• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物檢測預(yù)警模型在肺癌骨轉(zhuǎn)移診斷中的臨床價值

    2023-05-24 02:42:28馬海洋吳瓊張勇
    中國骨與關(guān)節(jié)雜志 2023年5期
    關(guān)鍵詞:膠原標(biāo)志物肺癌

    馬海洋 吳瓊 張勇

    隨著社會經(jīng)濟的不斷發(fā)展,國民的生活水平得到一定程度的提升,但隨即產(chǎn)生的環(huán)境污染問題更加嚴重,在一定程度上造成了空氣污染以及空氣質(zhì)量下降的問題,大大提升了我國呼吸道疾病以及肺部疾病的發(fā)生比例,間接增加了患者發(fā)生肺癌等惡性疾病的發(fā)生以及死亡風(fēng)險[1]。臨床中肺癌是發(fā)生率較高的惡性腫瘤,支氣管黏膜上皮發(fā)生嚴重病變是引發(fā)肺癌的主要原因,因此常稱為支氣管肺癌[2]。臨床中肺癌發(fā)生后,病情進展較快,臨床癥狀較為嚴重,包括對患者的生命安全以及健康造成嚴重威脅,使肺癌成為臨床惡性腫瘤中致死率最高的惡性腫瘤疾病。已有相關(guān)數(shù)據(jù)證實,惡性腫瘤患者中發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的比例在 20%~60% 左右,其中老年肺癌患者是骨轉(zhuǎn)移的高危人群,因此在患有肺癌后及時進行骨轉(zhuǎn)移診斷并采取針對性的有效治療措施是降低患者骨轉(zhuǎn)移發(fā)生風(fēng)險以及改善患者預(yù)后的關(guān)鍵[3]。骨轉(zhuǎn)移主要指的是患者的骨結(jié)構(gòu)發(fā)生異常導(dǎo)致骨損傷以及骨性破壞等,人類骨質(zhì)主要由 Ⅰ 型膠原構(gòu)成,Ⅰ 型膠原主要由成骨細胞合成,并且合成以及分解的代謝產(chǎn)物會進入血液循環(huán),通過臨床多種試劑檢測后可以有效反映機體的骨代謝水平,同時對骨基質(zhì)礦化具有重要作用。目前雖有相關(guān)研究是以肺癌患者骨轉(zhuǎn)移的血清標(biāo)志物以及骨代謝指標(biāo)診斷價值為中心進行深入分析,但因為研究樣本量相對較少以及單一血清標(biāo)志物的診斷敏感度、特異度較差等導(dǎo)致獲得的研究數(shù)據(jù)參考價值較低,使相關(guān)研究結(jié)論仍存在一定爭議[4]。本次通過臨床基線特征聯(lián)合骨特異性堿性磷酸酶 (bALP)、癌胚抗原(CEA)、Ⅰ 型原膠原氨基端 (N 端) 延長肽 (PINP)、Ⅰ 型膠原交聯(lián)羧基端 (C 端) 肽 (CTx)、糖鏈抗原125 (CA125) 等血清標(biāo)志物和骨代謝指標(biāo)構(gòu)建預(yù)測模型并應(yīng)用于患者骨轉(zhuǎn)移診斷中,為后續(xù)提升臨床肺癌骨轉(zhuǎn)移診斷以及及時預(yù)測預(yù)防奠定研究基礎(chǔ)。

    資料與方法

    一、納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

    1.納入標(biāo)準(zhǔn):(1) 2018 年 6 月至 2020 年 5 月,我院經(jīng)治的肺癌骨轉(zhuǎn)移患者;(2) 結(jié)合病理學(xué)檢查結(jié)果以及臨床影像結(jié)果確診,病理類型均為非小細胞肺癌者;(3) 篩選的患者資料具有較高完整度,年齡 ≤ 70 歲者;(4) ECOG 評分 ≤ 2 分,肝、腎等重要器官的功能運行無異常者;(5) 骨轉(zhuǎn)移診斷時檢測血清標(biāo)志物、骨代謝指標(biāo)水平者;(6) 診斷前未接受任何可能影響研究結(jié)果的干預(yù)治療者。

