氣相色譜質(zhì)譜法測定湘西杜仲籽油中5 種脂肪酸含量

◎ 饒青青，王 然，歐陽位麒，章發(fā)盛

（湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗所，湖南 吉首 416000）

杜仲是我國獨有的植物資源，廣泛分布于我國湖南、廣西、四川等地區(qū)，在湖南慈利、貴州遵義有規(guī)?；唐贩N植，其產(chǎn)品及其衍生物具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景[1-2]。杜仲籽油是通過超臨界萃取或者微波萃取等技術(shù)從杜仲翅果籽中得到的，含90%以上不飽和脂肪酸，有利于人體健康的杜仲加工品[3-5]。杜仲籽油主要由ɑ-亞麻酸（C18:3）、亞油酸（C18:2）、油酸（C18:1）、硬脂酸（C18:0）和棕櫚酸（C16:0）等脂肪酸等組成[6]，其中ɑ-亞麻酸、亞油酸是多烯類不飽和脂肪酸具有降血壓、降血脂等作用，是需從食物中攝入且人體不能自己合成的必需脂肪酸（EFA，essential fatty acids）[7-8]。油酸是單不飽和酸，分子穩(wěn)定，有抗氧化作用，營養(yǎng)價值高[9]。

食用植物油中脂肪酸的種類、含量及其比例是衡量植物油營養(yǎng)價值和質(zhì)量的重要指標(biāo)，本文用氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS，gas chromatograph-mass spectrometry ）對湘西杜仲籽油中5 種脂肪酸的含量進(jìn)行測定，以期為湘西杜仲籽油的開發(fā)應(yīng)用提供理論支撐，對促進(jìn)湘西精準(zhǔn)扶貧事業(yè)、發(fā)展民族食品經(jīng)濟(jì)，具有重要意義，將產(chǎn)生良好的經(jīng)濟(jì)、社會、生態(tài)效益。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

湘西杜仲籽油：湘西沃康油業(yè)科技有限公司提供樣品。

試劑：正己烷（美國TEDIA 公司）、甲醇（美國TEDIA 公司）為色譜純。氫氧化鉀（湖南匯虹公司）為分析純。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，CAS：301-00-8，批號：22070574），亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，CAS：112-63-0，批號：22020464），油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，CAS：112-62-9，批號：22090019），硬脂酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，CAS：112-61-8，批號：21120712），棕櫚酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（壇墨質(zhì)檢，CAS：112-39-0，批號：22020101）。

1.2 儀器與設(shè)備

7890B-5977A 型氣質(zhì)聯(lián)用儀（Aglient 公司）；AB135-S 型電子天平（Mettler Toledo 公司）；HY-5A 型振蕩器（環(huán)宇科學(xué)儀器廠）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試驗條件

氣質(zhì)聯(lián)用條件。HP-INNOWAX色譜柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）。色譜條件：起始溫度180 ℃，10 ℃·min-1升溫至 220 ℃，再以 8 ℃·min-1升溫至 250 ℃，保持13 min。進(jìn)樣口溫度：220 ℃，采用分流進(jìn)樣，分流比為40:1；四極桿溫度：230 ℃；SIM 模式掃描;離子源溫度：230 ℃。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取亞麻酸甲酯345.35 mg、亞油酸甲酯61.41 mg、油酸甲酯76.86 mg、硬脂酸甲酯11.22 mg、棕櫚酸甲酯27.10 mg 于25 mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，為標(biāo)準(zhǔn)貯藏液。準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)貯藏液0.1、0.2、1.0、2.0、5.0 mL 于50mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 樣品處理

準(zhǔn)確稱取混合均勻的樣品0.1 ～0.2 g（精確到0.000 1 g）至100 mL 容量瓶中，加入20 mL 正己烷輕搖溶解，并用正己烷定容至刻度，搖勻，為待測液。

吸取待測液2.0 mL 至15 mL 離心管中，加入2.0 mL（0.5 mol·L-1）氫氧化鉀甲醇溶液，至恒溫振蕩器器上50 ℃振蕩混合15 min，靜置5 min，加入6 mL蒸餾水，上下振搖0.5 min，靜置分層，吸取正己烷層過0.45 μm 膜待上機(jī)測試用。

