高危型HPV 病毒載量在不同年齡段宮頸癌篩查中的應(yīng)用研究

李小華，門 楠，李瑩瑩，冬國友，楊向君

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在中國女性惡性腫瘤中位居第2 名［1］。宮頸癌是宮頸癌嚴(yán)重威脅著女性健康，最近研究表明，中國宮頸癌的新發(fā)病例數(shù)與死亡數(shù)正逐年升高，并有向年輕成年女性群體發(fā)展的趨勢［2］。所以及時、廣泛、有效的宮頸癌篩查成為降低宮頸癌發(fā)病率的有效手段。目前，HC2-HPV 檢測方法是唯一一個被世界衛(wèi)生組織（WHO）認(rèn)可的、有統(tǒng)一的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)的人類乳頭瘤病毒（HPV）檢測方法，且能夠進(jìn)行13 種常見高危型HPV 定量測定，比傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)檢測方法更敏感［3］。但是由于HPV 病毒載量在不同年齡段的人群中存在差異，且不同程度的HPV 載量在不同年齡段中引起宮頸癌前病變的致病力不同，常常在對特定年齡患者進(jìn)行診治時，出現(xiàn)錯誤地對攜帶實(shí)際高危險程度的HPV 載量患者進(jìn)行過分保守治療或者對實(shí)際低危險程度的HPV 載量患者進(jìn)行過度治療的情況，給臨床工作帶來困難［4-6］。同時，宮頸癌的發(fā)生率與HPV 病毒感染率也受到環(huán)境、地區(qū)、習(xí)俗、生活習(xí)慣的影響，在我國呈現(xiàn)出分區(qū)分布的特點(diǎn)，所以區(qū)域性診療標(biāo)準(zhǔn)的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究選取河北地區(qū)HPV 陽性患者來進(jìn)行分析，為了更好對不同年齡段人群進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 本研究以30和50 歲為分界值，將人群按照年齡分為3 組，探討不同年齡段，尤其是低年齡（ ＜30 歲）與高年齡（ ＞50 歲）段，高危型HPV 感染者病毒載量與不同宮頸病變的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2016 年～2020 年首次來唐山市婦幼保健院婦科門診進(jìn)行宮頸癌篩查并進(jìn)行HC2-HPV 檢測顯示陽性患者1 338 例，所有患者年齡均＞ 18 歲，且愿意接受宮頸活檢。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重精神疾?。挥羞^宮頸疾病治療史；妊娠期、哺乳期。同時在樣本采集與檢測前， 受檢患者24 h 禁止性生活、陰道清洗及陰道內(nèi)用藥。將所有研究對象按年齡分為低年齡組（≤30 歲）702 例、中年齡組（30 ～50 歲）351 例、高年齡組（≥50 歲）285 例。

1.2 方法

1.2.1 HPV 病毒載量檢測 用第二代雜交捕獲法（HC2）來檢測患者HPV 病毒載量，主要為依次進(jìn)行裂解、雜交、捕獲、信號放大及分析處理等步驟，并計(jì)算相對光單位（RLU）比標(biāo)準(zhǔn)陽性（CO）的比值（RUL/CO）， 以RUL/CO 值 ＞ 1.0 為陽性來分析結(jié)果［7］；以100 RUL/CO 作為低病毒載量與高病 毒載量的分界標(biāo)準(zhǔn)［8］。

1.2.2 宮頸病理活檢 月經(jīng)結(jié)束后3 ～7 d，禁止局部用藥與性生活，用陰道窺器充分暴露宮頸，用活檢鉗在宮頸3 點(diǎn)、6 點(diǎn)、9 點(diǎn)、12 點(diǎn)處各咬取一塊，所有組織均用10%的甲醛固定。進(jìn)行常規(guī)脫水、包埋、制片、HE 染色等，由病理師做出臨床病理診斷?；顧z結(jié)果與相應(yīng)宮頸上皮瘤變等級分別為：低級別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變LSIL（CIN1）；高級別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變HSIL（CIN2-3）；宮頸癌（Ca）。最終以病理活檢結(jié)果作為檢測宮頸病變等級的金標(biāo)準(zhǔn)。脫水機(jī)，染色機(jī)，切片機(jī)來自于Thermo Fisher Scientific公司；石蠟包埋機(jī)購買于孝感市孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司；漂片機(jī)購買于常州市中威電子儀器有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對檢驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，不同組病毒載量的比較采用雙向t 檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)，在低年齡組及高年齡組組內(nèi)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料由（±s）表示，計(jì)數(shù)資料由（%）表示；以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段HPV 陽性患者病毒載量比較 中年齡組病毒載量為（358.93 ± 132.45）RUL/CO，低年齡組病毒載量為（574.24 ± 97.63）RUL/CO，高年齡組病毒載量為（472.48 ± 154.72）RUL/CO。低齡組、高年齡組與中齡組病毒載量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=26.219、7.686，P ＜0.001）。與中年齡組和高年齡組相比，低年齡組有著更高比例的低病毒載量病例數(shù)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （χ2=36.488、4.723，P ＜0.05），而高年齡組和中年齡組的病毒載量分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見表1。