    2.排除標(biāo)準(zhǔn):(1) 無外傷骨折者;(2) 有高鈣血癥者;(3) 有甲狀腺功能亢進或減低病史者;(4) 有其它惡性腫瘤病史者。

    二、一般資料

    本研究共納入 206 例。男 112 例、女 94 例;年齡 32~70 歲,平均 (57.99±3.52) 歲。腺癌 139例、鱗癌 67 例。176 例的 ECOG 評分為 0~1 分,30 例 ECOG 評分為 2 分。肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)[5]:Ⅰ 期屬于早期,是腫瘤位于肺組織中尚未發(fā)生轉(zhuǎn)移。Ⅱ期屬于中期,指癌細胞已轉(zhuǎn)移到了肺門附近的淋巴結(jié)。Ⅲ 期屬于局部晚期,指癌細胞已經(jīng)進一步轉(zhuǎn)移到縱隔或肺外淋巴結(jié),還包括少部分病灶非常大或侵犯腫瘤器官不利于手術(shù)的情況。Ⅳ 期屬于晚期,指腫瘤出現(xiàn)胸膜轉(zhuǎn)移,胸腔積液或者全身多處臟器的轉(zhuǎn)移 (表1)。

    表1 研究對象基線資料Tab.1 Baseline data of subjects

    三、方法

    1.肺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)準(zhǔn):以骨顯像以及臨床癥狀為金標(biāo)準(zhǔn)[6],診斷內(nèi)容如下:(1) 排除良性病變與其它外傷因素影響,骨顯像結(jié)果中超過 3 處的放射性核素出現(xiàn)大量聚集;(2) 骨顯像結(jié)果中 ≤ 2 處的放射性核素出現(xiàn)大量聚集并存在骨痛、病理性骨折等骨轉(zhuǎn)移臨床癥狀確診發(fā)生轉(zhuǎn)移;(3) 放射性核素檢查陰性,但存在骨痛、病理性骨折等骨轉(zhuǎn)移臨床癥狀則為發(fā)生骨轉(zhuǎn)移;(4) 骨顯像結(jié)果中出現(xiàn)大量聚集放射性核素且存在骨痛、病理性骨折等骨轉(zhuǎn)移癥狀。存在以上 4 條中任何一條均可確診。

    2.標(biāo)本采集與檢測:晨起時間段內(nèi)采集 3 ml 研究對象的空腹靜脈血,按照轉(zhuǎn)速 2000 r / min 設(shè)定參數(shù)離心 8 min,取上清液并保存在 -20 ℃ 環(huán)境中。由專業(yè)人員嚴格按照操作流程對樣本進行批量檢驗,檢測方法為電化學(xué)發(fā)光免疫分析法 (ECLIA)。

    3.外周血循環(huán)腫瘤細胞 (CTC) 數(shù)量測定方法:外周血 CTC 數(shù)量檢測采用 Cyttel-CTC-imFish 技術(shù)完成,收集患者 3.2 ml 晨起空腹前臂靜脈血,為防止血液被上皮細胞污染,取中段血 3.2 ml,按照3000 r / min 轉(zhuǎn)速以及 20 cm 離心半徑進行離心,去除上層清液并加入細胞裂解液,免疫磁珠包被特異性抗體后吸附白細胞并分離富集腫瘤細胞。用 CD45以及 8 號探針作為細胞熒光原位雜交反應(yīng)檢測的工具,鏡檢計數(shù),出現(xiàn) 3 倍體及以上信號同時 CD45陰性為腫瘤細胞。

    四、統(tǒng)計學(xué)處理

    對研究出現(xiàn)的數(shù)據(jù)進行有效處理的軟件是運用SPSS 22.0,計量資料進行正態(tài)性檢驗,計量資料中正態(tài)分布以x-±s形式表現(xiàn),采用t檢驗,使用 (%)表示計數(shù)資料并進行χ2檢驗,多因素 Logistic 回歸法分析肺癌骨轉(zhuǎn)移的影響因素,P< 0.05,數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義,制訂肺癌骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測模型并進行驗證。

    結(jié) 果

    一、骨顯像結(jié)果

    肺癌患者共計 206 例,99mTe-MDP 診斷結(jié)果中骨轉(zhuǎn)移確診例數(shù)共計 67 例,骨轉(zhuǎn)移病灶中 1 個熱區(qū)、2 個熱區(qū)、熱區(qū) ≥ 3 個的例數(shù)分別為 10 例、23 例、34 例,共計 171 個;1.94% 的肺癌患者為 1 個熱區(qū)可疑骨轉(zhuǎn)移,共計 4 例;65.53% 的骨顯像未存在異常濃聚,共計 135 例。后經(jīng)確診,43 例骨顯像陽性患者確診發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,假陽性例數(shù)為 24 例;可疑病例中骨轉(zhuǎn)移的例數(shù)為 1 例;9.63% 骨掃描陰性患者為假陰性,共計 13 例。27.67% 為骨轉(zhuǎn)移確診比例,共計 57 例;骨顯像診斷的特異性為 81.88%、敏感度為 75.44%、漏診率為 22.81%、假陽性率為35.82%。骨轉(zhuǎn)移組與無骨轉(zhuǎn)移組的骨顯像陽性檢出率存在統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2= 66.497,P< 0.001)。42.11%患者的骨轉(zhuǎn)移灶累及肋骨或胸骨,共計 24 例;脊柱 19 例 (33.33%),骨盆 15 例 (26.32%),長骨 9 例(15.79%),顱骨 5 例 (8.77%)。

