氟啶胺在小白菜中的殘留行為及膳食攝入風(fēng)險評估

李春勇，呂 瑩，金 靜，王偉榮，王 霞，秦 曙

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測中心 太原 030031）

氟啶胺（Fluazinam）是一種2，6-二硝基苯胺類廣譜殺菌劑，內(nèi)吸活性低，殘效長[1]，對馬鈴薯晚疫病、番茄早疫病、辣椒炭疽病、大白菜根腫病等有較好的防治效果[2-4]。雖然氟啶胺已在水稻、大白菜、辣椒、馬鈴薯等作物上登記[5]，但因缺乏小白菜在良好農(nóng)業(yè)規(guī)范（GAP）條件下進(jìn)行的規(guī)范殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)，無法進(jìn)行膳食暴露評估，氟啶胺在小白菜中的最大殘留限量（MRL）值尚未制定。

國內(nèi)外關(guān)于氟啶胺的研究主要集中在檢測方法、殘留行為、膳食風(fēng)險評估、加工對殘留量的影響等方面。目前已報道的檢測方法主要有氟啶胺在馬鈴薯[6-8]、人參[9]中的QuEChERS 前處理-超高效液相色譜三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法，Li 等[10]建立了測定6 種蔬菜（卷心菜、黃瓜、番茄、白菜、菠菜和西葫蘆）和4 種水果（蘋果、葡萄、柑橘、草莓）中氟啶胺的QuEChERS-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，李玉霞[11]、龔會琴等[12]利用高效液相法對氟啶胺進(jìn)行了分離和定量分析。馬俊[13]、劉亞娟等[14]報道了植物源性食品及人參中檢測氟啶胺的氣相色譜法。Guo Yuyu 等[15]、Li 等[16]采用納米簇?zé)晒馓结槣y定了氟啶胺的含量。Sahu 等[17]用紫外可見分光光度計和傅里葉變換紅外光譜檢測蔬菜樣品中氟啶胺類殺蟲劑。已有學(xué)者對氟啶胺殘留行為及膳食風(fēng)險評估開展了試驗(yàn)研究。葉倩等[18]報道了氟啶胺在菊花中的殘留消解動態(tài)及其風(fēng)險評估；李文希等[19]報道了氟啶胺在三七中的降解行為及安全性評價；李如美等[20]報道了氟啶胺在馬鈴薯和土壤中的殘留及安全使用評價；靖俊杰等[21]利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析氟啶胺在冬瓜上的殘留行為；Zhao 等[22]報道了氟啶胺在柑橘中的消解及膳食攝入風(fēng)險評估?？迪见惖萚23]研究發(fā)現(xiàn)，在柑橘汁加工過程中，榨汁是降低氟啶胺殘留最有效的過程，殘留加工因子為5.217～5.669。Noh 等[24]采用LC-MS/MS 法分析了氟啶胺在新鮮和加工柿中的消解和殘留規(guī)律。國內(nèi)外關(guān)于氟啶胺在小白菜中的殘留行為及膳食風(fēng)險評估未見報道。筆者的研究建立了QuEChERS 前處理與UPLC-MS/MS 相結(jié)合的提取凈化及殘留檢測方法，對小白菜中氟啶胺最終殘留量進(jìn)行了檢測，并對全國10 地的檢測結(jié)果進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險評估，以期為指導(dǎo)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全及制定殘留限量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)地及供試品種 供試物為500 g·L-1氟啶胺懸浮劑，從青島奧迪斯生物科技有限公司購買。移栽、施藥、采樣時間及品種：遼寧省遼陽市，2020 年5 月16 日移栽，2020 年5 月19 日施藥，2020 年6 月12 日采樣，綠秀，由沈陽化工研究院有限公司安全評價中心提供；山西省太原市，2020 年6 月10 日移栽，2020 年6 月12 日施藥，2020 年7月13 日采樣，冬秀，由山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與檢測研究所提供；河北省石家莊市，2020年10 月15 日移栽，2020 年10 月17 日施藥，2020年11 月4 日采樣，津智30，由石家莊市博生環(huán)境科技有限公司提供；山東省濟(jì)南市，2020 年6 月28 日移栽，2020 年6 月29 日施藥，2020 年7 月16 日采樣，北京新3 號，由山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院提供；安徽省宿州市，2020 年5 月23 日移栽，2020 年5 月25 日施藥，2020 年6 月17 日采樣，精選上海青，由安徽燦留植保科技有限公司提供；江蘇省句容市，2020 年5 月11 日移栽，2020 年5 月14 日施藥，

