• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    廣西邊境地區(qū)與非邊境地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因組學(xué)分析

    2023-05-18 14:44:46葉婧周崇興林玫先曉敏梁小煙張影坤藍(lán)如束崔哲哲
    熱帶病與寄生蟲學(xué) 2023年2期
    關(guān)鍵詞:基因突變耐藥

    葉婧,周崇興,林玫,先曉敏,梁小煙,張影坤,藍(lán)如束,崔哲哲

    1.廣西壯族自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心,廣西重大傳染病防控與生物安全應(yīng)急響應(yīng)重點實驗室,廣西結(jié)核病防治重點學(xué)科平臺,廣西 南寧 530028;2.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;3.廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院

    結(jié)核病是一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性呼吸道傳染疾病,據(jù)世界衛(wèi)生組織估算,2021 年全球新增結(jié)核病患者約1060 萬例,死亡160 萬例[1],在包括我國在內(nèi)的大部分國家或地區(qū),結(jié)核病仍然是一個重大的公共衛(wèi)生問題[2-3]。廣西地處我國西南部,由于經(jīng)濟(jì)相對落后、人群居住密集、醫(yī)療資源有限,結(jié)核病的發(fā)生率處于全國較高水平[4]。同時,因與越南接壤,廣西結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)外來譜系輸入的風(fēng)險不容忽視。全基因組測序技術(shù)(whole-genome sequencing,WGS)是近年來廣泛應(yīng)用于MTB 分子生物學(xué)研究的一項技術(shù)[5-6],為了解廣西邊境與非邊境地區(qū)MTB 基因型的分布特征及流行情況,本研究使用WGS 技術(shù)對來自廣西邊境與非邊境地區(qū)的MTB菌株進(jìn)行了基因組學(xué)分析,現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

    1 材料和方法

    1.1 樣本來源 選取廣西境內(nèi)東、西、南、北、中5個方位的桂林、貴港、崇左、百色和防城港5 個市作為調(diào)查點。其中,與越南接壤的百色、崇左、防城港3 個市作為邊境組,未與越南接壤的桂林、貴港2 個市作為非邊境組。收集2015—2017 年當(dāng)?shù)亟Y(jié)核病定點醫(yī)院結(jié)核病患者的痰液,采用固體中性羅氏培養(yǎng)基在37℃恒溫培養(yǎng)室進(jìn)行MTB 的分離培養(yǎng)。

    1.2 檢測方法

    1.2.1 DNA 提取 采用CTAB 法提取DNA[7],在1.5 mL 離心管加入400 μL 1× TE 緩沖液并取滿環(huán)生長良好的結(jié)核分枝桿菌,置于80℃水浴30 min滅活,將滅活后的菌液在細(xì)菌超聲分散計數(shù)儀超聲1 min,使細(xì)菌充分分散,再加入溶菌酶使細(xì)菌充分破壁,然后用SDS/蛋白酶K 混合,用CTAB/NaCl 溶液沉淀非核酸細(xì)胞碎片,用氯仿/異戊醇提取DNA,沉淀物經(jīng)洗滌且自然干燥后,加入50 μL 1×TE 緩沖液使其充分溶解,置-20℃保存?zhèn)溆?,作為WGS 檢測的DNA 模板。

    1.2.2 全基因組測序分析 由北京諾禾致源生物有限公司進(jìn)行檢測,利用高通量二代Illumina 測序技術(shù)平臺,進(jìn)行DNA 片段文庫構(gòu)建,雙端測序,PE150,深度至少200×,每個樣品總測序深度數(shù)據(jù)量≥1G clean data。測序數(shù)據(jù)經(jīng)過過濾處理,去除包含A-dapter 的序列及低質(zhì)量數(shù)據(jù),得到的Clean Da‐ta 用于后續(xù)分析。以H37Rv 菌株的全基因組序列(NC000962.2)作為參考模板,使用Samtools 軟件進(jìn)行比對獲得每株菌株單核苷酸多態(tài)性(single nu‐cleotide polymorphism,SNP)[8]。 將SNP 數(shù) 據(jù) 與H37Rv 進(jìn)行比對,獲得每株菌株的基因型[9]。采用SAM-TB 平臺根據(jù)SNP 的數(shù)據(jù)鑒定MTB 菌株的譜系[10]。將SNP 數(shù)據(jù)與已報道的結(jié)核分枝桿菌耐藥基因突變數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對[11],獲得每株菌株對一線抗結(jié)核藥品耐藥突變基因的類型。