    二、單因素分析骨轉(zhuǎn)移組與無骨轉(zhuǎn)移組血清標(biāo)志物水平比較

    骨轉(zhuǎn)移組的血清標(biāo)志物 CTC、CEA、CA125、PINP、bALP、CTx 水平均高于無骨轉(zhuǎn)移組 (P<0.001) (表2)。

    表2 比較兩組患者血清骨轉(zhuǎn)移標(biāo)志物變化差異 ( x-±s )Tab.2 Comparison of changes in serum bone metastasis markers between the two groups (x- ± s)

    三、單因素分析骨轉(zhuǎn)移組與無骨轉(zhuǎn)移組肺癌的臨床病理特征

    Ⅰ 期、Ⅱ 期、Ⅲ 期、Ⅳ 期的占比分別為10.19%、7.28%、36.89%、45.64%,例數(shù)分別為21 例、15 例、76 例、94 例。骨轉(zhuǎn)移組的臨床分期、腺癌病理類型占比明顯高于無骨轉(zhuǎn)移組,兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P< 0.05) (表3)。

    表3 單因素分析骨轉(zhuǎn)移組與無骨轉(zhuǎn)移組肺癌的臨床病理特征Tab.3 Univariate analysis of clinicopathological characteristics of lung cancer in the bone metastasis group and the non bone-metastasis group

    四、多因素分析肺癌骨轉(zhuǎn)移的影響因素及建立預(yù)測模型

    將P< 0.05 的 CEA、骨顯像、臨床病理分期、CA125、PINP、bALP 作為肺癌骨轉(zhuǎn)移變量為自變量,肺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移為因變量,數(shù)據(jù)提示病理類型、病理分期、CEA、CA125、CTC、PINP、bALP為肺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的危險因素 (表4,5)。

    表4 變量賦值表Tab.4 Variable assignment table

    表5 多因素分析肺癌患者骨轉(zhuǎn)移的影響因素Tab.5 Multivariate analysis of the influencing factors of bone metastasis in lung cancer patients

    以上回歸分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠,回歸方程的擬合度R2= 0.271,擬合度顯著 (F= 4.012,P< 0.05),說明本回歸模型存在有顯著意義,即自變量中至少有一個可以顯著影響?;貧w方程的殘差情況如圖1。

    圖1 多元線性回歸方程標(biāo)準(zhǔn)化殘差直方圖Fig.1 Histogram of normalized residuals of multiple linear regression equations

    五、臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物肺癌骨轉(zhuǎn)移預(yù)測模型在肺癌骨轉(zhuǎn)移診斷中的價值驗證

    根據(jù)以上的危險因素結(jié)果繪制列線圖構(gòu)建肺癌患者骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測模型,模型為 0.469 + CEA×0.481 +病理類型×0.544 + 臨床病理分×0.088 + CA125×0.318 + PINP×0.363 + bALP×0.439 + CTx×0.467 +CTC×0.476。將驗證組的肺癌數(shù)據(jù)代入列線圖中計算概率值。以 50% 為預(yù)測概率驗證的分界值,≥ 50%是骨轉(zhuǎn)移高危患者,< 50% 是骨轉(zhuǎn)移低危患者。臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物肺癌骨轉(zhuǎn)移預(yù)測模型診斷肺癌骨轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確率為 92.23,AUC 為 0.916,敏感度與特異度均在 90% 左右 (表6、7,圖2、3)。

    圖2 肺癌患者骨轉(zhuǎn)移預(yù)測模型列線圖Fig.2 Prediction model of bone metastasis in patients with lung cancer

    圖3 預(yù)測模型在肺癌患者骨轉(zhuǎn)移中的診斷效能 ROC 曲線Fig.3 ROC curve of the predictive model for the diagnosis of bone metastasis in lung cancer patients

    表6 肺癌患者骨轉(zhuǎn)移預(yù)測模型檢出結(jié)果Tab.6 Detection results of bone metastasis prediction model in lung cancer patients