2020 年5 月21 日采樣，上海青，由江蘇恒生檢測有限公司提供；湖南省長沙市，2020 年10 月17 日移栽，2020 年10 月19 日施藥，2020 年11 月6 日采樣，白玉，由湖南文譜檢測技術(shù)研究有限公司提供；廣西省南寧市，2020 年9 月5 日移栽，2020 年9 月7 日施藥，2020 年9 月26 日采樣，甜脆赤葉小白菜，由廣西大學(xué)農(nóng)藥與環(huán)境毒理研究所提供；貴州省貴陽市，2020 年10 月10 日移栽，2020 年10 月12 日施藥，2020 年11 月9 日采樣，遲白菜3 號，由貴州省無公害植物保護(hù)工程技術(shù)研究中心提供；海南省?？谑校?020 年6 月1 日移栽，2020 年6 月3日施藥，2020 年6 月25 日采樣，早皇京白菜，由海南特譜農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.1.2 試驗(yàn)儀器與試劑 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（沃特世I-Class XEVO TQ-S Micro）、刀式研磨儀（德國萊馳GM300）、離心機(jī)（艾本德5804 R、5824 R）、多管渦旋振蕩器（萊普特LPD2500）、天平（賽多利斯QUINTIX224-1CN、BS210S）、氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer 99.9%）、乙腈（TEDIA?色譜純）、甲酸（Fisher chemical Optima?色譜純）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計 按照《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[25]設(shè)置試驗(yàn)及對照區(qū)各50 m2，并設(shè)區(qū)間保護(hù)行。供試藥劑為500 g·L-1氟啶胺懸浮劑。按有效成分1500 g·hm-2施藥，噴藥時，去掉噴頭，噴淋小白菜根部，藥后立即補(bǔ)噴清水清洗葉面，對照區(qū)用等量清水處理，采用隨機(jī)法分別于收獲期、收獲期后3 d 采集不少于12 株（至少2 kg）生長正常且無病害的小白菜樣品。

1.2.2 樣品提取、凈化 小白菜樣品粉碎后稱取10.0 g（精確至0.1 g）于50 mL 離心管中，加入10 mL 乙腈后，加入5.0 g NaCl，于2500 r·min-1下渦旋振蕩10 min，8000 r·min-1離心3 min，取1.5 mL上清液加入盛有142.5 mg MgSO4、20 mg PSA、20 mg GCB 混合劑的2 mL 離心管中，2500 r·min-1渦旋2 min，5000 r·min-1離心2 min。上清液過0.22 μm 有機(jī)微孔濾膜后，取0.5 mL 上清液加入0.5 mL水，混勻，UPLC-MS/MS 測定。

1.2.3 檢測條件 色譜條件：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18色譜柱（50.0 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫35 ℃，進(jìn)樣量5.0 μL；流動相A 為0.1% 甲酸水溶液，B 為乙腈，梯度洗脫程序見表1，流速0.3 mL·min-1，此條件下氟啶胺的保留時間為2.83 min。

表1 梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式掃描；毛細(xì)管電壓3.0 kV；錐孔電壓28 V；離子源溫度150 ℃；去溶劑氣及錐孔反吹氣均為高純N2，去溶劑氣溫度400 ℃，碰撞氣為高純Ar，氟啶胺定量離子對463.0＞397.9，碰撞能16 eV；定性離子對463.0＞415.9，碰撞能20 eV。

1.2.4 溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 稱取0.010 g（精確至0.000 1 g）氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)品，溶于乙腈，配制成1000 mg·L-1氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18 ℃溫度下密封保存。將氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙腈稀釋，依次配制成100、10、1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，再以小白菜空白基質(zhì)提取液配制質(zhì)量濃度為0.005、0.010、0.020、0.050、0.100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.5 基質(zhì)效應(yīng)評價 筆者的研究采用相對響應(yīng)值法對基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評價[26]，公式為ME/%=（A/B）×100，式中ME 為基質(zhì)效應(yīng)，A 為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液響應(yīng)值，B 為乙腈中同濃度標(biāo)樣工作液響應(yīng)值，當(dāng)ME 為80%～120% 時為弱基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME 為50%～80% 或120%～150% 時為中等基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME≤50% 或≥150% 時為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)ME＜100%時表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，當(dāng)ME＞100% 時表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

