無機(jī)鹽、維生素及生長調(diào)節(jié)劑對(duì)花臉香蘑菌絲生長的影響*

崔 曉，孔 怡，李秀梅，唐麗娜，于清偉

（泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 食用菌研究所，山東 泰安 271000）

花臉香蘑（Lepista sordida）隸屬于真菌界（Fungi）擔(dān)子菌門（Basidiomycota）傘菌綱（Agaricomycetes）傘菌目（Agaricales）口蘑科（Tricholomataceae）香蘑屬（Lepista），又叫紫晶蘑、紫花臉等，是一種大型草腐菌[1-2]。花臉香蘑主要分布于我國東北地區(qū)及河北、山東、四川、云南、貴州等省份，其子實(shí)體顏色艷麗，有獨(dú)特且濃郁的芳香氣味，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。因此，花臉香蘑不僅是餐桌上的美味佳肴，還兼具防癌、抗腫瘤等功效，是一種優(yōu)良珍稀食用菌，具有廣闊市場空間[3-6]。

目前對(duì)花臉香蘑的研究主要集中在野生資源的分類鑒定、品種選育、栽培等方面，對(duì)其菌絲生長的報(bào)道較少，主要集中在生物學(xué)特性、液體發(fā)酵等方面[7-14]。菌絲生長狀態(tài)是食用菌能否實(shí)現(xiàn)人工栽培的關(guān)鍵。在對(duì)其他一些食用菌的研究中發(fā)現(xiàn)，無機(jī)鹽、維生素及植物生長調(diào)節(jié)劑可對(duì)菌絲生長表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)或抑制作用[15-18]。因此，通過探索不同種類和不同濃度的無機(jī)鹽、維生素及植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)花臉香蘑菌絲生長的影響，以期為花臉香蘑菌種培養(yǎng)、人工栽培等技術(shù)的優(yōu)化提供理論指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌株花臉香蘑“ts916”，由泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。

1.2 培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20 g·L-1、蛋白胨2 g·L-1、瓊脂20 g·L-1，蒸餾水1 L，pH 自然。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)以不同培養(yǎng)基中菌絲的生長速度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究不同物質(zhì)對(duì)花臉香蘑菌絲生長的作用。菌絲培養(yǎng)所用培養(yǎng)皿直徑為90 mm，按每皿20 mL培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)制作平板。以孔徑為0.4 cm 的打孔器取菌塊，之后分別接種于各試驗(yàn)培養(yǎng)基中，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行暗培養(yǎng)。接種15 d 后，以“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑，據(jù)此計(jì)算菌絲的生長速度，并觀察和記錄菌落的形態(tài)特征。依據(jù)前期預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，確定本試驗(yàn)中添加無機(jī)鹽、維生素及植物生長調(diào)節(jié)劑的濃度。每組處理均重復(fù)5 次。

1.3.1 無機(jī)鹽試驗(yàn)

供試無機(jī)鹽分為含常量元素的無機(jī)鹽和含微量元素的無機(jī)鹽。本試驗(yàn)中使用的含常量元素的無機(jī)鹽包括硫酸鎂（MgSO4）、磷酸二氫鉀（KH2PO4）、氯化鈉（NaCl）、氯化鉀（KCl）、氯化鈣（CaCl2），含微量元素的無機(jī)鹽為硫酸鋅（ZnSO4）、硫酸錳（Mn－SO4）、硫酸銅（CuSO4）。配制培養(yǎng)基時(shí)，分別在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入質(zhì)量濃度為0、0.5、1.0、1.5、2.0 g·L-1的含常量元素?zé)o機(jī)鹽，質(zhì)量濃度為0、10、30、50、70、90 mg·L-1的含微量元素?zé)o機(jī)鹽，每個(gè)處理重復(fù)5 次。

1.3.2 維生素試驗(yàn)

供試維生素包括VB1、VB2、VB6、VC、煙酸和葉酸，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入質(zhì)量濃度為0、2、4、6、8、10 mg·L-1的維生素，采用孔徑為0.22 μm的細(xì)菌過濾器除菌，每個(gè)處理重復(fù)5 次。

1.3.3 植物生長調(diào)節(jié)劑試驗(yàn)

供試植物生長調(diào)節(jié)劑包括萘乙酸（NAA）、6-芐氨基嘌呤（6-BA）、2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）和赤霉素（GA3），在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別加入質(zhì)量濃度為0、2、4、 6、8、10 mg·L-1的植物生長調(diào)節(jié)劑，采用孔徑為0.22 μm 的細(xì)菌過濾器除菌，每個(gè)處理重復(fù)5 次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用DPS 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以5 次重復(fù)的平均數(shù)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加無機(jī)鹽試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 含常量元素的無機(jī)鹽