    1.3 統(tǒng)計分析 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析。計數(shù)資料采用n(%)表示,組間計數(shù)資料差異的比較采用χ2檢驗、校正χ2檢驗或Fish‐er 確切概率法,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié) 果

    2.1 MTB 菌株全基因組測序分型結(jié)果 共有646株MTB 菌株納入本次研究。測序結(jié)果顯示,MTB菌株主要分為4 個譜系,包括Lineage 1(簡稱L1)、Lineage 2(簡稱L2)、Lineage 3(簡稱L3)和Lineage 4(簡稱L4)。從不同年份看,三年間四種譜系分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。邊境組測序分析了199 株,結(jié)果顯示L2(126/199,63.32%)和L4(64/199,32.16%)是主要流行譜系,L1 占4.02%(8/199),L3 僅發(fā)現(xiàn)1 株;非邊境組測序分析了447株,L2(299/447,66.89%)和L4(144/447,32.21%)是主要流行譜系,L1 占0.89%(4/447),L3 未發(fā)現(xiàn)。邊境組與非邊境組基因型構(gòu)成分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.754,P<0.05)。見表2。

    表1 MTB 菌株譜系時間分布[n(%)]Table 1 Time distribution of MTB strain lineage[n(%)]

    表2 廣西邊境組和非邊境組MTB 菌株譜系構(gòu)成(例)Table 2 The Lineages of 646 MTB strains in border and non border groups in Guangxi(n)

    作為最主要的流行譜系,L2 可分為亞譜系L2.1、L2.2 和L2.3,邊境和非邊境組均以亞譜系L2.3 為主。L2 及其各亞譜系在邊境與非邊境組的分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.781、0.219、0.419、0.005,P均>0.05)。L4 在本研究中共發(fā)現(xiàn)7 個亞譜系,分別為L4.1.2、L4.2~L4.5、L4.7 和L4.9,邊境和非邊境組以亞譜系L4.2、L4.4 和L4.5 為主。L4.4 和L4.5 亞譜系在邊境和非邊境組的分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.779、0.029,P均>0.05)。L4.2 亞譜系和L1 譜系在邊境組與非邊境組的分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.833、5.763,P均<0.05)。見表3。

    表3 邊境組和非邊境組MTB 菌株基因型分布[n(%)]Table 3 Genotype distribution of MTB strains in border and non border groups in Guangxi[n(%)]

    2.2 MTB 菌株耐藥基因突變類型及分布情況WGS 結(jié)果分析,196 株MTB 菌株發(fā)生了5 種抗結(jié)核藥物的相關(guān)耐藥基因突變,突變率為30.34%(196/646)。其中邊境組為40.70%(81/199),非邊境組為25.73%(115/447),邊境組的耐藥基因突變率高于非邊境組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=14.613,P<0.05)。

    對196 株菌株分別進(jìn)行5 種藥物的耐藥突變基因分析得出,突變率最高的是katG(15.94%,103/646),其 次 分 別 是ropB(11.30%,73/646)、embB(6.04%,39/646)、rpsL(5.88%,38/646)和rrsL(3.72%,24/646)。對突變率前5 的耐藥相關(guān)基因的分布分析發(fā)現(xiàn),katG、ropB、rpsL 基因在邊境組的突變率均高于非邊境組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.716、9.603、6.979,P均<0.05)。見表4。對突變率前5 的耐藥相關(guān)基因位點的分布分析發(fā)現(xiàn),katG315、rpoB450、rpsL43 基因位點在邊境組與非邊境組的分 布 差 異 均 有 統(tǒng) 計 學(xué) 意 義(χ2=5.153、12.893、11.693,P均<0.05)。見表5。