1.4 數(shù)據(jù)處理

（1）結(jié)果計算。

試樣中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、ɑ-亞麻酸含量按下面公式計算：

式中Xi—試樣中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸的含量，單位為克每克（g·g-1）；Ci—由標(biāo)準(zhǔn)曲線得測定樣液中各脂肪酸甲酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg·mL-1）；V—被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升（mL）；m—試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（g）；F—各脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，其中：棕櫚酸甲酯轉(zhuǎn)化為棕櫚酸系數(shù)為0.948 1，硬脂酸甲酯轉(zhuǎn)化為硬脂酸系數(shù)為0.953 0，油酸甲酯轉(zhuǎn)化為油酸系數(shù)為0.952 7，亞油酸甲酯轉(zhuǎn)化為亞油酸系數(shù)為0.952 4，亞麻酸甲酯轉(zhuǎn)化為ɑ-亞麻酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)為0.952 0。

（2）結(jié)果分析。IBM SPSS Statistics 26 軟件用于數(shù)據(jù)分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適用性試驗

取混合對照溶液按1.3.1 進(jìn)樣，定性定量粒子按表1 設(shè)置，結(jié)果見圖1。

圖1 混合對照品色譜圖

2.2 線性關(guān)系

取1.3.2 配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列按1.3.1 進(jìn)樣，每種化合物選擇1 個定量離子及2～3 個定性離子。樣品測定時，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣品的離子豐度比相一致（相對豐度＞50%，允許±10%偏差；相對豐度20%～40%，允許±20%偏差）。以目標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，對應(yīng)的定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的豐度比見表1。

表1 GC-MS 保留時間、定量離子、定性離子及標(biāo)準(zhǔn)曲線表

2.3 方法驗證

驗證試驗結(jié)果見表2，其中重復(fù)性試驗按1.3.3 制取同一批號的6 份樣品測定，重復(fù)性在2.43%～7.43%之間，含量高的ɑ-亞麻酸重復(fù)性最佳；穩(wěn)定性試驗是取同一杜仲油供試品溶液，在提取后的0、4、8、12、16、24 h 進(jìn)樣；精密度試驗是取同一杜仲油供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 次；穩(wěn)定性和精密度的RSD 均小于1%，表明杜仲油中5 種脂肪酸按本方法測定結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性再現(xiàn)性強(qiáng)；加標(biāo)回收試驗則是按1.3.3制取樣品時按100%水平加入標(biāo)準(zhǔn)對照溶液，結(jié)果在87.08%～104.43%。

表2 方法驗證試驗數(shù)據(jù)表

2.4 樣品測定

按照1.3 對湘西杜仲籽油樣品進(jìn)行測定，檢測結(jié)果如表3 所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)湘西杜仲籽油中具有極高的營養(yǎng)保健價值的ɑ-亞麻酸含量在60%左右，ɑ-亞麻酸和亞油酸含量和高達(dá)72%左右和彭密軍[10]的研究結(jié)果61.04%和73.68%相似，本實驗發(fā)現(xiàn)湘西杜仲籽油中還有15%左右的油酸，高含量的油酸、亞油酸和ɑ-亞麻酸使湘西杜仲籽油可視為潛在的不飽和脂肪酸獲取源。

表3 湘西杜仲籽油中脂肪酸含量測定結(jié)果表

3 結(jié)論

本實驗建立了用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）同時測定湘西杜仲油中棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和亞麻酸甲酯的方法，進(jìn)而計算其中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸的含量。實驗結(jié)果說明GC-MS 法方法測定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，該方法可以作為杜仲油質(zhì)量控制的方法對于湘西杜仲籽油的生產(chǎn)全程質(zhì)量控制具有積極的意義。本方法的氣質(zhì)聯(lián)用儀也可用氣相色譜儀代替，同樣的前處理及系列標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制方法，可取得同樣的檢測效果。

本研究發(fā)現(xiàn)湘西杜仲籽油中高含量的ɑ-亞麻酸（59.9%）、亞油酸（12.2%）、油酸（15.2%）不飽和脂肪酸的組成，使其成為一種良好的食藥兩用的新源性油類，在降血脂、血壓和心腦血管疾病預(yù)防的方面有廣闊的開發(fā)前景，值得深入研究合理利用。