含常量元素的無機(jī)鹽對(duì)菌絲生長的影響情況詳見圖1 和表1。

表1 含常量元素的無機(jī)鹽對(duì)菌絲生長的影響Tab.1 Effects of inorganic salts with constant mineral elements on the mycelial growth

圖1 不同質(zhì)量濃度各含常量元素?zé)o機(jī)鹽條件下菌落生長情況Fig.1 The colony growth under the condition of different mass concentration of each inorganic salt containing constant mineral elements

由表1 和圖1 可知，隨著磷酸二氫鉀、硫酸鎂添加量的增加，花臉香蘑菌絲生長速度呈先增后減的趨勢(shì)，表明過高濃度的磷酸二氫鉀、硫酸鎂會(huì)抑制菌絲生長。當(dāng)磷酸二氫鉀質(zhì)量濃度為1.5 g·L-1時(shí)，菌絲生長速度最快，為4.27 mm·d-1；后隨濃度的增加，菌絲生長速度下降，并且菌落出現(xiàn)斑駁。當(dāng)硫酸鎂質(zhì)量濃度為1.5 g·L-1時(shí)，菌絲生長速度最快，為4.88 mm·d-1，菌落紫色，出水；后隨濃度的增加，菌絲生長速度下降，菌落出現(xiàn)斑駁，菌絲變?nèi)?。添加氯化鈉、氯化鉀和氯化鈣后，花臉香蘑菌絲生長變慢，且濃度越大生長速度下降越快。綜上可知，一定濃度的磷酸二氫鉀、硫酸鎂可促進(jìn)花臉香蘑菌絲的生長，氯化鈉、氯化鉀和氯化鈣的添加抑制菌絲生長。

2.1.2 含微量元素的無機(jī)鹽

含微量元素的無機(jī)鹽對(duì)菌絲生長的影響情況詳見表2 和圖2。

表2 含微量元素的無機(jī)鹽對(duì)菌絲生長的影響Tab.2 Effects of inorganic salts with micro mineral elements on the mycelial growth

圖2 不同質(zhì)量濃度各含微量元素?zé)o機(jī)鹽條件下菌落生長情況Fig.2 The colony growth under the condition of different mass concentration of each inorganic salt containing micro mineral elements

由表2 和圖2 可知，當(dāng)質(zhì)量濃度為0～10 mg·L-1時(shí)，硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅的添加對(duì)花臉香蘑的菌絲有極微弱的促進(jìn)作用，表明少量的硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅可刺激菌絲的生長，但促進(jìn)作用不顯著。隨著添加量的增加，在質(zhì)量濃度為10～90 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度逐漸變慢，和對(duì)照相比差異顯著。表明含微量元素的無機(jī)鹽硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅的添加不利于花臉香蘑菌絲的生長。

2.2 維生素試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，供試維生素在一定范圍內(nèi)均可顯著促進(jìn)花臉香蘑菌絲的生長，超過一定質(zhì)量濃度后，花臉香蘑菌絲生長速度逐漸減慢，其影響情況詳見表3 和圖3。

表3 維生素對(duì)菌絲生長的影響Tab.3 Effects of vitamins on the mycelial growth

圖3 不同質(zhì)量濃度各維生素條件下菌落生長情況Fig.3 The colony growth under the different mass concentration of each vitamins conditions

如表3 和圖3世紀(jì)，當(dāng)VB1質(zhì)量濃度為6 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.34 mm·d-1。當(dāng)VB2質(zhì)量濃度為4 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.68 mm·d-1。當(dāng)VB6質(zhì)量濃度為4 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為6.63 mm·d-1。當(dāng)VC 質(zhì)量濃度為6 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.76 mm·d-1。當(dāng)葉酸質(zhì)量濃度為4 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.93 mm·d-1。當(dāng)煙酸質(zhì)量濃度為4 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.87 mm·d-1。當(dāng)VB1質(zhì)量濃度≥10 mg·L-1時(shí)，菌落形狀不規(guī)則，菌絲弱。當(dāng)VB6質(zhì)量濃度為4～8 mg·L-1時(shí)，菌落紫色，菌絲壯。說明一定濃度的VB6可使花臉香蘑菌落明顯呈紫色。當(dāng)葉酸質(zhì)量濃度為0～2 mg·L-1時(shí)，菌絲生長速度相比對(duì)照增快，但菌落形狀不規(guī)則，氣生菌絲變多，菌絲較弱；隨著濃度增大，花臉香蘑菌落形狀規(guī)則，菌絲變壯。

2.3 植物生長調(diào)節(jié)劑試驗(yàn)結(jié)果

不同植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)菌絲生長的影響情況詳見表4 和圖4。

表4 植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)菌絲生長的影響Tab.4 Effects of phytohormones on the mycelial growth

圖4 不同植物生長調(diào)節(jié)劑條件下菌落生長情況Fig.4 The colony growth under the different different mass concentration of each phytohormones

