適用于設(shè)施化栽培榆黃蘑菌株品種的篩選

李馨穎，孟子尋，于德威，姜婉竹，徐濟責(zé)，唐玉琴

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院農(nóng)學(xué)院，吉林 132101）

榆黃蘑（Pleurotus citrinopileatusSing）屬擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina），蘑菇綱（Hymenomycetes），蘑菇目（Agaricales），側(cè)耳科（Pleurotaceae），側(cè)耳屬（Pleurotus），又稱為金頂側(cè)耳或黃金菇[1]。榆黃蘑廣泛分布于我國吉林、遼寧、黑龍江等地區(qū)及國外東南亞、歐洲、北美洲等地[2]。榆黃蘑夏秋季生長在闊葉倒木或者枯立木上，是中高溫型菌類[3]。榆黃蘑具有豐富的遺傳多樣性，同時具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖、降血脂等功效，具有很高的營養(yǎng)價值[4-6]。

榆黃蘑生長力旺盛，對環(huán)境適應(yīng)性強，栽培周期短，栽培范圍廣泛，產(chǎn)出比投入高，適合生產(chǎn)和栽培，可進行大規(guī)模的設(shè)施化栽培，具有廣闊的發(fā)展前景[7]。但榆黃蘑設(shè)施化栽培技術(shù)以及適于設(shè)施化栽培菌株篩選不夠成熟。我國榆黃蘑人工栽培始于20世紀70年代，根據(jù)環(huán)境條件不同，采用的栽培方式有所不同[8]。吉林省已選育“旗金1號”“旗金2號”“旗金3號”“蕈谷2號”“吉金1號”“旌旗1號”等榆黃蘑品種，但生產(chǎn)中所使用的菌種仍以野生菌株馴化為主。由于技術(shù)水平不足、生產(chǎn)方式落后等，導(dǎo)致產(chǎn)量與品質(zhì)無法得到保證[9]。課題組近年在榆黃蘑的種質(zhì)資源采集、鑒定、栽培等方面進行了大量研究，本研究在此基礎(chǔ)上，篩選出8株榆黃蘑菌株。在設(shè)施化栽培的條件下，參照DUS測試指南，以層架式栽培方法進行出菇試驗[10]。通過比較每叢子實體數(shù)目、菌蓋大小、菌蓋厚度、菌蓋凹陷程度和菌柄直徑、菌柄長度、原基出現(xiàn)時間、第一潮菇采收時間、產(chǎn)量等農(nóng)藝性狀，篩選出商品性好、整齊度高、生長周期短、產(chǎn)量高適用于設(shè)施化生產(chǎn)的榆黃蘑菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 供試榆黃蘑菌株分別為22PC-1、22PC-2、22PC-4、22PC-8、22PC-11、32PC-13、52PC-14、22PC-20，供試菌株均來源于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院菌物資源開發(fā)與利用實驗室。

1.1.2 供試儀器 BJ-CD SERIEC型超凈工作臺（重慶捷倫科技公司），IN55型恒溫培養(yǎng)箱（昆明倍捷科技有限公司），MLS-3781L型高壓蒸汽滅菌鍋（上海五相儀器儀表有限公司），DW-FL270型冰箱（重慶捷倫科技公司），DHG-9920A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.3 供試培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL、pH自然。麥粒培養(yǎng)基：麥粒加水煮至麥粒膨脹未破損且無白心后，撈出瀝干水分，即可裝瓶、滅菌。栽培種培養(yǎng)基：78%木屑、20%麩皮、1%石灰、1%葡萄糖。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌袋制備及接種 按照栽培種培養(yǎng)基配方制作菌袋，栽培袋規(guī)格長28 cm、寬14 cm，高壓滅菌后進行冷卻接種，每個菌株10袋，重復(fù)3次，具體操作方法參照學(xué)者楊琳發(fā)表的《榆黃蘑高產(chǎn)栽培技術(shù)》[11]。