    表7 預(yù)測模型在肺癌患者骨轉(zhuǎn)移中的診斷效能Tab.7 Diagnostic efficacy of prediction model in bone metastasis of lung cancer patients

    討 論

    肺癌骨轉(zhuǎn)移是肺癌患者在中后期常出現(xiàn)的一類疾病,病情嚴重者如不能及時發(fā)現(xiàn)并治療,極易對患者生命造成影響,嚴重威脅人類健康。對于此,加強監(jiān)測與早期治療至關(guān)重要[7]。隨著臨床檢測醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用放射性免疫技術(shù)以及肺癌血清標(biāo)志物研究深度的不斷增加,血清標(biāo)志物在肺癌診斷中的應(yīng)用效能得到進一步挖掘的同時提升了腫瘤診斷結(jié)果準(zhǔn)確率,而臨床相關(guān)檢測技術(shù)在腫瘤臨床療效以及預(yù)后診斷中的應(yīng)用價值也為惡性腫瘤研究發(fā)展提供數(shù)據(jù)支持。

    骨形成、骨吸收標(biāo)志物較多,主要有未羧化骨鈣素 (ucOC)、抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)、CTx[8]。通過生物化學(xué)方法檢測血清或尿液的骨代謝指標(biāo)水平能有效反映骨代謝以及骨轉(zhuǎn)換狀態(tài),對腫瘤的療效評估具有一定的指導(dǎo)意義。已有研究實驗結(jié)果表示骨代謝水平在一定程度上會影響骨轉(zhuǎn)移以及預(yù)后結(jié)局,但乳腺癌、前列腺癌是骨轉(zhuǎn)移相關(guān)研究的集中點,關(guān)于肺癌骨轉(zhuǎn)移的研究案例鮮少且研究結(jié)論尚未統(tǒng)一[9]。

    成浩等[10]針對 143 例 Ⅰ~Ⅳ 期肺癌患者進行了深入研究,根據(jù)單因素以及多因素分析結(jié)果指出患者 PINP 或 PICP 升高發(fā)生預(yù)后不良的比例更高,但 PINP 和 PICP 并不是影響預(yù)后的獨立因素,在一定程度上可以說明 PINP、PICP 與肺癌患者骨轉(zhuǎn)移預(yù)后結(jié)局存在關(guān)聯(lián)。本研究中骨轉(zhuǎn)移組患者的 PINP明顯更高,PINP 是肺癌患者骨轉(zhuǎn)移的獨立影響因素并被納入預(yù)測模型中,與以上研究結(jié)果相符,提示PINP 在肺癌骨轉(zhuǎn)移中具有較高診斷價值,分析其原因可能是在 Ⅰ 型前膠原、Ⅰ 型膠原的衍化過程中切斷氨基末端結(jié)構(gòu),因此血清 Ⅰ 型前膠原水平可作為反映 Ⅰ 型膠原合成狀態(tài)以及骨形成的良好指標(biāo),提示 Ⅰ 型膠原合成速度隨著 Ⅰ 型前膠原升高而增快,骨轉(zhuǎn)換活躍,因此在骨轉(zhuǎn)移時 PINP 會對應(yīng)發(fā)生變化[11]。成骨細胞分泌產(chǎn)生的 bALP 是一種 ALP同工酶,在成骨細胞活性中具有較高的敏感性。Vimalraj 等[12]指出肺癌患者的 bALP 高水平表達是促進疾病進展對危險因素 (RR:1.77;95%CI:1.19~2.64;P= 0.005),死亡危險是正常者的 1.5倍 (RR:1.53;95%CI:1.15~2.03;P= 0.003),證實預(yù)后不良因素中不包括 bALP,本研究中相比于骨轉(zhuǎn)移組,無骨轉(zhuǎn)移組的 bALP 水平更低,并且作為獨立影響因素被納入肺癌骨轉(zhuǎn)移預(yù)測模型中,提示 bALP 是可以反映肺癌骨轉(zhuǎn)移發(fā)生情況的敏感指標(biāo)。其主要原因是在惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移的細胞生理進程中血清 bALP 均有參與,因此在肺癌患者的骨轉(zhuǎn)移發(fā)生中 bALP 會出現(xiàn)較明顯的變化。本研究中 CTx在骨轉(zhuǎn)移組水平更高并且是影響因素之一,其主要是因為 CTx、NTx 等標(biāo)志物主要由 Ⅰ 型膠原降解產(chǎn)生,二者均具有較高的特異性,CTx 相比于 NTx,CTx 診斷骨吸收的特異性差,但在骨吸收診斷中具有較高的敏感性,因此在肺癌患者的骨轉(zhuǎn)移時具有較高的診斷價值[13]。

