HPLC 法測(cè)定食品接觸材料中雙酚A 的遷移量

◎ 吳少棠

（新亞太檢測(cè)技術(shù)服務(wù)（中山）有限公司，廣東 中山 528400）

作為一種化工有機(jī)原料，雙酚A 主要用于聚碳酸酯和環(huán)氧樹(shù)脂等高分子材料的加工和生產(chǎn)。多數(shù)食品包裝材料中均含有雙酚A。因此，雙酚A 在各類(lèi)食品包裝材料中的遷移量一直是食品檢測(cè)工作的重點(diǎn)[1]。雙酚A 也是一種雌激素，可能與乳腺、前列腺以及生殖系統(tǒng)疾病有關(guān)，有誘發(fā)癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。一種簡(jiǎn)便、靈敏度高且重現(xiàn)性好的分析方法，能夠快速對(duì)食品接觸材料遷移物中的雙酚A 進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析，對(duì)食品接觸材料遷移物中雙酚A 的限度控制具有重要意義[2]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-QQQ（安捷倫公司）；E201 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；分析天平（感量0.1 mg，Lab-103）；渦旋振蕩器（合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司）；恒溫恒濕箱（東莞市長(zhǎng)星儀器有限公司）；雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（默克，CAS 號(hào)：80-05-7，純度≥99%）。

乙酸、乙醇、正己烷，購(gòu)自天津永大化學(xué)試劑有限公司。

1.2 食品模擬物

水基：10%乙醇溶液；酸基：4%乙酸溶液；酒精類(lèi)：20%乙醇溶液；油基食品模擬物：植物油。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的制備

參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5009.156-2016）中食品接觸材料及制品遷移試驗(yàn)預(yù)處理方法通則，對(duì)于水基樣品包裝材料選擇10%乙醇溶液為食品模擬物；對(duì)于酸基樣品包裝材料選擇4%乙酸溶液為食品模擬物；對(duì)于酒精類(lèi)樣品包裝材料選擇20%乙醇溶液作為食品模擬物；油基食品模擬物選擇植物油。按照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 31604.1-2015）食品接觸材料及制品遷移試驗(yàn)通則中的遷移實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，收集各條件項(xiàng)下的浸泡溶液。

（1）水基樣品的制備。取上述水基樣品遷移試驗(yàn)所得溶液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜待測(cè)。

（2）酸基樣品的制備。取上述酸基樣品遷移試驗(yàn)所得溶液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜待測(cè)。

（3）酒精類(lèi)樣品的制備。取上述酒精類(lèi)遷移試驗(yàn)所得溶液，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜待測(cè)。

（4）油基樣品的制備。取油基樣品1.0 g，于20 mL 試管中，加入正己烷5 mL，渦旋混勻后，加入50%甲醇5 mL，渦旋混勻。靜置5 min 后，取下層水溶液過(guò)0.22 μm 微孔濾膜待測(cè)。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精確稱(chēng)取雙酚A 對(duì)照品20 mg，至20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度線(xiàn)即得，雙酚A 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度約為1.0 mg·mL-1。

雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)中間液：精確移取雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml 至100 ml 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度線(xiàn)即得雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)中液，濃度約10 mg/L。

1.3.3 水基、酸性食品、酒精類(lèi)食品模擬物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精確量取雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)中間液0ml、0.01 mL、0.025 mL、0.05 mL、0.075 mL、0.10 mL、0.20 mL，分別至10 mL 容量瓶中，用10%乙醇分別定容至刻度線(xiàn)，即得濃度分別為0.00 ml、0.01 mg/L、0.025 mg/L、0.050 mg·L-1、0.075 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.20 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液。分別精確量取各標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液各10 μL，在擬定的液相色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以雙酚A 的濃度為橫坐標(biāo)，其峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.3.4 油基食品模擬物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

分別稱(chēng)取1g（精確至0.01g）油基食品模擬物至7 個(gè)具塞試管中，精確量取雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)中間液0 ml、0.01 mL、0.03 mL、0.05 mL、0.07 mL、0.01 mL、0.03 mL，分別至10 mL容量瓶中，用4%乙酸分別定容至刻度線(xiàn)，即得濃度分別為0.00 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1、0.50mg·kg-1、0.70 mg·kg-1、1.0 mg·kg-1、2.0 mg·kg-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液。分別精確量取各標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液各10 μL，在擬定的液相色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以雙酚A 的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.3.5 油基模擬物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

分別稱(chēng)取1g（精確至0.01g）油基食品模擬物至7 個(gè)具塞試管中，精確量取雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)中間液0 ml、0.01 mL、0.03 mL、0.05 mL、0.07 mL、0.01mL、0.03 mL，分別至10 mL 容量瓶中，用4%乙酸分別定容至刻度線(xiàn)，即得濃度分別為0.00 mg·kg-1、0.1 0 m g·k g-1、0.30 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1、0.70 mg·kg-1、1.0 mg·kg-1、2.0 mg·kg-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液。分別至上述試管中，加入正己烷3 mL，渦旋混勻后，加入50%甲醇水溶液（1+1）3 mL，渦旋混勻。靜置5 min 后，取下層水溶液過(guò)0.22 μm 微孔濾膜待測(cè)。分別精確量取各標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液各10 μL，在擬定的液相色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以雙酚A 的濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.3.6 主要儀器參數(shù)

（1）色譜條件。色譜柱選擇Agilent ZORBAX SB-C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1 mL·min-1；流動(dòng)相：甲醇和水。洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 洗脫程序表