表1 不同年齡段HPV 陽性女性患者中病毒載量程度分布［例（%）］

2.2 低、高年齡組患者病毒載量與宮頸活檢結(jié)果的相關(guān)分析 HC2 檢測及宮頸活檢結(jié)果表示，在低年齡組，即30 歲以下HPV 陽性患者中，低病毒載量患者共有520 例，其中CIN1 級病變例數(shù)為386 例，占74.2%；CIN2 ~ 3 級病變?yōu)?32 例， 占25.4%；Ca 病變例數(shù)為2 例，占0.4%。高病毒載量患者共有182例， 其中CIN1 級病變例數(shù)為110 例， 占60.4%；CIN2 ~ 3級病變?yōu)?8 例，占37.4%；Ca 病變例數(shù)為4 例，占2.2%?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果顯示在低年齡組內(nèi)，低病毒載量與高病毒載量宮頸病變類型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.604，P=0.02）。在高年齡組，即50歲以上HPV 陽性患者中，低病毒載量患者共有129例，其中CIN1 級病變例數(shù)為30 例，占23.2%；CIN2~ 3 級病變?yōu)?3 例， 占33.3%；Ca 病變例數(shù)為56例， 占43.4%。高病毒載量患者共有156 例， 其中CIN1 級病變例數(shù)為60 例，占38.5%；CIN2 ~ 3 級病變?yōu)?6 例， 占48.7%；Ca 病變例數(shù)為20 例，占12.8%?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果顯示在低年齡組內(nèi)，低病毒載量與高病毒載量宮頸病變類型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=33.951，P ＜0.001）。見表2。

表2 低年齡組、高年齡組HPV 陽性患者病毒載量與宮頸活檢結(jié)果的分析［例（%）］

3 討論

隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高，宮頸癌對女性健康的影響越來越受到關(guān)注。持續(xù)人類乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變的主要致病因子， 是宮頸癌的主要病因［9］。高危型HPV 的感染可能是一過性的，只有持續(xù)感染才會造成宮頸病變乃至癌癥，及早發(fā)現(xiàn)宮頸HPV 感染并及時治療宮頸上皮內(nèi)瘤變，能夠大幅度減少宮頸癌的發(fā)生［10-12］。因此在宮頸癌篩查工作過程中，及時的HPV 檢測是十分有意義的。在發(fā)達(dá)國家已經(jīng)全面普及高危型HPV 檢測， 我國近兩年才逐步意識到HPV 檢測的重要性， 缺乏HPV 檢測方法在我國人群的臨床參考數(shù)據(jù)，影響到了宮頸癌篩查工作的推廣和臨床應(yīng)用。

在臨床宮頸癌篩查工作中發(fā)現(xiàn)，不同年齡段的女性HPV 病毒攜帶量不同， 宮頸癌與CIN 的發(fā)病率有很大差異。這可能與HPV 病毒在不同年齡段女性中致病性不同有關(guān)，病毒載量在宮頸癌篩查過程中對于不同年齡患者的意義不同。本研究分析結(jié)果表明，30 歲以下及50 歲以上患者的平均HPV 病毒攜帶量與30 ～50 歲患者相比有顯著差異， 這可能是導(dǎo)致不同年齡女性宮頸癌與CIN 的發(fā)病率不同的原因之一。在30 歲以下人群中，低載量患者占比達(dá)到了74.1%，只有25.9%的高病毒載量攜帶者，而分析結(jié)果表明高載量患者宮頸上皮瘤變程度更嚴(yán)重。而在50 歲以上人群中，低病毒載量導(dǎo)致的宮頸上皮病變更嚴(yán)重。

以往研究分別研究了不同年齡段病毒載量差異以及不同病毒載量的致病性，本研究同時分析病毒載量在不同年齡段中所導(dǎo)致宮頸上皮瘤變的致病力，提供了更加細(xì)致的研究結(jié)果。提出30 歲以下大多數(shù)患者保持低病毒載量，而病毒載量越高意味著更高的病變程度。50 歲以上人群中則有著更多的高病毒載量患者。本研究結(jié)果顯示50 歲以上患者人群中低病毒載量導(dǎo)致更高的致病力，這與之前的研究有所沖突，既往研究普遍認(rèn)為在所有年齡段中高病毒載量導(dǎo)致更嚴(yán)重的病變，這可能與不同地區(qū)樣本收集以及對不同年齡患者數(shù)據(jù)分析方法有關(guān)，仍需后續(xù)對特定年齡患者進(jìn)行更加深入的針對性分析。

綜上所述， 在對低年齡患者進(jìn)行宮頸篩查時，應(yīng)加強(qiáng)對高病毒載量病例的關(guān)注，而對于高年齡患者進(jìn)行宮頸篩查時， 不能忽視病毒載量較低的患者，加強(qiáng)臨床宮頸篩查和診治的針對性。本研究為臨床宮頸篩查工作提供了數(shù)據(jù)指導(dǎo)，并為進(jìn)一步探索年齡因素在宮頸癌篩查中的影響提供了理論支持。