    肺癌預(yù)后臨床研究中腫瘤標(biāo)志物是重點方向。多項研究數(shù)據(jù)顯示腫瘤標(biāo)志物會影響肺癌患者的預(yù)后,但研究對象具有一定局限性,多為早期肺癌,針對晚期肺癌患者的研究案例鮮少,腫瘤標(biāo)志物對肺癌骨轉(zhuǎn)移患者預(yù)后的評估價值尚未明確。腫瘤標(biāo)志物之一的 CEA 在診斷肺癌中的靈敏度、特異度一般,與早期肺癌患者的預(yù)后結(jié)局存在密切關(guān)聯(lián),但有研究不認同該觀點[14]。本研究結(jié)果顯示 CEA 是診斷肺癌骨轉(zhuǎn)移的敏感指標(biāo),分析其原因是 CEA 為臨床常用的腫瘤敏感標(biāo)志物,主要形成于細胞漿,經(jīng)細胞膜傳遞分泌于細胞外以及周圍體液中,在血清、胃液等體液中均可檢出,隨著患者病情的加重,患者的 CEA 水平會相應(yīng)增加[15]。早期 CA125在臨床診斷卵巢癌、預(yù)后判斷以及疾病復(fù)發(fā)預(yù)測中較為常用并且具有較高的敏感性和陽性率。已有研究發(fā)現(xiàn) CA125 在肺癌患者血清中呈高水平表達。近幾年 CA125 已成為肺癌的臨床標(biāo)志物研究重點,但多數(shù)研究是以 CA125 預(yù)測早期肺癌患者預(yù)后為切入點,關(guān)于晚期肺癌預(yù)后的研究案例較少。

    目前,已文獻報道 CTC 在 PCa 患者中表達水平明顯高于正常人群,提示其可能對 PCa 診斷具有一定的應(yīng)用價值[16]。本研究結(jié)果顯示,CTC 是肺癌骨轉(zhuǎn)移的危險因素,并在呈高水平表達,與以上研究結(jié)果相符,提示 CTC 檢測能有效反映原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移,從而起到輔助判斷病情進展的作用,主要是因為 CTC 是從機體腫瘤原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶中脫落進入循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細胞,大部分 CTC 在短時間內(nèi)可經(jīng)機體免疫系統(tǒng)清除或因自身循環(huán)周期而死亡,但依然存在少部分細胞聚集生長形成癌栓,并在患者組織中進展為轉(zhuǎn)移灶,從而參與了惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移[17]。因 CTC 細胞在不同人群中的水平存在一定差異,所以在后續(xù)的不同人群的肺癌骨轉(zhuǎn)移臨床診斷中應(yīng)通過優(yōu)化 CTC 檢測技術(shù)以及納入 CTC 變量校正因素等方式提升一致性。

    許玉炫等[18]研究指出肺癌患者若是 N 期就更容易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。已有研究表示相比于腺鱗癌、小細胞癌,肺腺癌是骨轉(zhuǎn)移風(fēng)險最高的肺癌病理類型,與本研究的結(jié)果是一致的,原因分析如下:腺癌多發(fā)于黏液腺,多數(shù)為血液轉(zhuǎn)移,可通過向血管外生長對患者的肋骨、脊椎部位進行直接侵犯,同時經(jīng)脊柱、肺部的靜脈循環(huán)向全身的骨骼轉(zhuǎn)移,而臨床分期越高,表示患者的病情越嚴重,因此發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的風(fēng)險越高[19]。

    本研究的不足:(1) 通過邏輯回歸分析結(jié)果構(gòu)建研究模型的相關(guān)文獻較少;(2) 納入的研究樣本量相對較少;這可能會影響模型的應(yīng)用準(zhǔn)確性。所以后續(xù)研究中應(yīng)擴大樣本量并探尋其它的模型構(gòu)建優(yōu)化方案,以待進一步深入分析臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物檢測預(yù)警模型能提升肺癌骨轉(zhuǎn)移的實際診斷價值。

    綜上所述,診斷腫瘤骨轉(zhuǎn)移中,臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物檢測預(yù)警模型對于診斷肺癌骨轉(zhuǎn)移擁有較高的診斷功能,可視為肺癌骨轉(zhuǎn)移的一種篩查方法,擁有較高的臨床實用價值。采取臨床特征聯(lián)合血清標(biāo)志物檢測預(yù)警模型能提升肺癌骨轉(zhuǎn)移的實際檢出率,在臨床中具有非常強的實用性。

