非小細(xì)胞肺癌中PD-L1 免疫檢查點(diǎn)表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系研究

姚紅方 趙艷紅 任兆強(qiáng) 劉訓(xùn)超（通訊作者）

（菏澤市立醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，山東 菏澤 274000）

肺癌是全球范圍內(nèi)造成死亡的主要原因之一，尤其是非小細(xì)胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC），其5 年生存率僅為20%[1-2]。近年來，免疫治療作為一種新的肺癌治療手段逐漸得到人們的關(guān)注。PD-L1 是一種免疫檢查點(diǎn)蛋白，在肺癌等惡性腫瘤中廣泛表達(dá)。它的主要功能是抑制免疫細(xì)胞的激活和攻擊腫瘤細(xì)胞。雖然ICIs 治療的臨床應(yīng)用已取得了一定的成功，但其應(yīng)用仍存在一些限制和挑戰(zhàn)，如ICIs 治療的反應(yīng)缺乏預(yù)測(cè)性，ICIs 治療后患者存在嚴(yán)重的副作用等[3]。免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)與ICIs 治療的反應(yīng)密切相關(guān)。PD-L1 表達(dá)是當(dāng)前研究中最為廣泛的免疫檢查點(diǎn)表達(dá)標(biāo)志物，其表達(dá)與治療反應(yīng)之間的關(guān)系并不明確。因此，研究其他免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)，為NSCLC 患者ICIs 治療的預(yù)測(cè)和應(yīng)用提供更全面、準(zhǔn)確的指標(biāo)，成為當(dāng)前研究的重要方向。本研究，旨在探究多個(gè)免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)與NSCLC 患者預(yù)后的關(guān)系,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年1 月至2022 年1 月我院60 例非小細(xì)胞肺癌患者（均為無法手術(shù)治療的患者）為研究對(duì)象。男35 例，女25 例，年齡49 歲～71歲，平均年齡（59.6±7.1）歲。所有患者均被診斷為非小細(xì)胞肺癌，并經(jīng)過組織學(xué)檢查確認(rèn)。確診時(shí)，所有患者均無法進(jìn)行手術(shù)治療。

1.2 方法 選取納入研究的腫瘤組織標(biāo)本，使用免疫組織化學(xué)（IHC）檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中PDL1 的表達(dá)方法如下：（1）組織樣本處理。從NSCLC 組織中切取薄片。組織處理過程中應(yīng)注意避免組織干燥、壞死和其他傷害。使用10%緩沖福爾馬林（PFA）將切片固定，時(shí)間為16～24h。固定后的切片保存在70%乙醇中，并在制備切片前去除乙醇。（2）制備組織切片。將固定的NSCLC 組織切割成4～5um 厚度的切片，放置在含有組織膠原蛋白的玻片上。切片應(yīng)保存在4℃冰箱中，避免在制備過程中產(chǎn)生水分。（3）抗體選擇和優(yōu)化。選擇針對(duì)目標(biāo)蛋白的高親和力、特異性和靈敏度的抗體，優(yōu)化抗體的濃度和染色時(shí)間等參數(shù)，以獲得最佳的染色效果。（4）免疫組織化學(xué)（IHC）染色：將制備好的切片進(jìn)行去蠟和抗原修復(fù)處理。將切片浸泡在2%的牛血清蛋白（BSA）中，加入適當(dāng)濃度的抗體，允許其在切片上結(jié)合一段時(shí)間。使用二級(jí)抗體或酶標(biāo)記的聚合物，對(duì)抗體進(jìn)行檢測(cè)。（5）成像和分析：切片被顯微鏡下的成像系統(tǒng)記錄下來?？墒褂锰囟ǖ能浖?duì)圖像進(jìn)行分析，以確定PD-1、PD-L1等表達(dá)水平。

1.3 觀察指標(biāo) （1）PD-L1 表達(dá)與患者臨床特征的相關(guān)性；（2）PD-L1 表達(dá)與生存期的關(guān)系；（3）PD-L1 表達(dá)與生存期和治療反應(yīng)的關(guān)系（95%置信區(qū)間：反映了比值比的不確定性，置信區(qū)間越窄，說明估計(jì)值越可靠）；（4）PD-L1 表達(dá)與生存期和治療反應(yīng)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過SPSS 25.0 軟件處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料，即通過（±s）表示，組間對(duì)比用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[例（%）]表示，組間對(duì)比用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05 表明組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1 表達(dá)與患者臨床特征的相關(guān)性 PD-L1表達(dá)水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定差異。見表1

