豬圓環(huán)病毒病血清學(xué)調(diào)查研究*

蔡元慶，張擁軍，趙云龍，徐學(xué)栓，黃紅娟，張弦，楊文剛，周玉東，王春偉，盛濤*

（1.第七師胡楊河市畜牧獸醫(yī)站，新疆 胡楊河 834034；2.第七師一二七團(tuán)農(nóng)業(yè)發(fā)展中心；3.第七師一二四團(tuán)農(nóng)業(yè)發(fā)展中心；4.第七師一二六團(tuán)農(nóng)業(yè)發(fā)展中心；5.第七師一三一團(tuán)農(nóng)業(yè)發(fā)展中心）

豬圓環(huán)病毒病（Porcine Circovirus Disease，PCVD）是由豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）感染引起的一種免疫抑制性疾病。健康豬感染豬圓環(huán)病毒會(huì)抑制機(jī)體的免疫反應(yīng)，從而引發(fā)不同階段豬發(fā)生多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬呼吸道疾病綜合征、腸炎、亞臨床感染、繁殖障礙性疾病、豬皮炎腎病綜合征等不同病癥[1]。自2001年我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒以來(lái)，該病呈逐年增加趨勢(shì)，嚴(yán)重影響著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，給養(yǎng)豬業(yè)造成較大經(jīng)濟(jì)損失。為掌握第七師胡楊河市轄區(qū)豬圓環(huán)病毒病感染情況，2021年采集轄區(qū)內(nèi)39個(gè)豬場(chǎng)共384份血清開(kāi)展豬圓環(huán)病毒病抗體檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品

采集第七師胡楊河市39個(gè)豬場(chǎng)育肥豬血液384份，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，取上層血清分裝于Ep管中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試驗(yàn)試劑

豬圓環(huán)病毒2型抗體酶免檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：PCV20210517E。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 檢測(cè)方法

使用豬圓環(huán)病毒2型抗體酶免檢測(cè)試劑盒，按照試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行，具體步驟：（1）在反應(yīng)板上標(biāo)記樣品、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照位置，并做好記錄。配置洗滌液，濃縮洗滌液20倍稀釋。（2）分別在相應(yīng)孔中按100 μL/孔加入陰性對(duì)照（2孔）和陽(yáng)性對(duì)照（2孔）原液。在待檢樣品孔加入80 μL樣品稀釋液和20 μL待檢樣品，振蕩混勻，封膜，37 ℃孵育30 min。（3）取出反應(yīng)板，揭掉封膜，倒掉各孔中液體，拍凈。每孔加滿洗滌液，靜置30 s，重復(fù)洗滌5次，最后在吸水紙上拍凈。（4）每孔加入酶結(jié)合物液100 μL，貼上封膜，37 ℃孵育30 min。（5）再取出反應(yīng)板，揭掉封膜，倒掉各孔中液體，拍凈。每孔加滿洗滌液，靜置30 s，重復(fù)洗滌5次，最后在吸水紙上拍凈。（6）每孔加入底物液A50 μL，再加入底物液B50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。（7）每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩混勻，酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD450值。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

兩孔陰性對(duì)照OD450平均值≤0.15，兩孔陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值≥0.60，試驗(yàn)成立；臨界值=陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值×0.25；被檢樣品OD450值＜臨界值，為豬圓環(huán)病毒2型抗體陰性，被檢樣品OD450值≥臨界值，為豬圓環(huán)病毒2型抗體陽(yáng)性。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 對(duì)照組結(jié)果

陰性對(duì)照OD450平均值=（OD1+OD2）/2=（0.049+0.056）/2=0.052 5。

陽(yáng)性對(duì)照OD450平均值=（OD3+OD4）/2=（1.598+1.665）/2=1.631 5。

試驗(yàn)結(jié)果判定成立。被檢樣品OD450值≥臨界值=1.631 5×0.25=0.407 9，為豬圓環(huán)病毒2型抗體陽(yáng)性。

2.2 檢測(cè)結(jié)果（表1）

表1 豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 免疫豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)35個(gè)免疫豬場(chǎng)的340份血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)322份，陽(yáng)性率94.7%，高于國(guó)家70%標(biāo)準(zhǔn)，免疫效果良好。

2.3.2 未免疫豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)4個(gè)未免疫豬場(chǎng)的44份血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，陽(yáng)性數(shù)44份，陽(yáng)性率100%，說(shuō)明豬群存在豬圓環(huán)病毒感染。

3 討論

3.1 免疫豬場(chǎng)

35個(gè)免疫豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率94.70%，說(shuō)明豬場(chǎng)對(duì)豬圓環(huán)病毒病的重視程度很高，選用高效的疫苗，并按照免疫程序免疫，取得了良好的免疫效果。

3.2 未免疫豬場(chǎng)

4個(gè)未免疫豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率100%，表明豬圓環(huán)病毒病已在本轄區(qū)流行，對(duì)轄區(qū)的養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展造成了較大影響。因此豬場(chǎng)應(yīng)掌握本場(chǎng)豬圓環(huán)病毒感染情況，選用高效豬圓環(huán)病毒病疫苗，將豬圓環(huán)病毒病的免疫列入本場(chǎng)免疫程序，同時(shí)加強(qiáng)抗體監(jiān)測(cè)，逐步淘汰帶毒豬，建立健康豬群。

4 綜合防控

豬圓環(huán)病毒病目前沒(méi)有行之有效的治療方法和藥物，豬場(chǎng)應(yīng)將豬圓環(huán)病毒病免疫列入到本場(chǎng)的免疫程序，14日齡豬進(jìn)行第一次免疫接種，感染嚴(yán)重豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)免疫1次，臨產(chǎn)母豬在產(chǎn)前1個(gè)月加強(qiáng)免疫1次。免疫豬群應(yīng)定期開(kāi)展抗體檢測(cè)，對(duì)抗體不達(dá)標(biāo)豬群進(jìn)行加強(qiáng)免疫，確保疫苗對(duì)豬群的有效保護(hù)。同時(shí)，加強(qiáng)豬場(chǎng)豬瘟、豬藍(lán)耳等免疫抑制病的基礎(chǔ)免疫工作，提升豬圓環(huán)病毒病的免疫效果[2]。

飼養(yǎng)管理方面。一是提高豬群飼料的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和微量元素等水平，增強(qiáng)豬群的免疫力和抵抗力；二是要建立完整的生物安全體系，對(duì)進(jìn)出場(chǎng)的人、車(chē)、物嚴(yán)格管控，嚴(yán)防外部感染，各生產(chǎn)單元進(jìn)行有效物理隔離，以防交叉感染；三是同批次豬全進(jìn)全出，避免將不同日齡的豬混群飼養(yǎng)，從而減少豬群之間接觸感染機(jī)會(huì)；四是降低飼養(yǎng)密度，圈舍保持通風(fēng)，將清洗消毒工作貫穿于養(yǎng)豬生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，降低豬場(chǎng)病原微生物，減少或杜絕豬群感染風(fēng)險(xiǎn)。