1.2.6 添加回收率試驗(yàn) 在空白小白菜樣品中分別添加0.01、0.10 和5.00 mg·kg-1的氟啶胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，按照1.2.2 節(jié)的方法提取、凈化樣品，按1.2.3 節(jié)的條件進(jìn)行檢測，計算添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.7 長期膳食攝入風(fēng)險評估 根據(jù)《中國不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》[27]確定人群的膳食結(jié)構(gòu)和食品消費(fèi)量。如果國內(nèi)沒有足夠的膳食調(diào)查數(shù)據(jù)，則優(yōu)先參考世界衛(wèi)生組織全球環(huán)境監(jiān)測體系食品規(guī)劃（GEMS/Food）項目[28]推薦的聚類食物消費(fèi)量或膳食習(xí)慣相似的國家及其他國家的膳食結(jié)構(gòu)和食品消費(fèi)量，或者參考有關(guān)報道的權(quán)威數(shù)據(jù)。其次，根據(jù)規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（STMR/STMR·P）或最大殘留限量（MRL）計算某種農(nóng)藥國家估算每日攝入量（NEDI）[27]，依據(jù)膳食風(fēng)險評估數(shù)據(jù)推薦合適的MRL 值[29]。計算公式如下[30-32]：

式中，STMRi：農(nóng)藥在某一食品中規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；STMR·Pi：用加工因子校正的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值；Fi：一般人群某一食品的消費(fèi)量；bw：人體重量，中國人群平均體重以63 kg 計；RQ：風(fēng)險概率，當(dāng)RQ≤1 時，可認(rèn)為殘留量對一般人群不會構(gòu)成不可接受的風(fēng)險，數(shù)值越小，風(fēng)險越低；ADI：為該農(nóng)藥的每日允許攝入量。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)評價

在0.005 mg·kg-1時，ME 為42.9%，表現(xiàn)為強(qiáng)基質(zhì)抑制效應(yīng)；在0.050 mg·kg-1時，ME 為55.5%，表現(xiàn)為中等基質(zhì)抑制效應(yīng)，需要采用基質(zhì)匹配標(biāo)液法補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.2 方法有效性評價

在0.005～0.500 mg·kg-1范圍內(nèi)，氟啶胺儀器的響應(yīng)值y（峰面積）與質(zhì)量濃度x（μg·mL-1）呈線形相關(guān)：y=2 000 000x+15 687，R2=0.992 8，氟啶胺定量限為0.01 mg·kg-1。由表2 可知，在0.01、0.10 和5.00 mg·kg-13 個添加水平下，氟啶胺在小白菜中的平均回收率在105%～108%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在1%～7%，符合農(nóng)藥殘留檢測要求。

表2 氟啶胺在小白菜樣品中的回收率

2.3 最終殘留量試驗(yàn)

由表3 可知，綜觀10 地的最終殘留試驗(yàn)，以有效成分1500 g·hm-2施藥1 次，收獲期小白菜中氟啶胺的殘留量在＜0.010～0.570 mg·kg-1，STMR 為0.010 mg·kg-1，最高殘留量（HR）為0.570 mg·kg-1；收獲期后3 d 小白菜中氟啶胺的殘留量為＜0.010～0.380 mg·kg-1，STMR 為0.010 mg·kg-1，HR 為0.380 mg·kg-1?？梢姡斋@期后3 d 小白菜中氟啶胺最高殘留量低于收獲期。江蘇句容的殘留量較其他點(diǎn)偏高一些，可能是收獲期采收間隔較短所致（遼寧24 d、山西31 d、河北18 d、山東17 d、安徽23 d、江蘇7 d、湖南18 d、廣西19 d、貴州28 d 和海南22 d）。