1.2.2 發(fā)菌管理 將完成接種的栽培袋移入發(fā)菌室，層架排放，注意通風(fēng)，及時查看有無雜菌污染并進行處理[8]。

1.2.3 出菇管理 菌絲長至滿袋后移入出菇室，隨機排列并給予適當(dāng)?shù)纳⑸涔?，出菇室溫度保持?0 ℃，空氣相對濕度保持在95%，每1 h灑水一次，適時通風(fēng)，采用單側(cè)開口的出菇方式[12]。

1.2.4 采收管理 榆黃蘑菌蓋即將展開并且菌蓋邊緣微微內(nèi)卷時即可采收?？墒褂眉舻恫墒?，或用手握住子實體菌柄基部輕輕旋下，采收后的子實體需進行料面清理。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel軟件統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)，采用SPSS 26.0軟件進行相關(guān)性分析和顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株真實性鑒定

采用對峙培養(yǎng)法鑒定菌株的真實性，具體表現(xiàn)為拮抗反應(yīng)，當(dāng)菌株之間產(chǎn)生拮抗線時，表明供試菌株之間存在生理特性的差異，即真實菌株。8株供試菌株兩兩對峙培養(yǎng)，共獲得28個組合（見表1）。由圖1可知，菌株22PC-2和32PC-13在培養(yǎng)基中產(chǎn)生拮抗線的正反面，表明2株供試菌株之存在差異。除菌株22PC-2和32PC-13，其余組合能夠產(chǎn)生拮抗線，表明8株供試菌株之間均存在差異，可用于后續(xù)的品種比較試驗。

圖1 22PC-2與32PC-13菌株間拮抗反應(yīng)

表1 供試菌株的拮抗反應(yīng)

注：“+”表示發(fā)生拮抗反應(yīng)。

2.2 生育期調(diào)查

設(shè)施化生產(chǎn)過程中，生產(chǎn)周期是影響企業(yè)收益的重要因素之一。由圖2可知，供試8株菌株，菌株22PC-2出菇周期最短，為14 d，其次為菌株22PC-1、32PC-13、52PC-14、22PC-20，出菇周期均為17 d；菌株22PC-4、22PC-8、22PC-11出菇周期最長，均為18 d。

圖2 供試菌株的生育期調(diào)查

2.3 表型性狀統(tǒng)計分析

8株供試菌株性狀統(tǒng)計分析如表2所示，供試菌株的變異系數(shù)在22%～47%，其中菌蓋厚度的變異范圍最小，為22%；菌蓋凹陷的變異范圍最大，為47%。

表2 供試菌株的表型性狀統(tǒng)計分析

2.4 相關(guān)性分析

由表3可知，對供試菌株的8個農(nóng)藝性狀進行相關(guān)性分析，結(jié)果表明每叢子實體數(shù)目與菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌蓋凹陷、菌柄直徑呈負相關(guān)，與菌蓋顏色、菌柄長度、產(chǎn)量呈正相關(guān)。菌蓋直徑與菌柄長度、產(chǎn)量呈負相關(guān)，與菌蓋厚度、菌蓋凹陷、菌蓋顏色、菌柄直徑呈正相關(guān)。菌蓋厚度與菌蓋顏色、菌柄長度呈負相關(guān)，與菌蓋凹陷、菌柄直徑、產(chǎn)量呈正相關(guān)。菌蓋凹陷與菌柄長度、產(chǎn)量呈負相關(guān)，與菌蓋顏色、菌柄直徑呈正相關(guān)。菌柄長度與菌柄直徑、產(chǎn)量呈正相關(guān)。菌柄直徑與產(chǎn)量呈正相關(guān)。菌柄長度與產(chǎn)量呈顯著正相關(guān)，即菌柄越長產(chǎn)量越高。增加榆黃蘑菌柄長度，能夠提高其產(chǎn)量，可為榆黃蘑育種工作提供參考價值。