    猜你喜歡
    膠原標(biāo)志物肺癌
    中醫(yī)防治肺癌術(shù)后并發(fā)癥
    對比增強磁敏感加權(quán)成像對肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤檢出的研究
    膿毒癥早期診斷標(biāo)志物的回顧及研究進展
    膠原無紡布在止血方面的應(yīng)用
    冠狀動脈疾病的生物學(xué)標(biāo)志物
    microRNA-205在人非小細胞肺癌中的表達及臨床意義
    紅藍光聯(lián)合膠原貼治療面部尋常痤瘡療效觀察
    基于肺癌CT的決策樹模型在肺癌診斷中的應(yīng)用
    腫瘤標(biāo)志物在消化系統(tǒng)腫瘤早期診斷中的應(yīng)用
    MR-proANP:一種新型心力衰竭診斷標(biāo)志物
    99香蕉大伊视频| 99久久精品国产亚洲精品| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 99国产精品99久久久久| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲成人免费av在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩人妻精品一区2区三区| 成人国语在线视频| 午夜日韩欧美国产| 精品人妻1区二区| 1024香蕉在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 一级毛片 在线播放| 国产1区2区3区精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品人妻久久久影院| 黄色毛片三级朝国网站| 妹子高潮喷水视频| 国产在线视频一区二区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日日爽夜夜爽网站| 成年av动漫网址| 午夜福利,免费看| 色精品久久人妻99蜜桃| e午夜精品久久久久久久| 亚洲,一卡二卡三卡| 麻豆乱淫一区二区| 赤兔流量卡办理| 亚洲一码二码三码区别大吗| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 97人妻天天添夜夜摸| 午夜免费成人在线视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲精品av麻豆狂野| 性色av一级| 亚洲视频免费观看视频| 国产黄频视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 一级a爱视频在线免费观看| 91成人精品电影| 日韩欧美一区视频在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 日本wwww免费看| 国产1区2区3区精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 90打野战视频偷拍视频| 一级毛片 在线播放| netflix在线观看网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲av电影在线进入| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 18禁观看日本| 亚洲九九香蕉| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 不卡av一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 99国产综合亚洲精品| 国产一区二区在线观看av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 色94色欧美一区二区| 日韩伦理黄色片| 日日夜夜操网爽| 免费在线观看影片大全网站 | 男女国产视频网站| 999精品在线视频| 人妻一区二区av| 婷婷色麻豆天堂久久| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 搡老岳熟女国产| 免费观看av网站的网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美变态另类bdsm刘玥| 嫁个100分男人电影在线观看 | 亚洲中文av在线| 1024视频免费在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产一级毛片在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 青草久久国产| 麻豆av在线久日| 一级片免费观看大全| 欧美日韩综合久久久久久| 久久99一区二区三区| 电影成人av| 日韩中文字幕视频在线看片| 超碰成人久久| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲国产av新网站| www日本在线高清视频| 九色亚洲精品在线播放| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩精品网址| 一级黄片播放器| 中文字幕高清在线视频| 人妻人人澡人人爽人人| 精品第一国产精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产视频一区二区在线看| 韩国精品一区二区三区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 捣出白浆h1v1| 成年美女黄网站色视频大全免费| 中文欧美无线码| 一本色道久久久久久精品综合| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一级毛片我不卡| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 美女主播在线视频| 久久精品国产综合久久久| 日本91视频免费播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 男女国产视频网站| 久久人人爽人人片av| 男女午夜视频在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 午夜福利一区二区在线看| 国产黄色免费在线视频| 黄色a级毛片大全视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜福利乱码中文字幕| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 两个人看的免费小视频| 丝瓜视频免费看黄片| 色网站视频免费| 欧美黄色淫秽网站| 一二三四在线观看免费中文在| 18禁国产床啪视频网站| 桃花免费在线播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 在线精品无人区一区二区三| 69精品国产乱码久久久| av不卡在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 麻豆av在线久日| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 精品福利观看| 国产在线免费精品| 一本色道久久久久久精品综合| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人午夜精彩视频在线观看| 香蕉国产在线看| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产黄频视频在线观看| 精品久久久精品久久久| 赤兔流量卡办理| 国产黄频视频在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 免费在线观看完整版高清| 99热国产这里只有精品6| 99九九在线精品视频| 国产免费又黄又爽又色| 久久性视频一级片| 老司机亚洲免费影院| 免费看不卡的av| 久久性视频一级片| 国产精品久久久久成人av| 一区福利在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 精品少妇内射三级| 久久久精品免费免费高清| 久9热在线精品视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 日韩大片免费观看网站| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲成色77777| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 水蜜桃什么品种好| 欧美日韩综合久久久久久| 多毛熟女@视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久人妻熟女aⅴ| 搡老乐熟女国产| 久久久久久久国产电影| 日韩一本色道免费dvd| 一级毛片女人18水好多 | 国产精品一二三区在线看| 十八禁网站网址无遮挡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产亚洲精品久久久久5区| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久免费观看电影| 午夜91福利影院| 精品人妻在线不人妻| 波多野结衣一区麻豆| 日日爽夜夜爽网站| 蜜桃在线观看..