擬南芥AtGST8 的功能及其過表達(dá)植株對(duì)甲基紫精脅迫的響應(yīng)

王玲娟，魯帥，高聰，韓繽瑩，趙成磊，薛鵬輝，曹云英

（南通大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南通 226019）

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione transferase，GST）是一個(gè)蛋白質(zhì)超家族，包含多個(gè)基因類型，它們具有還原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）的結(jié)合域和催化結(jié)構(gòu)域，可催化GSH 與底物連接，形成水溶性產(chǎn)物，從而達(dá)到解毒的目的[1]。植物受到不良環(huán)境、病原微生物侵染、重金屬毒害等非生物脅迫時(shí)，細(xì)胞器容易受損，體內(nèi)的GST 會(huì)被誘導(dǎo)表達(dá)[2-4]，從而保護(hù)植物免受或減輕傷害。植物在生長發(fā)育過程中受到不利條件時(shí)會(huì)引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而破壞植物內(nèi)的氧化還原平衡，導(dǎo)致活性氧（reactive oxygen species，ROS）的積累[5]。植物主要通過酶促和非酶促兩大抗氧化系統(tǒng)及時(shí)清除ROS，調(diào)節(jié)氧化還原平衡，從而使植株免受傷害。谷胱甘肽和抗壞血酸（AsA）等低分子量化合物組成非酶促抗氧化系統(tǒng)，它們不僅可以直接與ROS 反應(yīng)，還可以作為一些抗氧化保護(hù)酶的底物去除體內(nèi)的ROS[6]。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、抗壞血酸過氧化物酶（ascorbate peroxidase，APX）和GST 等多種保護(hù)酶組成酶促抗氧化系統(tǒng)[7-8]。此外，一些GST 具有GSH-Px 活性，能夠?qū)溥^氧化物轉(zhuǎn)化為羥基醇類物質(zhì)，防止組織中的氫過氧化物降解形成對(duì)植物細(xì)胞有毒害作用的產(chǎn)物——乙醛衍生物[9]，從而抑制由氧化傷害引起的程序性細(xì)胞死亡[10]。

植物中GST 家族成員目前可分為10種，其中phi（GSTF）、tau（GSTU）和脫氫抗壞血酸還原酶等是植物所特有的[11]。tau 類在植物中成員最多[12]。擬南芥目前已經(jīng)鑒定了48 個(gè)GSTs 基因[13-14]，大多屬于phi 和tau 類[15]。研究表明GST 基因在發(fā)育和脅迫響應(yīng)中發(fā)揮重要的作用，據(jù)報(bào)道，過表達(dá)GST 能增加植物對(duì)低溫、鹽和除草劑的耐受性，轉(zhuǎn)基因植物的生長也發(fā)生了變化[16-17]。GST8 已從干旱脅迫的擬南芥中分離出來，根據(jù)序列相似性推測其屬于tau類，又稱為GSTU19[18]，但GST8 在擬南芥中的定位及組織中的表達(dá)情況目前尚不清楚。甲基紫精（methyl viologen，MV）又稱百草枯二氯化物，是一種觸殺性的除草劑[19]。有報(bào)道過表達(dá)GST8 可以提高擬南芥對(duì)鹽和干旱等脅迫的耐性，但對(duì)MV 的響應(yīng)及其機(jī)理仍不清晰。為此，本研究中首先構(gòu)建了該基因的綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）融合蛋白載體，確定其亞細(xì)胞定位；其次構(gòu)建了帶有該基因啟動(dòng)子的β-葡萄糖苷酸酶（beta glucuronidase，GUS）融合蛋白載體，運(yùn)用GUS 染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)，明確其在擬南芥組織中的表達(dá)；最后構(gòu)建了過表達(dá)AtGST8 載體并獲得了過表達(dá)AtGST8植株，然后通過生理測定、組織染色和基因表達(dá)分析，以明確該基因在擬南芥幼苗受到MV 處理后的作用，旨在為抗性材料的選育提供理論依據(jù)。