    表4 MTB 分離株耐藥基因突變在廣西邊境與非邊境地區(qū)的分布[n(%)]Table 4 Distribution of drug resistance gene mutations in MTB isolates in border and non-border areas in Guangxi[n(%)]

    表5 MTB 分離株耐藥基因突變位點在廣西邊境與非邊境地區(qū)的分布Table 5 Distribution of drug resistance gene point-mutations in MTB isolates in border and non-border areas in Guangxi

    3 討 論

    基于WGS 的單個核酸多態(tài)性(SNP)是MTB常用的基因分型方法,該方法具有通量大、分辨率高、可進(jìn)行精準(zhǔn)分型和鑒定、能夠構(gòu)建完整的DNA序列等優(yōu)點[12],既往研究表明,其與McSpoligotyp‐ing 分型方法的一致性可達(dá)94.18%[7]。目前,WGS在MTB 分離株基因分型方面具有許多優(yōu)勢,并且可以有效地研究MTB 分離株的傳播動力學(xué),可鑒定出與MTB 耐藥相關(guān)的基因突變[13]。

    研究表明[14-15],MTB 基因分型可以分為7 個主要譜系(Lineage 1~7,簡稱L1~L7),本研究發(fā)現(xiàn)廣西主要流行譜系為L2 和L4,這與我國總體情況基本一致[16]。廣西的邊境和非邊境地區(qū)的L2 譜系均以亞譜系L2.3 為主,L4 譜系均以亞譜系L4.2、L4.4 和L4.5 為主。既往研究認(rèn)為,L4.5 亞譜系主要存在于中國,且可能由廣東向西南傳播[17-18],本次研究結(jié)果一定程度上佐證了上述觀點。L1 和L3 譜系主要流行于東非、中亞、南亞及東南亞等地[19-20],但在我國較為少見,本研究在廣西邊境和非邊境地區(qū)均發(fā)現(xiàn)L1 譜系,且在邊境地區(qū)發(fā)現(xiàn)1 例L3 譜系,推測可能是從東南亞地區(qū)經(jīng)邊境傳入,并有繼續(xù)向非邊境地區(qū)傳播的可能。

    既往研究表明,廣西的結(jié)核病耐藥負(fù)擔(dān)較重[21]。MTB 耐藥的主要機(jī)制是基因突變,廣西邊境地區(qū)耐藥基因突變率高于非邊境地區(qū),與越南河內(nèi)的突變率較為接近[22],可能因為邊境地區(qū)人口構(gòu)成較為復(fù)雜,人口流動較大且與鄰國經(jīng)濟(jì)文化交流較為頻繁。

    既往研究中,與異煙肼(isoniazid,INH)耐藥相關(guān)的基因主要有katG 和inhA[23]。本研究中,在耐INH 基因突變菌株中共檢測4 種基因發(fā)生突變,分別為katG、fabG1、ahpC 和inhA,INH 的耐藥基因突變率在主要抗癆藥物中最高(19.20%),與青海省和杭州市的報道基本一致[24-25]。4 種基因突變中以katG 基因突變?yōu)橹?,主要突變位點為katG315,與Sunil 等[26]研究一致;此外哈薩克斯坦、伊朗和我國北京市[27-29]的研究數(shù)據(jù)也都提示katG315 位點突變比例高。該現(xiàn)象可能與INH 作為全效抗結(jié)核藥物被廣泛用于結(jié)核治療有關(guān)[30],當(dāng)患者不規(guī)律用藥,治療依從性差時,便容易產(chǎn)生INH 的耐藥,應(yīng)當(dāng)引起重視。

