蔬菜中吡蟲(chóng)啉殘留高效液相色譜檢測(cè)方法改進(jìn)

劉桂伶

1.阜康市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，新疆昌吉 831500

2.阜康市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，新疆昌吉 831500

吡蟲(chóng)啉（imidacloprid，IMI）是我國(guó)（亞）熱帶農(nóng)業(yè)實(shí)踐過(guò)程中使用量最大、最廣的新煙堿類(lèi)農(nóng)藥種類(lèi)之一，廣泛用于蚜蟲(chóng)、葉蟬和薊馬等蟲(chóng)害防治[1]，具有廣譜、高效、低毒、低殘留的特點(diǎn)，其為煙堿乙酰膽堿受體的效應(yīng)體[2-3]，作用于昆蟲(chóng)神經(jīng)，對(duì)防治刺吸式口器害蟲(chóng)有特效[4]。自1991 年投放市場(chǎng)以來(lái)，吡蟲(chóng)啉在世界范圍內(nèi)得到廣泛應(yīng)用。由于吡蟲(chóng)啉的大量使用，對(duì)環(huán)境生物和人類(lèi)的危害也日益明顯[5]。2021 年阜康市吡蟲(chóng)啉商品年使用量0.84 t，在糧食作物、蔬菜及瓜果上均有使用。

2008 年4 月8 日國(guó)家質(zhì)檢總局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)發(fā)布了GB/T 23379-2009《水果、蔬菜及茶葉中吡蟲(chóng)啉殘留的測(cè)定高效液相色譜法》。該標(biāo)準(zhǔn)中的高效液相色譜法是目前基層實(shí)驗(yàn)室常用的吡蟲(chóng)啉檢測(cè)方法，但在采用該標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)過(guò)程中，由于基層實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、人員條件有限，存在樣品處理耗時(shí)長(zhǎng)，回收率不理想等問(wèn)題。本研究針對(duì)前處理及檢測(cè)條件進(jìn)行了改進(jìn)，簡(jiǎn)化樣品前處理步驟，提高了方法的添加回收率，旨在為吡蟲(chóng)啉的快速、有效檢測(cè)提供了重要依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

標(biāo)準(zhǔn)品及試劑：吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg/L，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；乙腈（色譜純，sigma）；乙腈（AR，天津大茂）；Supelclea ENVI-18 固相萃取柱（上海楚定公司）；純凈水（中國(guó)娃哈哈公司）；氯化鈉（AR，天津致遠(yuǎn)）；氫氧化鈉（AR，天津致遠(yuǎn)）。

儀器：LC-15C 高效液相色譜儀（日本島津公司）；氮?dú)獍l(fā)生器（北京譜萊析科技公司）；氮吹儀（上海安譜公司）；固相萃取儀（上海安譜公司）；IKA T8 高速勻漿機(jī)（德國(guó)IKA 公司）；TGL 16M 離心機(jī)（鹽城凱特實(shí)驗(yàn)儀器公司）；MS 3 基本型渦旋震蕩器（德國(guó)IKA 公司）。

1.2 樣品來(lái)源

番茄、黃瓜樣品均為阜康市本地生產(chǎn)。

1.3 試驗(yàn)分析方法

1.3.1 樣品提取及凈化

提?。悍Q(chēng)取10 g 果蔬樣品于50 mL 離心管中，加入乙腈20 mL，氯化鈉5 g，10 000 r/min 高速勻漿提取1 min，將離心管放入離心機(jī)內(nèi)，在5 000 r/min 離心5 min。

濃縮：取5 mL 上層有機(jī)相氮吹至近干，加2 mL 25%乙腈水溶液渦旋將樣品充分溶解，待凈化。

凈化：加樣前依次用5 mL 乙腈活化、5 mL 25%乙腈水溶液平衡ENVI-18 固相萃取柱，然后移取全部樣品濃縮液至固相萃取柱，依次用10 mL 20 mmol/L 的NaOH 溶液、10 mL 水洗柱，棄去，抽干柱，用1 mL 乙腈洗脫并收集洗脫液定容至1 mL，過(guò)0.22 μm 濾膜，待測(cè)。