1 材料及方法

1.1 植物材料和生長條件

擬南芥種子先后經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精和體積分?jǐn)?shù)為20%的漂白劑消毒、無菌水洗滌，然后將其均勻鋪在含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的蔗糖和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.7%的瓊脂的1/2 MS 培養(yǎng)基上。在4 ℃冰箱中春化處理2 d 后移至光照培養(yǎng)箱（全友，南京）中生長，其中晝/夜光周期為14 h/10 h，溫度為22 ℃/20 ℃，濕度恒定為80%±5%。

1.2 亞細(xì)胞定位

AtGST8全長編碼序列（coding sequence，CDS）是從提取擬南芥植株中的總RNA（Total RNA Isolation System Kit，Promega）開始，再以逆轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，使用序列特異性引物（5'-CACCATGGCGA ACGAGGTGATTCTTCTT-3'和5'-TTACTCAGGT A CAAATTTCTTCCTGAGC-3'）擴(kuò)增而獲得。采用Gateway法將其先通過BP 反應(yīng)構(gòu)建到入門載體pENTR/DTOPO（pENTRTMDirectional TOPOCloning Kits）中，再通過LR 反應(yīng)（LR ClonaseTMⅡEnzyme Mix）將其構(gòu)建到過表達(dá)載體pMDC43（12 460 bp）中，獲得AtGST8基因的GFP 重組質(zhì)粒（AtGST8-GFP）。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101中，再將菌液注射到煙草下表皮，黑暗下培養(yǎng)3 d，最后通過激光共聚焦顯微鏡（Leica TCS SP8）觀察AtGST8在細(xì)胞中的定位情況。

1.3 組織表達(dá)分析

選擇野生型擬南芥Col-0植株1 月齡的葉片提取總DNA（DNA quick Plant System，Tiangen），使用特異性引物（5'-CACCGCCACGTAATACAGTGCGTA GGGT-3'和5'-CTGGAGAAGCAAAGGACTCTTGTT CC-3'）進(jìn)行PCR 擴(kuò)增帶有AtGST8基因的啟動(dòng)序列的產(chǎn)物。通過Gateway 法構(gòu)建AtGST8pro:GUS載體（方法同AtGST8-GFP），表達(dá)載體為pMDC163（12 833 bp）。將重組質(zhì)粒通過浸花轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因植株[20]，潮霉素篩選獲得帶有GUS 報(bào)告基因的陽性植株。將不同生長階段的陽性植株的各組織進(jìn)行GUS 染色[21]，所有染色均平行進(jìn)行3 次。同時(shí)通過熒光定量技術(shù)分析了野生型各組織中AtGST8的表達(dá)水平[22]。

1.4 過表達(dá)植株的獲得、鑒定及處理

以AtGST8cDNA 為模板，使用特異引物（序列同AtGST8-GFP），通過Gateway 法將AtGST8轉(zhuǎn)到表達(dá)載體pMDC32（11 752 bp）中，獲得帶有AtGST8基因的陽性過表達(dá)植株，以T2 代苗進(jìn)行鑒定并作MV處理，采用熒光定量PCR 技術(shù)進(jìn)行鑒定。將野生型Col-0及過表達(dá)AtGST8株系OE-24和OE-443 周齡的幼苗用含20 μmol/L MV 的MS 營養(yǎng)液澆灌，生理指標(biāo)和基因表達(dá)的分析采用處理3 d 后的幼苗來進(jìn)行。

1.5 生理指標(biāo)的測定

APX 酶液采用50 mmol/L、pH=7.0 的PBS 提取，酶活性測定參照文獻(xiàn)[29]的方法。CAT 和過氧化物酶（peroxidase，POD）的酶液采用50 mmol/L、pH=7.8 的PBS 來提取，活性測定參照文獻(xiàn)[24]的方法。采用WST 法測定SOD 活性，SOD 和GSH-Px 酶液的提取及測定參照試劑盒（建成，南京）來進(jìn)行。GST酶活的測定參照文獻(xiàn)[30]并作修改，采用pH=6.5的PBS 來提取酶液，反應(yīng)體系包括0.1 mL 酶液、0.8 mL濃度為10 mmol/L 的1-氯-2，4-二硝基苯（CDNB）、2 mL PBS 及0.1 mL 濃度為10 mmol/L 的GSH。將每分鐘每毫克蛋白質(zhì)樣品OD 減少或增加0.01 定義為CAT 或POD 的1 個(gè)活力單位（U）；將每小時(shí)每克鮮重樣品抑制NBT 光化還原50%所需的酶量定義為SOD 的1 個(gè)酶活單位（U）。