    利福平(rifampin,RIF)是重要的一線抗結(jié)核藥物,用于治療結(jié)核已超過50 年[31]。本研究發(fā)現(xiàn)MTB 分離株耐RIF 基因突變(11.30%)僅次于耐INH。利福平耐藥主要是rpoB 基因突變導(dǎo)致,本研究中廣西rpoB 基因突變位點以rpoB450 和rpoB445 為主,與曾美春等[32]報道的浙江rpoB 最常見的突變位點是rpoB450 較為一致。我國不同地區(qū)rpoB 基因突變位點呈多樣化,但本研究中400、427、430、431、432、435、437 和452 等突變位點均有發(fā)現(xiàn),可能與研究的地區(qū)及民族的差異性有關(guān),側(cè)面說明耐藥基因突變特征在不同民族中可能存在差異。

    本研究發(fā)現(xiàn),邊境組katG、ropB 和rpsL 基因的突變率高于非邊境組,可能與邊境地區(qū)結(jié)核病控制水平、結(jié)核病治療人群的相關(guān)求醫(yī)行為以及當(dāng)?shù)鼐甑倪z傳背景等有關(guān),具體原因尚待進(jìn)一步研究。

    不同國家、不同省份、甚至同個省份不同城市的結(jié)核病耐藥率及耐藥基因突變譜都可能不同。目前我國仍然缺乏對這些耐藥基因突變位點分布的總體描述。本研究在基因組學(xué)的水平上分析了主要的耐藥相關(guān)基因突變位點和頻率,給全國耐藥相關(guān)基因突變的分布提供了一部分依據(jù)。在今后的工作中,應(yīng)加強(qiáng)結(jié)核病的耐藥篩查,盡早發(fā)現(xiàn)耐藥結(jié)核病患者,通過指導(dǎo)臨床規(guī)范治療、加強(qiáng)管理,降低耐藥結(jié)核病的傳播風(fēng)險。

    利益沖突聲明全部作者聲明無利益沖突

    作者貢獻(xiàn)聲明葉婧、周崇興、崔哲哲負(fù)責(zé)撰寫和修改論文;林玫負(fù)責(zé)設(shè)計研究思路;藍(lán)如束、梁小煙、先曉敏、張影坤負(fù)責(zé)研究數(shù)據(jù)的獲取和分析