1.3.2 吡蟲(chóng)啉測(cè)定條件

色譜柱：C18柱（5 μm，150×4.6 mm）；

流動(dòng)相：乙腈/水=25/75；

流速：1 mL/min；柱溫：30℃；

檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；

進(jìn)樣量：20 μL。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將100 mg/L 的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈稀釋配得0.05、0.1、0.5、1、5 mg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述高效液相色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積為橫坐標(biāo)x，質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)使用稀釋溶劑乙腈作為樣品空白溶液。外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性范圍及定量限

將配制好的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，結(jié)果表明在0.05～5 mg/L 范圍內(nèi)，吡蟲(chóng)啉的峰面積與對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=1.08e-005x+5.76e-003，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9999（見(jiàn)圖1），吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖（見(jiàn)圖2）。吡蟲(chóng)啉的方法定量限為0.05 mg/kg（以最低添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為定量限）。

圖1 吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖

2.2 方法的準(zhǔn)確度與精密度

在空白番茄、黃瓜樣品中添加吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，以添加回收率評(píng)價(jià)方法的準(zhǔn)確度，以回收率平行測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）評(píng)價(jià)方法的精密度。分別向空白番茄、黃瓜樣品中添加吡蟲(chóng)啉的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，添加水平為0.05 mg/kg、0.10 mg/kg、0.20 mg/kg，每個(gè)添加水平重復(fù)測(cè)定5次（見(jiàn)表1）。吡蟲(chóng)啉在番茄、黃瓜中的添加回收率76.0%～107.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.7%～11.5%之間，符合農(nóng)藥殘留分析的要求?？瞻讟悠?、添加回收試驗(yàn)樣品譜圖（見(jiàn)圖3～圖6）。

表1 吡蟲(chóng)啉在番茄、黃瓜中添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）

圖4 黃瓜樣品中添加回收（0.1 mg/kg）譜圖

圖5 番茄空白樣譜圖

圖6 番茄樣品中添加回收（0.1mg/kg）譜圖

3 結(jié)論

相對(duì)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)本方法主要進(jìn)行了以下改進(jìn)：1.標(biāo)準(zhǔn)中要求樣品勻漿提取兩次，第一次加乙腈勻漿提取后加入氯化鈉再重復(fù)提取一次，本方法改為在樣品中加入乙腈和氯化鈉勻漿提取一次，通過(guò)改進(jìn)可縮短樣品前處理時(shí)間；2.標(biāo)準(zhǔn)中用于濃縮的上清液為10 mL，本方法將上清液減至5 mL，減少樣品濃縮液的體積不僅可以縮短濃縮時(shí)間同時(shí)對(duì)環(huán)境也比較友好；3.將樣品濃縮的方式由旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)改為氮吹，此項(xiàng)改進(jìn)針對(duì)基層儀器設(shè)備、人員短缺的問(wèn)題可以得到有效的改善，便于大批量樣品的同時(shí)處理；4.將氮吹近干的樣品先用0.5 mL 乙腈溶解后，再加入1.5 mL 水充分溶解后全部過(guò)ENVI-18 固相萃取柱進(jìn)行凈化處理，提高回收率效果明顯；5.檢測(cè)條件由梯度洗脫改為等度洗脫，流動(dòng)相為：乙腈/水=25/75，通過(guò)試驗(yàn)證明在此流動(dòng)相配比條件下，吡蟲(chóng)啉出峰良好，而且可以明顯縮短樣品檢測(cè)時(shí)間。

本試驗(yàn)方法吡蟲(chóng)啉的平均回收率為76.0%～107.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.7%～11.5%之間（n=5），準(zhǔn)確性和精密度均較好，符合測(cè)定要求。