1.6 基因表達(dá)分析

AtGST8和保護(hù)酶系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)采用熒光定量技術(shù)來進(jìn)行。樣品經(jīng)液氮研磨，用TRIZOL（Invitrogen）法提取總RNA，用第一鏈cDNA 合成試劑盒（Roche）獲得cDNA。以ACT2（At3g18780）為內(nèi)參基因，參照文獻(xiàn)[22]的方法，通過熒光定量PCR 分析其基因表達(dá)水平，具體引物序列見表1。

表1 熒光定量表達(dá)分析用的引物序列Tab.1 Primer sequences for fluorescence quantitative expression analysis

1.7 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 軟件版本20.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，使用Duncan's 法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)（P＜0.05），使用OriginPro8 進(jìn)行圖表繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 AtGST8 基因的亞細(xì)胞定位

圖1 為AtGST8基因的亞細(xì)胞定位，從中可以看出細(xì)胞膜中有明顯的熒光信號(hào)，細(xì)胞核中也有少量信號(hào)，這表明AtGST8基因至少定位于細(xì)胞膜。

圖1 AtGST8 基因的亞細(xì)胞定位Fig. 1 Subcellular location of AtGST8 gene

2.2 AtGST8 基因在組織中的表達(dá)

2.2.1 GUS 組織表達(dá)分析

選取AtGST8pro:GUS 的轉(zhuǎn)基因植株T2 代進(jìn)行GUS 染色，分析AtGST8在組織中的表達(dá)情況（圖2）。從圖中可見，在轉(zhuǎn)AtGST8基因啟動(dòng)子區(qū)域的擬南芥的種皮和胚中均沒有發(fā)現(xiàn)藍(lán)色，表明該基因在上述兩個(gè)部位均未表達(dá)（圖2（a）和（b））；在7 日齡的幼苗中可以看到葉片及心葉都被染成了藍(lán)色，表明該基因在此部分表達(dá)較強(qiáng)（圖2（c））；根部的成熟區(qū)尤其根尖藍(lán)色較深，表明該基因表達(dá)顯著（圖2（d）和（e））。另外，在土壤中生長35 d 的擬南芥蓮座葉葉肉細(xì)胞（圖2（f））、莖（圖2（g））、柱頭和花（圖2（h））及果莢（圖2（i））中均發(fā)現(xiàn)AtGST8表達(dá)，且在蓮座葉中表達(dá)較弱，而在花和果莢中的表達(dá)與發(fā)育進(jìn)程相關(guān)。在花中的表達(dá)隨著開放程度增大而減弱，但是在果莢中，果莢越成熟，表達(dá)越明顯（圖2（h）和（i））。

圖2 AtGST8pro:GUS 在轉(zhuǎn)基因擬南芥中的表達(dá)Fig. 2 The expression patterns of the AtGST8pro:GUS in transgenic Arabidopsis

2.2.2 熒光定量分析AtGST8的表達(dá)

選取擬南芥野生型Col-0的葉、莖、花及果莢對(duì)不同器官中AtGST8基因進(jìn)行熒光定量表達(dá)分析。從圖3（a）中可以看出，AtGST8基因在果莢中表達(dá)量最高，葉片中最低。角果、花和莖的表達(dá)量分別比葉片增加了180%、100%和30%。同時(shí)，對(duì)獲得的4個(gè)過表達(dá)株系T2 代AtGST8基因的表達(dá)進(jìn)行了分析，各株系的表達(dá)量均顯著高于野生型（圖3（b））。

圖3 莖、葉、花和莢中AtGST8 基因的表達(dá)及過表達(dá)AtGST8 株系的鑒定Fig. 3 Expression of AtGST8 gene in stems，leaves，flowers and pods and identification of over-expressed AtGST8 lines

2.3 MV 脅迫對(duì)過表達(dá)AtGST8 植株MDA、和傷害程度的影響

圖4 MV 下擬南芥野生型和過表達(dá)AtGST8 植株中MDA 和產(chǎn)生速率的變化Fig. 4 Changes of MDA and production rate in wild-type and over-expressed AtGST8 plants of Arabidopsis under MV