如表4 和圖4世紀(jì)，不同植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)花臉香蘑菌絲生長的影響不同。隨著6-BA、2，4-D、NAA 質(zhì)量濃度的增加，菌絲生長速度逐漸減慢。當(dāng)6-BA 質(zhì)量濃度為2～6 mg·L-1時(shí)，菌落分層，中心部分菌絲較壯，四周菌絲弱，形狀不規(guī)則，與對(duì)照相比差異顯著。當(dāng)質(zhì)量濃度繼續(xù)增大后，菌絲生長速度繼續(xù)變慢，但菌落較為規(guī)則。隨著GA3 添加量的增加，花臉香蘑菌絲生長速度差異不顯著，但菌落形狀不規(guī)則?？芍?，供試植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA、2，4-D、NAA 抑制花臉香蘑菌絲的生長，GA3 的添加對(duì)花臉香蘑菌絲生長影響不顯著。在實(shí)際生產(chǎn)中，花臉香蘑菌絲的培養(yǎng)不需要添加以上植物生長調(diào)節(jié)劑。

3 結(jié)論與討論

在含常量元素的無機(jī)鹽試驗(yàn)中，適量的磷酸二氫鉀、硫酸鎂可促進(jìn)花臉香蘑菌絲的生長，同時(shí)硫酸鎂可使花臉香蘑菌落紫色更為明顯，菌絲吐水，菌落形狀規(guī)則。而氯化鈉、氯化鉀和氯化鈣抑制菌絲的生長；當(dāng)硫酸鎂質(zhì)量濃度為1.5 g·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為4.88 mm·d-1。磷酸二氫鉀和硫酸鎂能提供微生物生長所需要的礦物質(zhì)元素，二者是多種食用菌最佳培養(yǎng)基的常見添加劑。在本研究中，適量的磷酸二氫鉀和硫酸鎂也能促進(jìn)花臉香蘑菌絲的生長，但在張園園[16]等報(bào)道中，硫酸鎂對(duì)白鬼筆（Phallus impudicus）的菌絲有抑制作用。吳秀珍[18]研究發(fā)現(xiàn)，磷酸二氫鉀的添加抑制了斑玉蕈（Hypsizigus marmoreus）菌絲的生長。朱永真[19]的研究認(rèn)為對(duì)于羊肚菌（Morchella esculenta）菌絲的生長而言，硫酸鎂的作用不明顯，而磷酸二氫鉀則有極顯著的抑制作用。本試驗(yàn)中氯化鈉、氯化鉀和氯化鈣抑制花臉香蘑菌絲的生長，與張立秋等[20]的報(bào)道一致。供試的含微量元素的無機(jī)鹽中，硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅均抑制花臉香蘑菌絲的生長。

供試維生素（VB1、VB2、VB6、VC、葉酸和煙酸）在一定范圍內(nèi)均可顯著促進(jìn)花臉香蘑菌絲的生長，其中當(dāng)VB6的質(zhì)量濃度為4 mg·L-1時(shí)，花臉香蘑菌絲生長速度最快，為6.63 mm·d-1。一定濃度的VB6（4～8 mg·L-1）可使花臉香蘑菌落紫色明顯。維生素廣泛參與細(xì)胞內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝[21-22]，但在實(shí)際研究中發(fā)現(xiàn)維生素對(duì)菌絲生長的作用比較復(fù)雜，與食用菌自身基因型及培養(yǎng)所需的外界條件等有關(guān)。朱永真[19]的研究結(jié)果表明對(duì)于羊肚菌菌絲的生長而言，VB1、VB2、VB6、VB12和葉酸的作用不明顯，煙酸有極顯著的抑制作用。在張冰冰等[23]的報(bào)道中，維生素與不同氮源結(jié)合的結(jié)果不同，導(dǎo)致暗褐網(wǎng)柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）對(duì)氮源的利用不同，從而影響其菌絲的生長。

供試生長調(diào)節(jié)劑中，6-BA、2，4-D、NAA 抑制花臉香蘑菌絲的生長，GA3 的添加對(duì)花臉香蘑菌絲生長影響不顯著。有研究表明生長調(diào)節(jié)劑對(duì)不同食用菌菌絲的生長產(chǎn)生不同影響，濃度為2～20 mg·L-1的6-BA、KT、GA3、IBA，以及濃度為5～20 mg·L-1的NAA 對(duì)大球蓋菇（Stropharia rugosoannulata）的菌絲生長均表現(xiàn)出極顯著的促進(jìn)作用[24]。另有研究認(rèn)為6-BA 能促進(jìn)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌母種菌絲的生長，而IAA 卻表現(xiàn)為抑制作用[15]。原因可能是食用菌自身具有產(chǎn)生生長調(diào)節(jié)劑的能力，添加外源生長調(diào)節(jié)劑反而導(dǎo)致過量，從而抑制菌絲的生長[25]。