    猜你喜歡
    基因突變耐藥
    大狗,小狗——基因突變解釋體型大小
    英語世界(2023年6期)2023-06-30 06:29:10
    如何判斷靶向治療耐藥
    Ibalizumab治療成人多耐藥HIV-1感染的研究進(jìn)展
    miR-181a在卵巢癌細(xì)胞中對順鉑的耐藥作用
    管家基因突變導(dǎo)致面部特異性出生缺陷的原因
    超級耐藥菌威脅全球,到底是誰惹的禍?
    基因突變的“新物種”
    乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄酶基因突變的臨床意義
    PDCA循環(huán)法在多重耐藥菌感染監(jiān)控中的應(yīng)用
    一例腦腱黃瘤病患者的CYP27A1基因突變
    一区二区三区高清视频在线| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品蜜桃在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产精品三级大全| 日日撸夜夜添| 午夜激情久久久久久久| 久久99精品国语久久久| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美潮喷喷水| 成年女人在线观看亚洲视频 | av专区在线播放| 国产成人午夜福利电影在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲欧美成人精品一区二区| 男女那种视频在线观看| 成人一区二区视频在线观看| av专区在线播放| 久久久欧美国产精品| 国产伦在线观看视频一区| 麻豆成人av视频| 18+在线观看网站| 一个人看视频在线观看www免费| 久久久久久久久久久免费av| 国产高清不卡午夜福利| 国产免费福利视频在线观看| 九九在线视频观看精品| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜日本视频在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久成人免费电影| 国产男人的电影天堂91| 久久久精品欧美日韩精品| 久久97久久精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 午夜免费激情av| 国产麻豆成人av免费视频| 成人二区视频| 直男gayav资源| 成人综合一区亚洲| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲性久久影院| 国产午夜精品论理片| www.av在线官网国产| 黄色日韩在线| 久久精品人妻少妇| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 久久久久久久久大av| 精品久久国产蜜桃| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 丰满少妇做爰视频| 久久精品夜色国产| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产成人精品一,二区| 少妇的逼水好多| 国产成人freesex在线| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 黄片无遮挡物在线观看| 免费av毛片视频| 久久久久久久午夜电影| av在线天堂中文字幕| 久久午夜福利片| 春色校园在线视频观看| 亚洲成人久久爱视频| 色视频www国产| 亚洲av不卡在线观看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产伦在线观看视频一区| 人体艺术视频欧美日本| 男女边摸边吃奶| 日韩制服骚丝袜av| 男女边吃奶边做爰视频| 观看美女的网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲欧美一区二区三区国产| 免费黄网站久久成人精品| 成人欧美大片| 免费无遮挡裸体视频| 两个人的视频大全免费| 亚洲欧美精品专区久久| 免费av毛片视频| 青春草亚洲视频在线观看| 久久6这里有精品| 老司机影院成人| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 天堂网av新在线| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美+日韩+精品| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产一区二区在线观看日韩| 国产精品一区二区三区四区久久| 超碰av人人做人人爽久久| 午夜老司机福利剧场| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲最大成人av| 国产黄色免费在线视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 床上黄色一级片| 青青草视频在线视频观看| 春色校园在线视频观看| 如何舔出高潮| 黄色欧美视频在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产精品一及| 精品一区在线观看国产| 两个人视频免费观看高清| 美女cb高潮喷水在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲国产成人一精品久久久| 少妇的逼水好多| 全区人妻精品视频| 久久久午夜欧美精品| 成人国产麻豆网| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲人成网站在线播| 国产精品人妻久久久久久| 伦理电影大哥的女人| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产一区二区三区av在线| 亚洲国产欧美在线一区| 国产黄色小视频在线观看| 能在线免费观看的黄片| 熟妇人妻不卡中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 色网站视频免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲综合色惰| 一二三四中文在线观看免费高清| 简卡轻食公司| 国产在视频线在精品| 久久久欧美国产精品| 欧美最新免费一区二区三区| 街头女战士在线观看网站| 亚洲国产欧美在线一区| 国产免费视频播放在线视频 | 国产高潮美女av| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产成人精品婷婷| 亚洲高清免费不卡视频| 久久精品久久久久久久性| 亚洲天堂国产精品一区在线| 色5月婷婷丁香| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲精品影视一区二区三区av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产91av在线免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲成色77777| 亚洲乱码一区二区免费版| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品久久久久久久末码| 成年免费大片在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | av天堂中文字幕网| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆国产97在线/欧美| 成人无遮挡网站| 免费看av在线观看网站| 日本一本二区三区精品| 大香蕉久久网| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲av福利一区| 美女内射精品一级片tv| 成人av在线播放网站| 国产乱人偷精品视频| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品自拍成人| 欧美精品国产亚洲| 一级毛片我不卡| 国产精品一二三区在线看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久热精品热| 国产成人免费观看mmmm| 一区二区三区四区激情视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲成色77777| 国产一区二区三区av在线| 男女国产视频网站| 成年人午夜在线观看视频 | av天堂中文字幕网| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲国产精品成人综合色| 