圖5 MV 下擬南芥野生型和過表達(dá)AtGST8 植株幼苗組織的染色變化Fig. 5 Staining changes of wild-type and over-expressed AtGST8 plants in Arabidopsis seedlings under MV

2.4 MV 脅迫對(duì)過表達(dá)AtGST8 植株抗氧化物質(zhì)含量的影響

正常生長條件下，野生型Col-0和過表達(dá)AtGST8植株中的AsA 含量無顯著差異。但MV 處理顯著增加了所有材料中的AsA 含量，且野生型Col-0增幅小于過表達(dá)AtGST8植株（圖6（a））。與未處理相比，MV 處理后野生型Col-0的AsA 含量增加了34.3%，過表達(dá)AtGST8植株OE-24、OE-44則分別增加了42.3%和40.0%。與對(duì)照相比，MV 處理使野生型Col-0植株中GSH 含量顯著下降（圖6（b）），GSSG 含量則顯著增加（圖6（c）），GSH/GSSG 表現(xiàn)與GSH 一致（圖6（d））。與對(duì)照相比，過表達(dá)At-GST8植株經(jīng)MV 處理后的GSH、GSSG 及GSH/GSSG 差異均不顯著（圖6（b）—（d））。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，MV 脅迫下過表達(dá)AtGST8植株中AsA 含量及GSH/GSSG 比較高，有利于體內(nèi)活性氧的清除，從而保持較為正常的生理功能；而野生型Col-0植株中GSH/GSSG 比顯著下降，因而受到傷害較大。

圖6 MV 下擬南芥野生型和過表達(dá)AtGST8 植株中抗氧化物質(zhì)含量的變化Fig. 6 Changes of antioxidant content in wild-type and over-expressed AtGST8 plants of Arabidopsis under MV

2.5 MV 脅迫對(duì)過表達(dá)AtGST8 植株抗氧化保護(hù)酶活性的影響

SOD、POD 和CAT 是一類氧化脅迫保護(hù)酶，能及時(shí)清除體內(nèi)活性氧，從而保護(hù)植株免遭傷害。從圖7（a）—（c）中可見，MV 處理后，野生型Col-0和過表達(dá)AtGST8植株中相應(yīng)的POD、SOD 和CAT 活性均比對(duì)照顯著增加，其中POD 活性在MV 處理后所有材料增幅范圍為15.0%～22.3%，SOD 為14.4%～35.2%，CAT 為12.4%～21.4%。過表達(dá)AtGST8植株中，除POD 增幅稍低外，SOD 和CAT 活性增幅均高于野生型Col-0，這表明過表達(dá)AtGST8植株可能利用更多的SOD 將脅迫產(chǎn)生的活性氧轉(zhuǎn)變成H2O2，再利用CAT 來清除H2O2，從而減輕植株氧化損傷。

圖7 MV 下擬南芥野生型和過表達(dá)AtGST8植株中保護(hù)酶活性的變化Fig. 7 Changes of protective enzyme activity in wild-type and over-expressed AtGST8 plants of Arabidopsis under MV

APX 在抗壞血酸的轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要的作用。從圖7（d）中可看出，植株經(jīng)MV 處理后，擬南芥野生型Col-0和過表達(dá)AtGST8植株OE-24、OE-44中的APX 活性均顯著提高，增加幅度達(dá)46.3%～73.3%。GSH-Px 可以在H2O2的作用下將GSH 轉(zhuǎn)變成GSSG，從而減少H2O2的毒害。從圖7（e）可看出，正常生長條件和MV 脅迫下，過表達(dá)AtGST8植株中GSH-Px活性均稍高于野生型Col-0。MV 脅迫后，GSH-Px 活性野生型Col-0中增加了5%左右；過表達(dá)AtGST8植株OE-24、OE-44則分別增加了19.8%和16.6%，增幅明顯高于野生型Col-0。表明過表達(dá)AtGST8 植株可以通過增加植物體內(nèi)GSHPx 的活性，催化GSH 與H2O2作用，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的作用。

