冠心病病人血清lncRNA TUG1和miR-140-3p水平與血清炎性因子、斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)的相關(guān)性

孫 靜,石麗媛,康美麗

冠心病是一種缺血性心臟病,近年來發(fā)病率呈升高趨勢,在臨床實踐中,冠心病主要預(yù)防措施包括改變生活習(xí)慣、藥物干預(yù)、手術(shù)及定期檢測相關(guān)指標(biāo)等[1-2]。長鏈非編碼RNA?；撬嵘险{(diào)基因1(long non-coding RNA taurine up-regulated gene 1,lncRNA TUG1)及微小RNA-140-3p(microRNA-140-3p,miR-140-3p)與冠心病有密切聯(lián)系,且二者之間存在調(diào)控關(guān)系[3-5]。流行病資料表明,全身炎癥增加與心血管事件風(fēng)險增加存在一致的關(guān)系,心血管疾病病人斑塊炎癥嚴(yán)重程度與斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)[6]。本研究探討冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平與炎性因子、斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)的相關(guān)性,以期為冠心病的治療及發(fā)病機(jī)制的探討提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年9月—2021年8月我院收治的140例冠心病病人為研究對象,其中穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris,SAP)病人(SAP組)68例,男32例,女36例,年齡40～76(52.64±10.53)歲;不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris,UAP)病人(UAP組)72例,男38例,女34例,年齡42～74(52.77±10.81)歲。同期選取66名健康體檢者為對照組,男35名,女31名,年齡40～74(51.98±10.84)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：冠心病診斷符合SAP和UAP的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7-8],并經(jīng)冠狀動脈CT血管成像檢查證實;勞累或休息時有明顯的心絞痛等冠心病臨床癥狀;病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤;近期有抗炎、抗凝治療史或既往有冠狀動脈介入等治療史;合并嚴(yán)重肝、腎功能障礙疾病;合并感染、自身免疫系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

1.2.1 血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平檢測 抽取健康體檢者體檢時及冠心病病人確診后24 h內(nèi)靜脈血,靜置30 min,以3 000 r/min離心10 min后收集上層血清,置于-80 ℃冰箱待檢。按照Trizol試劑盒(沈陽萬類生物科技有限公司)說明書對血清總RNA進(jìn)行提取,檢測其濃度和純度,質(zhì)檢合格后按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海研卉生物科技有限公司)說明書對總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄操作(逆轉(zhuǎn)錄為cDNA),之后采用7500型實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)儀器檢測血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平,以GAPDH及U6為內(nèi)參,軟件設(shè)計引物后由北京鼎國生物科技有限公司合成,引物序列見表1。血清lncRNA TUG1、miR-140-3p相對表達(dá)水平采用2-△△CT法計算,各樣本均重復(fù)進(jìn)行3次。qRT-PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,45個循環(huán)。詳見表1。

表1 qRT-PCR引物序列(5′-3′)

1.2.2 血清炎性因子及斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清炎性因子白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、IL-18、C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、可溶性細(xì)胞間黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)及斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)正五聚素-3(pentraxin 3,PTX3)、脂蛋白相關(guān)磷脂酶-A2(lipoprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)、成纖維細(xì)胞生長因子-23(fibroblast growth factor-23,FGF23)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)水平。IL-6、IL-1β、IL-18試劑盒均購自北京索萊寶科技有限公司,CRP、TNF-α、sICAM-1試劑盒均購自武漢益普生物科技有限公司,PTX3試劑盒購自上海富雨生物科技有限公司,Lp-PLA2、FGF23、MMP-9試劑盒均購自上海瓦蘭生物科技有限公司。采用高頻探頭(頻率7～15 MHz)的AU5彩色多普勒超聲診斷儀(德國百勝公司)測量健康體檢者及冠心病病人頸總動脈、頸外動脈、頸內(nèi)動脈及分叉處的內(nèi)膜-中層厚度(intima-media thickness,IMT)。

2 結(jié) 果

2.1 3組血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平比較 UAP組血清lncRNA TUG1水平高于SAP組和對照組,miR-140-3p水平低于SAP組和對照組(P<0.05);SAP組血清lncRNA TUG1水平高于對照組,miR-140-3p水平低于對照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平比較(±s)