| 极品人妻少妇av视频| 国产片特级美女逼逼视频| 日本五十路高清| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产在视频线精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 丝袜在线中文字幕| 1024香蕉在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 十八禁高潮呻吟视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 看免费成人av毛片| 中国国产av一级| 好男人电影高清在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 日韩人妻精品一区2区三区| 男男h啪啪无遮挡| 久久久精品免费免费高清| 一区二区av电影网| 一二三四在线观看免费中文在| 国产成人精品在线电影| 久久综合国产亚洲精品| 人妻 亚洲 视频| 国产国语露脸激情在线看| 少妇 在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 多毛熟女@视频| 午夜免费成人在线视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美精品亚洲一区二区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久久久久精品精品| 国产主播在线观看一区二区 | 国产淫语在线视频| 99久久精品国产亚洲精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人精品久久久久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久热这里只有精品99| 国产成人av教育| 又紧又爽又黄一区二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 脱女人内裤的视频| 亚洲第一青青草原| 免费av中文字幕在线| 日本五十路高清| 欧美精品一区二区免费开放| 99热全是精品| 欧美精品一区二区大全| 一本久久精品| 视频区欧美日本亚洲| 中国国产av一级| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲精品在线美女| 美女大奶头黄色视频| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 日本黄色日本黄色录像| 欧美国产精品一级二级三级| 日本欧美视频一区| 免费看十八禁软件| 亚洲国产av影院在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 两性夫妻黄色片| 多毛熟女@视频| 一级黄片播放器| 亚洲av美国av| 欧美日韩福利视频一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美在线黄色| 久久精品亚洲av国产电影网| 91老司机精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产在线视频一区二区| 午夜老司机福利片| 9热在线视频观看99| 99国产精品免费福利视频| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产精品av久久久久免费| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产亚洲精品第一综合不卡| 性色av乱码一区二区三区2| 精品久久蜜臀av无| 成年人午夜在线观看视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品福利永久在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 美国免费a级毛片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲国产精品999| 亚洲天堂av无毛| 黑人欧美特级aaaaaa片| 蜜桃国产av成人99| 看十八女毛片水多多多| 日韩制服骚丝袜av| 无限看片的www在线观看| 亚洲图色成人| 亚洲成色77777| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美清纯卡通| 男人添女人高潮全过程视频| 伊人亚洲综合成人网| 精品第一国产精品| 美女视频免费永久观看网站| 宅男免费午夜| 51午夜福利影视在线观看| 一区在线观看完整版| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲国产成人一精品久久久| 老司机影院毛片| 国产97色在线日韩免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| av天堂在线播放| 男女之事视频高清在线观看 | 国产成人av激情在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 男女免费视频国产| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品一区av在线观看| 69av精品久久久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品人妻1区二区| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产1区2区3区精品| 亚洲国产看品久久| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲午夜理论影院| 国产成人精品无人区| 久久久久精品国产欧美久久久| 身体一侧抽搐| 久久久久久国产a免费观看| xxxwww97欧美| av免费在线观看网站| 欧美激情高清一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 久久中文字幕一级| 成人永久免费在线观看视频| а√天堂www在线а√下载| 成人永久免费在线观看视频| 日本a在线网址| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产高清有码在线观看视频 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 日韩视频一区二区在线观看| 精品久久久久久成人av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 1024香蕉在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美日韩精品网址| 在线天堂中文资源库| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲电影在线观看av| 国产亚洲精品久久久久5区| 91老司机精品| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲成av人片免费观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产av不卡久久| 成人三级做爰电影| 久久婷婷成人综合色麻豆| 狠狠狠狠99中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 在线永久观看黄色视频| 性欧美人与动物交配| 一区二区三区激情视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产成人精品无人区| 亚洲色图av天堂| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精华一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲成人久久爱视频| 嫩草影视91久久| x7x7x7水蜜桃| 一级a爱片免费观看的视频| 成人三级做爰电影| 国产欧美日韩一区二区三| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲精品色激情综合| 国产在线精品亚洲第一网站| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美最黄视频在线播放免费| 日韩欧美三级三区| 