由圖7（f）可以看出，正常生長條件和MV 脅迫下，過表達(dá)AtGST8植株中的GST 活性均高于野生型Col-0。經(jīng)MV 處理后，與對(duì)照相比，過表達(dá)AtGST8植株OE-24、OE-44中GST 活性分別增加了16.2%和50.5%，處理前后GST 活性差異呈顯著水平。而野生型Col-0中的GST 活性僅增加了4.5%，與對(duì)照相比差異不顯著。

2.6 MV 脅迫對(duì)過表達(dá)AtGST8 植株活性氧保護(hù)酶相關(guān)基因表達(dá)的影響

對(duì)參與活性氧清除保護(hù)酶的相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行了分析（圖8）。與對(duì)照相比，MV 處理均使野生型Col-0中POD 基因PRX34、CAT 基因CAT1和APX基因SAPX表達(dá)明顯上調(diào)，而GST8的表達(dá)量則無明顯變化；過表達(dá)AtGST8植株OE-24和OE-44中的PRX34、CAT1、SAPX和GST8的表達(dá)量均上調(diào)，且達(dá)到顯著水平。表明在MV 處理下，可導(dǎo)致PRX34、CAT1、SAPX和GST8的上調(diào)，進(jìn)而促進(jìn)了保護(hù)酶活性的增加。

圖8 MV 下擬南芥野生型和過表達(dá)AtGST8 植株中保護(hù)酶相關(guān)基因表達(dá)的變化Fig. 8 Changes of protective enzyme relative gene in wild-type and over-expressed AtGST8 plants of Arabidopsis under MV

3 討論

在植物中，多種脅迫可誘導(dǎo)GST 表達(dá)來減輕氧化損傷對(duì)植物的傷害，從而增強(qiáng)植物的抗性[31]。如高溫、外源H2O2、HgCl2、水楊酸和百草枯條件下會(huì)使組織中GST上調(diào)表達(dá)[32]，本研究中擬南芥野生型Col-0經(jīng)MV 處理后GST表達(dá)沒有顯著變化，但過表達(dá)AtGST8植株卻顯著增加（圖8（d）），推測其可能是造成過表達(dá)AtGST8植株受傷害較小、野生型Col-0傷害較大的主要原因（圖4 和圖5）。也有研究表明，外界條件造成GST 的變化可能與GSTs 的種類有關(guān)，如在大豆和玉米中觀察到雙氯胺和乙醇處理誘導(dǎo)tau 類GST 的表達(dá)量上調(diào)，但對(duì)phi 類GST 的影響卻相反[13]。本研究中也發(fā)現(xiàn)MV 處理對(duì)AtGST8（GSTU19）表達(dá)量的影響與tau 類GST 一致（圖8（d））。此外，使用物質(zhì)的種類及濃度對(duì)GSTs表達(dá)的影響也有差異。與phi 的GSTF7和GSTF8相比，在水楊酸處理下，擬南芥中tau 類GSTU19和GSTU7更容易被誘導(dǎo)表達(dá)，且在低濃度（0.1 mmol/L）下效應(yīng)更顯著，而phi 類GSTF在高濃度（1 mmol/L）下表達(dá)量會(huì)高些[7]。在MV 處理下，低濃度（0.01～0.03 mmol/L）下過表達(dá)棉花GST的轉(zhuǎn)基因煙草中其表達(dá)量增加，但在高濃度0.05 mmol/L 時(shí)增加更明顯[33]。本研究中采用20 μmol/L 的MV 處理則是顯著增加了AtGST8的表達(dá)（圖8（d））。表明處理物質(zhì)的種類及濃度也是影響植物中GST 的重要原因。