表1 PD-L1 表達(dá)與患者臨床特征的相關(guān)性

2.2 PD-L1 表達(dá)與生存期的關(guān)系 PD-L1 表達(dá)水平高的患者平均生存期比表達(dá)水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信區(qū)間。見表2

表2 PD-L1 表達(dá)與生存期的關(guān)系

2.3 PD-L1 表達(dá)與治療反應(yīng)的關(guān)系 PD-L1 表達(dá)水平高的患者治療反應(yīng)差異較大，與表達(dá)水平低的患者相比，其差異治療反應(yīng)的患者數(shù)明顯增多。見表3

表3 PD-L1 表達(dá)與治療反應(yīng)的關(guān)系

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是一種具有高度異質(zhì)性的腫瘤，其預(yù)后和治療反應(yīng)常常受到多種因素的影響。近年來，腫瘤免疫治療（Tumor Immunotherapy）已成為了治療非小細(xì)胞肺癌的重要方法之一。該治療方法利用患者自身的免疫系統(tǒng)攻擊腫瘤細(xì)胞，能在一定程度上提高治療效果和生存率。其中，PD-L1 免疫檢查點(diǎn)抑制劑（PD-L1 抗體）是腫瘤免疫治療中的重要類別之一，已被廣泛用于非小細(xì)胞肺癌的治療。PD-L1 免疫檢查點(diǎn)抑制劑并不是對(duì)所有患者都有效，其療效在不同患者間存在較大差異。這可能與患者的免疫狀態(tài)和其他治療相關(guān)因素有關(guān)[4]。

本研究中，探討了PD-L1 表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果PD-L1 表達(dá)水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定差異，且非小細(xì)胞肺癌晚期患者中PD-L1 免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)水平與患者的生存期和治療反應(yīng)密切相關(guān)。PD-L1 表達(dá)水平在年齡、性別和吸煙史上存在一定的差異，可見需要為患者制定個(gè)性化的治療方案；PD-L1 表達(dá)水平高的患者平均生存期比表達(dá)水平低的患者短，并且具有更窄的95%置信區(qū)間，表明PDL1 表達(dá)水平的高低與患者預(yù)后密切相關(guān)。PD-L1 表達(dá)水平高的患者差異治療反應(yīng)的患者數(shù)明顯增多，表明PD-L1 表達(dá)水平的高低與患者治療反應(yīng)密切相關(guān)。PD-L1 高表達(dá)與更差的生存期和更好的治療反應(yīng)有關(guān)聯(lián)，表明PD-L1 高表達(dá)可能意味著腫瘤細(xì)胞更容易逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。PD-L1 蛋白與PD-1 受體的結(jié)合可抑制免疫細(xì)胞的活性，降低對(duì)腫瘤細(xì)胞的攻擊能力。因此，PD-L1 高表達(dá)可能會(huì)抑制免疫細(xì)胞的活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞更容易逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，導(dǎo)致更差的生存期。當(dāng)使用PD-L1 抑制劑治療時(shí)，PD-L1 高表達(dá)的患者可能會(huì)對(duì)該治療作出更好的反應(yīng)，因?yàn)檫@種治療可逆轉(zhuǎn)PD-L1 和PD-1 受體的結(jié)合，釋放出被抑制的免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的攻擊能力，這可能導(dǎo)致PD-L1 高表達(dá)組患者的更好治療反應(yīng)。基于以上結(jié)論，我們建議在制定非小細(xì)胞肺癌晚期患者的治療方案時(shí)，應(yīng)充分考慮PD-L1 表達(dá)水平的高低，以提高治療效果和患者的預(yù)后。結(jié)果顯示，PD-L1 免疫檢查點(diǎn)可能是非小細(xì)胞肺癌治療和預(yù)后的一個(gè)重要因素，值得進(jìn)一步研究和探索[5]。未來的研究應(yīng)該著重于揭示PD-L1 表達(dá)的調(diào)控機(jī)制和相互作用網(wǎng)絡(luò)，及其與其他因素（如腫瘤突變負(fù)荷、T 細(xì)胞浸潤、炎癥等）之間的關(guān)系。

綜上，PD-L1 表達(dá)水平在年齡、性別和吸煙史等臨床特征上存在一定的差異，并且PD-L1 高表達(dá)與更差的生存期和更好的治療反應(yīng)有關(guān)聯(lián)。因此，在制定個(gè)體化治療方案時(shí)，應(yīng)綜合考慮患者的PD-L1 表達(dá)水平和其他臨床特征，以獲得更好地治療效果和生存期。