2.2 3組血清炎性因子水平比較 UAP組血清炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1水平均高于SAP組和對照組(P<0.05);SAP組血清炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1水平均高于對照組(P<0.05)。詳見表3。

表3 3組血清炎性因子水平比較(±s)

2.3 3組斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)比較 UAP組斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9均高于SAP組和對照組(P<0.05);SAP組斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9均高于對照組(P<0.05)。詳見表4。

表4 3組斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)比較(±s)

2.4 冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平與炎性因子、斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson法分析結(jié)果顯示,SAP、UAP病人血清lncRNA TUG1與miR-140-3p水平均呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.522,-0.586,P<0.001),且炎性因子IL-6、CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、sICAM-1及斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)IMT、PTX3、Lp-PLA2、FGF23、MMP-9與lncRNA TUG1均呈正相關(guān)(P<0.001),與miR-140-3p均呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)。詳見圖1、圖2和表5、表6。

圖1 SAP病人血清lncRNA TUG1與miR-140-3p水平的相關(guān)性分析散點圖

圖2 UAP病人血清lncRNA TUG1與miR-140-3p水平的相關(guān)性散點圖

表5 SAP病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平與炎性因子、斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

冠心病是常見的心臟疾病,根據(jù)心肌缺血程度不同分為SAP、UAP及急性心肌梗死,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,血小板聚集、血管炎癥反應(yīng)及血管內(nèi)皮損傷等均參與冠心病動脈粥樣硬化[9]。冠心病特點是脂質(zhì)和免疫細(xì)胞在冠狀動脈內(nèi)皮下空間或動脈管壁中積聚,這一過程涉及血管內(nèi)皮的炎癥反應(yīng)[10]。盡管冠心病的治療已取得了巨大的進(jìn)步,但在世界范圍內(nèi),冠心病是導(dǎo)致死亡的主要原因,說明目前冠心病診斷、治療等方法仍存在不足[11]。lncRNA TUG1是一種在損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)的RNA,通過調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡等過程參與血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,進(jìn)而在心血管疾病中發(fā)揮著重要作用[12]。本研究對冠心病病人血清lncRNA TUG1水平的檢測結(jié)果與既往研究結(jié)果[13]一致,SAP、UAP病人血清lncRNA TUG1水平均升高,且UAP病人高于SAP病人。提示lncRNA TUG1高表達(dá)參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。既往研究顯示,炎癥反應(yīng)在冠心病的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用,炎性因子水平可預(yù)測冠心病發(fā)展,炎癥是冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂的重要病理機(jī)制[14-15]。

IMT、PTX3、Lp-PLA2是反映冠狀動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的重要指標(biāo),其水平升高提示斑塊穩(wěn)定性降低[16]。本研究中l(wèi)ncRNA TUG1與IL-6、CRP、IMT、PTX3等炎性因子及斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)均呈正相關(guān)。因此推測lncRNA TUG1可能通過增強(qiáng)炎癥反應(yīng)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而增加動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性,參與冠心病發(fā)生發(fā)展。

Zhu等[17]研究顯示,miR-140-3p在外周動脈疾病中顯著下調(diào),且可能參與支架內(nèi)再狹窄。馮六六等[18]研究表明,miR-140-3p是冠心病病人經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的影響因素。上述研究說明miR-140-3p可能參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。本研究相關(guān)性結(jié)果顯示,miR-140-3p水平降低可能導(dǎo)致炎性因子水平升高,炎癥反應(yīng)加劇,進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮功能,發(fā)生惡性循環(huán),造成動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性增加,加重病情,發(fā)生心血管不良事件。本研究結(jié)果顯示,lncRNA TUG1與miR-140-3p呈負(fù)相關(guān)。推測lncRNA TUG1可能通過負(fù)向調(diào)節(jié)miR-140-3p表達(dá)進(jìn)而參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述,冠心病病人血清lncRNA TUG1水平異常升高,miR-140-3p水平異常降低,二者水平均與炎性因子及斑塊穩(wěn)定性指標(biāo)相關(guān)。lncRNA TUG1、miR-140-3p在冠心病早期診斷及病情評估中可能有重要價值,今后可在臨床實踐中進(jìn)一步驗證。