（2）質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源；電離方式：采用負(fù)離子掃描；檢測(cè)方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（SRM）；毛細(xì)管加熱溫度350 ℃；電噴霧電壓5.0 kV；離子源鞘氣（N2)，30.0 psi；離子源輔助氣（N2)，10.0 psi；m/z 掃描范圍為200～1 000，全掃描（SCAN）。其他參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 雙酚A 質(zhì)譜檢測(cè)條件表

1.3.7 雙酚A 的檢測(cè)限

按照1.3.1 節(jié)中的處理方法，采用空白加標(biāo)溶液測(cè)試7 次，并計(jì)算各食品模擬物中雙酚A 的檢測(cè)限（S/N=3）。

1.3.8 樣品中雙酚A 測(cè)定的重復(fù)性和重現(xiàn)性

分別在水基、酸基、酒精類(lèi)和油基食品模擬物中添加雙酚A，按照1.3.1 節(jié)中的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理，并在擬定色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，可通過(guò)不同人員在相同條件下進(jìn)行重復(fù)獨(dú)立測(cè)試，驗(yàn)證其再現(xiàn)性[3]。

1.3.9 樣品中雙酚A 的加標(biāo)回收率測(cè)定

分別在水基、酸基、酒精類(lèi)和油基食品模擬物中添加雙酚A，按照1.3.1 節(jié)中的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理，并在擬定色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，計(jì)算加標(biāo)回收率[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)定結(jié)果

雙酚A 水基食品中線(xiàn)性關(guān)系為y = 1,706.214 12 x- 2.979 78，R2= 0.999 82；雙酚A 酸性食品中線(xiàn)性關(guān)系為y = 3 071.654 73x - 8.417 87，R2= 0.998 81；雙酚A 酒精類(lèi)食品中線(xiàn)性關(guān)系為y = 1 167.347 98x - 0.606 55，R2= 0.999.88743；雙酚A 油基食品中線(xiàn)性關(guān)系為y =531.887 21x - 9.236 34，R2= 0.999 42。不同模擬液雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)圖1～圖4。

圖1 雙酚A標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)（水基食品模擬液）

圖2 雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)（酸性食品模擬液）圖

圖3 雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)（酒精類(lèi)食品模擬液）圖

圖4 雙酚A 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)（油基食品模擬液）圖

2.2 樣品中雙酚A 的檢出限

表3 為雙酚A 遷移量的測(cè)定測(cè)試結(jié)果。根據(jù)預(yù)估的儀器檢出限，采用空白加標(biāo)溶液測(cè)試7 次，結(jié)果如表4 所示。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)偏差公式，計(jì)算7 個(gè)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），檢出限為3.14×SD。綜合考慮理論計(jì)算值和實(shí)驗(yàn)室風(fēng)險(xiǎn)控制，確定報(bào)告限[5]，具體見(jiàn)表3 與表4。

表3 雙酚A 遷移量的測(cè)定測(cè)試結(jié)果表

表4 方法檢出限及報(bào)告限表

2.3 樣品中雙酚A 測(cè)定的重復(fù)性和重現(xiàn)性結(jié)果

水基、酸基、酒精類(lèi)和油基食品模擬物中雙酚A遷移量測(cè)定的重復(fù)性測(cè)試結(jié)果表見(jiàn)表5，7 次測(cè)定值之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于10%，本方法重復(fù)性良好。通過(guò)不同人員在相同條件下對(duì)空白加標(biāo)進(jìn)行重復(fù)獨(dú)立測(cè)試，油基食品模擬物人員比對(duì)測(cè)試結(jié)果表見(jiàn)表6，T0.05,12＜2.179，本方法具有較好的再現(xiàn)性。

表5 雙酚A 遷移量測(cè)定的重復(fù)性測(cè)試結(jié)果表

表6 油基食品模擬物人員比對(duì)測(cè)試結(jié)果表

2.4 樣品中雙酚A 的加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果

雙酚A 的加標(biāo)回收率結(jié)果表見(jiàn)表7，結(jié)果顯示本方法測(cè)定雙酚A 的加標(biāo)回收率在94.00%～106.96%范圍內(nèi)，本方法測(cè)定樣品中雙酚A 準(zhǔn)確度良好。

表7 樣品中雙酚A 的加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果表

3 結(jié)語(yǔ)

本文提出了一種靈敏且準(zhǔn)確度高的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定食品接觸材料及制品中雙酚A 遷移量的方法，通過(guò)對(duì)定量分析方法進(jìn)行驗(yàn)證，得到以下結(jié)論。

（1）所測(cè)定的4 種食品模擬物中雙酚A 的線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999 0。

（2）水基、酸性食品、酒精類(lèi)食品模擬物測(cè)定中方法的檢出限（LOD）為0.001 mg·L-1，油基食品模擬物測(cè)定中方法的檢出限（LOD）為0.006 mg·L-1，此方法具有較高的靈敏度。

（3）各樣品中雙酚A 遷移量測(cè)定的重復(fù)性測(cè)定值之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于10%，油基食品模擬物再現(xiàn)性測(cè)定中T0.05,12＜2.179，本方法具有較好的重復(fù)性和再現(xiàn)性.

（4）測(cè)定雙酚A 的加標(biāo)回收率在94.00%～106.96%范圍內(nèi)，本方法測(cè)定樣品中雙酚A 準(zhǔn)確度良好。

本方法簡(jiǎn)便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適合食品接觸材料遷移物中雙酚A 的定量分析，研究結(jié)果對(duì)食品接觸材料遷移物中雙酚A 的快速檢測(cè)和質(zhì)量控制具有重要意義。