成人手机av| 日本 欧美在线| xxx96com| 村上凉子中文字幕在线| 日本a在线网址| 亚洲在线自拍视频| 日韩精品青青久久久久久| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久草成人影院| 男女下面进入的视频免费午夜 | 欧美日韩瑟瑟在线播放| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 91九色精品人成在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 免费搜索国产男女视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 两性夫妻黄色片| 亚洲av五月六月丁香网| 国产午夜精品久久久久久| 欧美中文日本在线观看视频| 少妇粗大呻吟视频| 久久久精品欧美日韩精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 一个人免费在线观看的高清视频| 一本大道久久a久久精品| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 香蕉国产在线看| 久热爱精品视频在线9| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久伊人香网站| 亚洲精品一区av在线观看| 在线av久久热| 国产真人三级小视频在线观看| 日本三级黄在线观看| 99热只有精品国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产色视频综合| 91字幕亚洲| 桃色一区二区三区在线观看| 99re在线观看精品视频| 九色国产91popny在线| 久久香蕉国产精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 99精品欧美一区二区三区四区| 国内精品久久久久久久电影| 婷婷亚洲欧美| 午夜免费观看网址| 午夜福利成人在线免费观看| 12—13女人毛片做爰片一| 免费看十八禁软件| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美在线一区亚洲| 一级毛片高清免费大全| 黄色女人牲交| 久9热在线精品视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美又色又爽又黄视频| www.www免费av| 欧美激情久久久久久爽电影| 黄色视频,在线免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人av教育| 欧美日韩黄片免| 久久久久九九精品影院| 黑人操中国人逼视频| 美女高潮到喷水免费观看| 中文字幕久久专区| 久久久久久久久久黄片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产又爽黄色视频| 亚洲成国产人片在线观看| 最好的美女福利视频网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 18禁观看日本| 欧美日韩一级在线毛片| 成人av一区二区三区在线看| 两性夫妻黄色片| 精品国产亚洲在线| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美成人午夜精品| 俺也久久电影网| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线观看午夜福利视频| 国产精品免费视频内射| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美日本亚洲视频在线播放| 天堂影院成人在线观看| 亚洲av电影在线进入| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一区福利在线观看| 窝窝影院91人妻| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美日韩黄片免| 在线av久久热| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美不卡视频在线免费观看 | 人成视频在线观看免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 国产成人精品无人区| 婷婷亚洲欧美| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲av五月六月丁香网| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产黄片美女视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久国产精品影院| 久久久久国内视频| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品久久视频播放| 精品不卡国产一区二区三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 午夜福利视频1000在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 最近在线观看免费完整版| ponron亚洲| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 波多野结衣av一区二区av| 精品日产1卡2卡| 午夜福利一区二区在线看| 在线播放国产精品三级| 怎么达到女性高潮| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久人妻av系列| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 我的亚洲天堂| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲精品粉嫩美女一区| 麻豆一二三区av精品| 黄色视频,在线免费观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 中亚洲国语对白在线视频| 999久久久国产精品视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 90打野战视频偷拍视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 成年免费大片在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产欧美日韩一区二区精品| av在线播放免费不卡| 一级毛片精品| 午夜福利在线观看吧| av中文乱码字幕在线| 中文字幕最新亚洲高清| 免费观看人在逋| 丝袜在线中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 99精品在免费线老司机午夜| 久久天堂一区二区三区四区| 日日干狠狠操夜夜爽| 激情在线观看视频在线高清| 1024视频免费在线观看| 亚洲中文字幕日韩| bbb黄色大片| 香蕉av资源在线| 亚洲专区字幕在线| 久久香蕉激情| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产伦在线观看视频一区| 禁无遮挡网站| 午夜福利欧美成人| 人人妻人人看人人澡| 男人的好看免费观看在线视频 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久精品91蜜桃| 99久久国产精品久久久| 亚洲美女黄片视频| 色av中文字幕| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲av电影在线进入| 亚洲一区二区三区不卡视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产99白浆流出| 免费在线观看成人毛片| 一级a爱片免费观看的视频| 黄色丝袜av网址大全| 哪里可以看免费的av片| 亚洲av成人一区二区三| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 十分钟在线观看高清视频www| 一二三四社区在线视频社区8| 国产黄片美女视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美在线黄色| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美性猛交黑人性爽| www日本在线高清视频| 午夜福利视频1000在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲第一青青草原| 人人妻人人看人人澡| 亚洲成av人片免费观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 久99久视频精品免费|