看十八女毛片水多多多| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久国内精品自在自线图片| 一级毛片我不卡| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产成年人精品一区二区| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 精品久久久久久电影网| 精品人妻熟女av久视频| 十八禁网站网址无遮挡 | av福利片在线观看| 夫妻午夜视频| 久久久久久久久久久丰满| 日本-黄色视频高清免费观看| 麻豆国产97在线/欧美| 日本黄色片子视频| av福利片在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 国产黄频视频在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 久久这里有精品视频免费| 精华霜和精华液先用哪个| 大香蕉97超碰在线| 内射极品少妇av片p| 亚洲国产精品专区欧美| 一级黄片播放器| 亚洲色图av天堂| 国产精品人妻久久久影院| 国产乱来视频区| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品三级大全| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲精品视频女| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 少妇熟女欧美另类| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 高清在线视频一区二区三区| 免费人成在线观看视频色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精华霜和精华液先用哪个| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 九色成人免费人妻av| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲国产色片| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲精品色激情综合| 69人妻影院| av黄色大香蕉| 精华霜和精华液先用哪个| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久久久久久久成人| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | www.av在线官网国产| 久久久国产一区二区| 晚上一个人看的免费电影| 欧美日韩综合久久久久久| 91久久精品国产一区二区三区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 男女边摸边吃奶| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 中文字幕av在线有码专区| 99久久精品热视频| 免费看日本二区| 国产高潮美女av| 91久久精品国产一区二区成人| 一级毛片aaaaaa免费看小| 热99在线观看视频| 国产精品蜜桃在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲性久久影院| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产视频内射| 国产永久视频网站| 毛片女人毛片| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产av国产精品国产| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品熟女久久久久浪| 黄色配什么色好看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一级爰片在线观看| 精品一区二区免费观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆成人午夜福利视频| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美激情在线99| 只有这里有精品99| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 嫩草影院精品99| 亚洲欧美精品自产自拍| 最近最新中文字幕免费大全7| 男人和女人高潮做爰伦理| 成人二区视频| 久久久欧美国产精品| 日韩欧美 国产精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 在线 av 中文字幕| av在线老鸭窝| 99视频精品全部免费 在线| 777米奇影视久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 免费观看性生交大片5| 国产一级毛片在线| 麻豆成人av视频| 精品人妻视频免费看| 97超视频在线观看视频| 大片免费播放器 马上看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品.久久久| eeuss影院久久| 男女视频在线观看网站免费| 日韩国内少妇激情av| 搡老乐熟女国产| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品色激情综合| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美丝袜亚洲另类| 国内精品美女久久久久久| 国产精品久久视频播放| 亚洲经典国产精华液单| 好男人视频免费观看在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲最大成人中文| 一夜夜www| 亚洲无线观看免费| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 男女国产视频网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 色综合站精品国产| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产成年人精品一区二区| videos熟女内射| 精品久久久久久电影网| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品,欧美精品| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲av福利一区| 亚洲国产欧美人成| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品一二三| 日韩欧美精品v在线| 国精品久久久久久国模美| 又爽又黄a免费视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 精品熟女少妇av免费看| 一级片'在线观看视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美日韩在线观看h| 日日摸夜夜添夜夜爱| 在线观看人妻少妇| 两个人的视频大全免费| 亚洲最大成人av| 欧美成人精品欧美一级黄| 大陆偷拍与自拍| 国产精品人妻久久久影院| 国产亚洲av嫩草精品影院| 免费观看精品视频网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 如何舔出高潮| 精品不卡国产一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 99热这里只有是精品在线观看| 国产探花极品一区二区| 日本wwww免费看| 毛片女人毛片| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 成人午夜高清在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产免费一级a男人的天堂| 国产亚洲最大av| 午夜福利成人在线免费观看| 日本免费在线观看一区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲av国产av综合av卡| 日本一二三区视频观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一级片'在线观看视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 成人毛片a级毛片在线播放| av在线天堂中文字幕| 国产一区有黄有色的免费视频 | 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久精品国产自在天天线| 乱系列少妇在线播放| 国产精品1区2区在线观看.| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日韩电影二区| eeuss影院久久| 乱系列少妇在线播放| 三级经典国产精品| 我要看日韩黄色一级片| 99热这里只有是精品50| 3wmmmm亚洲av在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲欧洲日产国产| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 人妻一区二区av| xxx大片免费视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国内精品美女久久久久久| 欧美zozozo另类| 久久久欧美国产精品| 亚洲自偷自拍三级| 国产91av在线免费观看| ponron亚洲| 最近手机中文字幕大全| 亚洲欧美日韩东京热| 我要看日韩黄色一级片| 成人综合一区亚洲| www.色视频.com| 久久草成人影院| 久久久午夜欧美精品| 国内精品宾馆在线| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人综合一区亚洲| 国产成人91sexporn| 18禁动态无遮挡网站| 日韩精品青青久久久久久| 最近手机中文字幕大全| 白带黄色成豆腐渣| 成人漫画全彩无遮挡| 午夜免费观看性视频| 七月丁香在线播放| 成人亚洲精品av一区二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 日韩欧美国产在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产午夜福利久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品一二三区在线看| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美高清成人免费视频www| 国产亚洲91精品色在线| 天堂影院成人在线观看| eeuss影院久久| 国产视频内射| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲四区av| 亚洲经典国产精华液单| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产亚洲精品av在线| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久久久大av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精品人妻偷拍中文字幕| 2021少妇久久久久久久久久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国精品久久久久久国模美| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 97超碰精品成人国产| 麻豆国产97在线/欧美| 国产免费又黄又爽又色| 99久久中文字幕三级久久日本| 99久久人妻综合| eeuss影院久久| 久热久热在线精品观看| av播播在线观看一区| 99热这里只有是精品在线观看| 男女边摸边吃奶| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩欧美 国产精品| 久久久久网色| av在线蜜桃| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美区成人在线视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美+日韩+精品| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜免费观看性视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲三级黄色毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产在视频线在精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 极品教师在线视频| 久久国产乱子免费精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 日日啪夜夜撸| 97精品久久久久久久久久精品| 欧美精品一区二区大全| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲精品国产av成人精品| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 男女下面进入的视频免费午夜| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜久久久久精精品| 高清日韩中文字幕在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费电影在线观看免费观看| 午夜久久久久精精品| 日韩欧美三级三区| 老女人水多毛片| 亚州av有码| 欧美97在线视频| 精品久久国产蜜桃| 看黄色毛片网站| 青春草亚洲视频在线观看| 色5月婷婷丁香| 超碰av人人做人人爽久久| 十八禁网站网址无遮挡 | 高清毛片免费看| 日本wwww免费看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 亚洲国产精品成人久久小说| 91久久精品电影网| 国产人妻一区二区三区在| 男的添女的下面高潮视频| 少妇熟女欧美另类| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品伦人一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 在线观看一区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 婷婷六月久久综合丁香| av黄色大香蕉| 欧美精品国产亚洲| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 永久免费av网站大全| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 黄色日韩在线| 午夜福利视频1000在线观看| 永久免费av网站大全| 免费黄色在线免费观看| 国产精品国产三级专区第一集| 99热这里只有是精品在线观看| 美女大奶头视频| 国产久久久一区二区三区| www.色视频.com| 成人美女网站在线观看视频| 夫妻午夜视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 免费观看无遮挡的男女| 最近中文字幕2019免费版| 久久久色成人| av网站免费在线观看视频 | 久久亚洲国产成人精品v| 日本爱情动作片www.在线观看| 黄色日韩在线| 99久国产av精品国产电影| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费看av在线观看网站| 又大又黄又爽视频免费| 国产 一区 欧美 日韩| 精品久久国产蜜桃| 国产午夜精品论理片| 一夜夜www| 最近中文字幕2019免费版| 精品欧美国产一区二区三| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费观看精品视频网站| 男女国产视频网站| 伦精品一区二区三区| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲第一区二区三区不卡| 简卡轻食公司| 国产真实伦视频高清在线观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产午夜精品一二区理论片| 成人午夜高清在线视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 日本黄大片高清| 日本三级黄在线观看| 嫩草影院精品99| 亚洲av日韩在线播放| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 中国国产av一级| 天堂中文最新版在线下载 | 成人综合一区亚洲| 嫩草影院入口| 国产精品无大码| 一级爰片在线观看| 欧美一区二区亚洲| av福利片在线观看|