發(fā)較為合適。適宜‘金箭’和‘魯蠟5號(hào)’花粉萌發(fā)的硼酸濃度略有差異,但濃度為20和40 mg/L時(shí)二者均有較高的萌發(fā)率,適宜白蠟花粉萌發(fā)的氯化鈣濃度為30 mg/L,高于或低于此濃度均會(huì)抑制花粉的萌發(fā)。李淑娟[13]等研究發(fā)現(xiàn)適宜絨毛白蠟花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基為150 g/L蔗糖+40 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣,本研究表明適宜白蠟花粉萌發(fā)的蔗糖濃度為150 g/L,硼酸濃度為20 mg/L或40 mg/L,氯化鈣濃度為30 mg/L,試驗(yàn)結(jié)果相近。

4 結(jié) 論

相比于液體培養(yǎng)基法,白蠟屬植物更適合采用固體培養(yǎng)基法測(cè)定其花粉活力,但如果能解決花粉在液體培養(yǎng)基中的透氣性問題,以及探索出適宜的花粉密度,那么液體培養(yǎng)基法一定是更加簡(jiǎn)單快速測(cè)定白蠟花粉活力的方法。觀察白蠟花粉生長(zhǎng)情況時(shí)發(fā)現(xiàn),白蠟花粉的最適離體培養(yǎng)基為4號(hào)150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化鈣,花粉的萌發(fā)速度較快,0.5～1.5 h的培養(yǎng)時(shí)間為快速萌發(fā)階段,培養(yǎng)2.5 h后即可以統(tǒng)計(jì)花粉的萌發(fā)情況,但白蠟屬不同種的花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度的相關(guān)性有差異。