有多個(gè)研究結(jié)果表明，過表達(dá)GST基因能夠提高植物的抗逆性，如檉柳中過表達(dá)基因GSTZ1可明顯提高轉(zhuǎn)基因擬南芥對(duì)鹽和干旱的耐受性[34]。與生長素結(jié)合蛋白基因Atpm24編碼序列相同的GST基因過表達(dá)明顯增強(qiáng)擬南芥對(duì)紫外輻射損傷作用的耐性[35]。水稻基因OsGSTl2轉(zhuǎn)入到擬南芥后，植株能表現(xiàn)對(duì)重金屬的高耐受性[3]。轉(zhuǎn)基因石竹過表達(dá)GST后通過合成螯合素，可將多余的重金屬銅離子隔離和解毒，從而提高對(duì)銅離子的耐性[36]。也有研究發(fā)現(xiàn)，GSTU19過表達(dá)通過增加幼苗的存活率、葉片的保水率從而提高擬南芥對(duì)鹽、干旱脅迫的耐受性，加速了種子萌發(fā)過程中子葉的生長，提高了擬南芥對(duì)低濃度MV（小于3 μmol/L）脅迫的耐性[11]。AtGSTF8和AtGSTU19突變體在鹽脅迫下和H2O2含量增加而提升了其對(duì)鹽的敏感性[37]。本研究中也構(gòu)建了過表達(dá)載體，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)AtGST8可以減少膜脂過氧化產(chǎn)物MDA 的積累和超氧陰離子的產(chǎn)生（圖4 和圖5），提高了擬南芥幼苗對(duì)高濃度MV（20 μmol/L）的耐性。

GST含量增加能幫助植物維持體內(nèi)氧化還原的穩(wěn)態(tài)，從而保護(hù)植株免受氧化損傷[31]。植物體內(nèi)之所以能夠維持氧化還原穩(wěn)態(tài)，其重要原因是體內(nèi)活性氧產(chǎn)生與清除保持平衡。AsA 和GSH 作為重要組成部分，在非酶促系統(tǒng)中參與活性氧清除，有研究發(fā)現(xiàn)，野生型幼苗可能主要通過AsA 依賴的途徑來完成[38]，另一方面，谷胱甘肽依賴途徑導(dǎo)致GSSG積累的增加，可能又會(huì)降低AsA 的利用率。還有研究發(fā)現(xiàn)，GSH/GSSG 的比值對(duì)植物逆境響應(yīng)有重要影響[39]。本研究中發(fā)現(xiàn)所有供試材料經(jīng)MV 處理后AsA 含量均顯著增加，但過表達(dá)AtGST8植株增加更顯著。MV 處理使野生型GSH 明顯下降、GSSG明顯上升，導(dǎo)致GSH/GSSG 明顯下降，但過表達(dá)At-GST8植株則變化不明顯（圖6），表明較低的GSH/GSSG 及AsA 的增加較少是造成擬南芥野生型Col-0活性氧增加的重要原因。此外，植物在遭到逆境時(shí)，可通過抗氧化酶來調(diào)節(jié)活性氧水平[40]。在本研究中，MV 處理增加了所有植株中的SOD、POD、CAT、APX活性，但過表達(dá)AtGST8植株增幅大于野生型Col-0；顯著增加了過表達(dá)AtGST8植株中GSH-Px 和GST 活性，而野生型Col-0變化不明顯（圖7）。同時(shí)也對(duì)保護(hù)酶中相關(guān)基因的表達(dá)水平進(jìn)行了分析（圖8），其變化趨勢與保護(hù)酶活性一致。表明過表達(dá)AtGST8植株SOD 活性較高，能夠?qū)V 脅迫產(chǎn)生的過多活性氧自由基轉(zhuǎn)變成H2O2，利用CAT 進(jìn)一步清除H2O2，或利用更多的GSH-Px 及GST 催化GSH 與H2O2反應(yīng)，從而達(dá)到降低植株的氧化損傷的目的。

4 結(jié)論

利用轉(zhuǎn)基因植株及GUS 染色發(fā)現(xiàn)該基因在幼苗、根、花中表達(dá)較強(qiáng)，莖和蓮座葉中較弱，花和果莢中的表達(dá)隨著發(fā)育進(jìn)程而變化，花中隨著花期進(jìn)程而下降，果莢中卻隨著生育進(jìn)程而不斷上升。擬南芥AtGST8至少定位于細(xì)胞膜上。熒光定量分析該基因在野生型擬南芥不同器官中表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)果莢中最高，葉片中最低。過表達(dá)AtGST8植株下維持較低的MDA 和O2·-與較高的AsA 含量及GSH/GSSG 比、抗氧化保護(hù)酶活性（SOD、POD、CAT、APX、GSH-Px 和GST）及轉(zhuǎn)錄水平，是植株在MV 脅迫下傷害較輕的重要原因，表明擬南芥過表達(dá)AtGST8通過提高活性氧的清除能力從而減輕了MV 脅迫對(duì)植株的損傷。