2.4 長期膳食攝入風(fēng)險評估

長期膳食攝入風(fēng)險評估基于中國居民營養(yǎng)與健康狀況監(jiān)測調(diào)查數(shù)據(jù)，采用STMR 或MRL 值計算NEDI。由于我國及CAC 均未制定氟啶胺的ARfD值，因此，筆者的研究僅對氟啶胺在小白菜中的長期膳食攝入風(fēng)險進(jìn)行評估，將以在臨界良好農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)范（cGAP）條件下獲得的小白菜中氟啶胺的STMR 值作為深色蔬菜的參考限量，按有效成分1500 g·hm2施藥1 次，收獲時的STMR 值為0.010 mg·kg-1，其他登記作物的STMR 值來源于《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》制定文本的編制說明。評估結(jié)果（表4）顯示，由STMR 值計算的膳食攝入量為0.122 900 mg，對應(yīng)的風(fēng)險商為19.5%。因此，氟啶胺在小白菜中的殘留量對我國一般人群健康不會產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險。

表4 氟啶胺的長期膳食攝入風(fēng)險評估

3 討論與結(jié)論

目前，關(guān)于氟啶胺檢測方法及殘留行為研究主要有液相色譜法[11]、氣相色譜法[13-14]、紅外光譜法[17]及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[6-10]，其中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有保留時間短、較高的重現(xiàn)性及準(zhǔn)確度，廣泛運(yùn)用于中藥材[9，19]、蔬菜[8]、水果[10]中氟啶胺含量的檢測，尚未有氟啶胺在小白菜中殘留量的檢測方法報道。筆者的研究采用10 mL 乙腈作為前處理提取溶劑，代替了常規(guī)QuEChERS 方法中二氯甲烷[33]、正己烷[20]等提取溶劑，有機(jī)溶劑用量少[6]，毒性低。固相萃取劑選擇NaCl，替代了常見的無水MgSO4、檸檬酸鈉等混合萃取劑[7]，有利于降低試驗(yàn)成本。在凈化過程中，渦旋、離心時間短，有助于提高試驗(yàn)效率。氟啶胺在葉菜中的殘留行為報道較為少見，較多的報道集中于添加回收檢測方法研究方面。由筆者研究的殘留結(jié)果可知，在小白菜采收期氟啶胺殘留量仍有檢出現(xiàn)象，收獲期的殘留量整體高于收獲后3 d 的殘留量，隨著采收期的延長，氟啶胺部分降解，小白菜的生長也會對殘留量有一定的稀釋作用。因試驗(yàn)時間、作物品種不同，在采收期大致相同時，河北（18 d）、山東（17 d）、湖南（18 d）、廣西（19 d）的殘留量也有差異，說明最終殘留量受溫度、作物品種的影響較大，小白菜作為常見的蔬菜品種，探索其殘留消解規(guī)律，對保證農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要意義。

根據(jù)最終殘留量進(jìn)行膳食攝入風(fēng)險評估，氟啶胺在小白菜中的殘留中值為0.010 mg·kg-1，ADI 值為0.01 mg·kg-1bw，普通人群的國家估算每日攝入量為0.12 mg，占日允許攝入量的19.5%，表明按有效成分1500 g·hm-2劑量在移栽苗或間苗3 d 內(nèi)噴淋（去掉噴頭）小白菜根部，施藥1 次，藥后立即補(bǔ)噴清水，氟啶胺在小白菜中的殘留不會對一般人群健康造成不可接受的風(fēng)險。按照風(fēng)險評估結(jié)果推薦最大殘留限量（MRL）值為2 mg·kg-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于GB 2763－2021 中葉菜類蔬菜的MRL 值（菜薹30 mg·kg-1、蕹菜10 mg·kg-1、葉芥菜20 mg·kg-1、蕪菁葉20 mg·kg-1）。因小白菜在實(shí)際生產(chǎn)中無固定的采收間隔期，會增加膳食攝入風(fēng)險，目前，因缺乏相關(guān)毒理學(xué)研究，JMPR、CAC 等均未制定氟啶胺的急性參考劑量（ARfD）值。因此，不斷完善相應(yīng)數(shù)據(jù)，對精確評估膳食攝入風(fēng)險及進(jìn)一步推薦合理MRL 值具有指導(dǎo)和現(xiàn)實(shí)意義。