表3 供試菌株的相關(guān)性分析

2.5 優(yōu)良菌株篩選

由表4可知，每叢子實體數(shù)目方面，菌株22PC-1、22PC-2、22PC-8、22PC-20每叢子實體數(shù)目較多，為25～27。菌蓋直徑方面，菌株22PC-4和22PC-20菌蓋直徑較大，達到5.19 cm，其次為菌株22PC-2，為4.53 cm，菌株52PC-14菌蓋直徑最小，為3.51 cm。菌蓋厚度方面，菌株22PC-20菌蓋厚度較大，達到0.52cm，其次為菌株22PC-4和32PC-13，為0.51 cm，菌株22PC-8菌蓋厚度最小，為0.45cm。菌蓋凹陷方面，菌株22PC-4凹陷程度最大，達到4.03 cm，菌株32PC-13凹陷程度最小，為1.49 cm。菌蓋邊緣波狀方面，菌株22PC-1、22PC-4、22PC-11、32PC-13、22PC-20菌蓋邊緣有波狀，其余菌株菌蓋邊緣無波狀。菌蓋顏色方面，菌株22PC-8顏色淺黃（賦值為1），菌株22PC-1、22PC-2、22PC-4顏色黃（賦值為2）。菌株22PC-11、32PC-13、52PC-14、22PC-20顏色深黃（賦值為3）。菌柄長度方面，菌株22PC-1菌柄最長，達到4.55 cm，其次為22PC-2，達到4.10 cm，菌株22PC-20菌柄長度最短，為3.11 cm。菌柄直徑方面，菌株22PC-1和22PC-20菌柄直徑最大，達到0.69 cm，菌株52PC-14菌柄直徑最小，為0.55 cm。產(chǎn)量方面，菌株22PC-1產(chǎn)量最高，達到121.30 g，菌株22PC-4產(chǎn)量最低，為80.80 g。綜上，菌株22PC-1在每叢子實體數(shù)目、菌柄長度、產(chǎn)量方面存在優(yōu)勢，菌株22PC-20在菌蓋直徑、菌蓋顏色方面存在優(yōu)勢。

表4 供試菌株的顯著性分析

由圖3可知，菌蓋顏色分為淺黃、黃和深黃。菌蓋邊緣狀態(tài)分為邊緣有波狀和邊緣無波狀。圖3A為菌株22PC-8，菌蓋顏色淺黃、菌蓋邊緣無波狀；圖3B為菌株22PC-1，菌蓋顏色黃、菌蓋邊緣有波狀；圖3C為菌株32PC-13，菌蓋顏色深黃、菌蓋邊緣有波狀。

圖3 子實體表型特征

3 結(jié)論與討論

隨著我國榆黃蘑栽培的發(fā)展，人們也逐漸意識到榆黃蘑的價值，尋常的栽培模式已經(jīng)不能滿足人們對榆黃蘑產(chǎn)量日益增長的需求，探究適于設(shè)施化栽培榆黃蘑菌株的篩選，能夠在一定程度上解決榆黃蘑的設(shè)施化栽培問題。本研究以篩選在設(shè)施化栽培模式下，生長速度快、產(chǎn)量高并且朵形好的菌株為試材，參照DUS測試指南方法進行出菇試驗，通過菌株真實性鑒定、生育期調(diào)查、表型性狀統(tǒng)計分析以及相關(guān)性分析進行優(yōu)良菌株篩選。結(jié)果表明在表型性狀分析中，供試菌株的變異范圍在22%～47%，在相關(guān)性狀分析中發(fā)現(xiàn)，菌柄長度與產(chǎn)量呈正相關(guān)，即菌柄越長產(chǎn)量越高，可為相關(guān)性狀的品種選育提供參考依據(jù)。通過數(shù)據(jù)分析，篩選出優(yōu)良菌株22PC-1（每叢子實體數(shù)目較多、菌柄長度較長、產(chǎn)量較高、生育期較短）和22PC-20（菌蓋直徑較大、菌蓋顏色黃、商品性好）能夠適用于榆黃蘑設(shè)施化生產(chǎn)。本研究篩選出的優(yōu)良菌株，不僅為榆黃蘑設(shè)施化生產(chǎn)提供菌株，更豐富了榆黃蘑的種質(zhì)資源，為后續(xù)新品種選育提供試驗材料。