高靈敏HBV-DNA技術(shù)在乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值①

張 飛 劉燕飛

(濮陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科, 河南 濮陽 457000)

乙型肝炎病毒(pepatitis B virus,HBV)是導(dǎo)致乙型病毒性肝炎的常見嗜肝性病毒,可在肝細(xì)胞內(nèi)寄生并造成嚴(yán)重肝損傷,誘發(fā)肝炎、肝纖維化、肝壞死,且30%以上患者存在反復(fù)性肝損傷,嚴(yán)重威脅患者健康[1]。HBV感染者多表現(xiàn)為活動(dòng)性乙型肝炎,早期檢查診斷對(duì)維護(hù)患者健康有重要意義。乙肝兩對(duì)半檢測(cè)即乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗體(抗-HBe)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗體(抗-HBs)、核心抗體(抗-HBc),是肝功能檢測(cè)最常用方法,操作簡(jiǎn)單,成本較低,獲取結(jié)果較快,但其局限性在于難以確定HBV傳染能力、復(fù)制能力。目前臨床對(duì)HBV-DNA的研究逐漸增多,可直接分析HBV復(fù)制情況,對(duì)判斷乙肝感染程度有直接作用。但高靈敏HBV-DNA技術(shù)作為新興技術(shù),其與乙肝兩對(duì)半檢測(cè)相關(guān)性仍缺少相關(guān)數(shù)據(jù)支持。本研究選取本院HBV感染患者,以分析高靈敏HBV-DNA技術(shù)在乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取濮陽市人民醫(yī)院2018-11～2020-10 HBV感染患者94例。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)HBV抗原、抗體檢測(cè)確診為單純性HBV感染;年齡18～60歲;知情本研究、簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):合并惡性腫瘤、血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病、肝功能異常、急慢性感染、肝部惡性腫瘤;近期經(jīng)抗病毒治療;合并心腦血管疾病;認(rèn)知功能障礙。根據(jù)乙肝兩對(duì)半檢測(cè)結(jié)果分為3組:A組(n=21)均為大三陽患者,即抗-HBc、HBeAg、HBsAg陽性;B組(n=45)均為小三陽患者,即抗-HBc、HBsAg、抗-HBe陽性;C組(n=28)為其他類型患者。A組男14例,女7例;年齡22～53歲,平均(37.58±7.26)歲;體質(zhì)量指數(shù)18.3～26.8kg·m-2,平均(22.68±1.87)kg·m-2;酗酒史5例。B組男30例,女15例;年齡20～56歲,平均(38.35±7.41)歲;體質(zhì)量指數(shù)18.0～26.5kg·m-2,平均(22.41±1.93)kg·m-2;酗酒史9例。C組男18例,女10例;年齡19～55歲,平均(36.31±7.38)歲;體質(zhì)量指數(shù)18.7～27.1kg·m-2,平均(22.90±1.96)kg·m-2;酗酒史4例。3組基線資料均衡可比(P>0.05)。

1.2 方法

采集空腹靜脈血3mL,離心處理(離心5min,轉(zhuǎn)速2500r·min-1),取上層清液置于-20℃待檢。(1)乙肝兩對(duì)半檢測(cè):儀器選擇強(qiáng)生公司的VITROS 360型全自動(dòng)免疫分析儀及配套試劑盒,嚴(yán)格按照說明操作,檢測(cè)。HBsAg、HBeAg、抗-HBc、抗-HBe、抗-HBs。陽性標(biāo)準(zhǔn):HBeAg濃度>0.3 PEIU·mL-1;HBsAg濃度>0.2 ng·mL-1;抗-HBc濃度>0.9 PEIU·mL-1;抗-HBe濃度>0.3 PEIU·mL-1;抗-HBs濃度>10.0 mIU·mL-1。(2)高靈敏HBV-DNA技術(shù)檢測(cè):取DNA濃縮液100μL加入血清100μL混勻,離心處理(離心10min,轉(zhuǎn)速12000r·min-1),棄上層清液,取HBV-DNA提取液20μL置入管底沉淀,劇烈振蕩,恒溫煮沸10min,離心處理(離心8min,轉(zhuǎn)速12000r·min-1),取上層清液;采集2μL樣品、標(biāo)準(zhǔn)品置入PCR反應(yīng)管,離心處理(離心30s,轉(zhuǎn)速5000r·min-1),置入美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)的IQ5型熒光定量PCR儀,設(shè)置參數(shù)預(yù)變性2min 93℃、1個(gè)循環(huán),變性30s 94 溫度、40個(gè)循環(huán),94℃至60℃退火、延伸30s、40個(gè)循環(huán),讀取熒光值。陽性標(biāo)準(zhǔn):HBV-DNA濃度>5.0lg copies·mL-1。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)比較3組HBV-DNA陽性率。(2)比較3組HBV DNA濃度分布情況。(3)比較HBsAg、HBeAg檢出結(jié)果與HBV-DNA陽性符合率的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0處理數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料以n(%)表示、χ2檢驗(yàn),等級(jí)資料比較采用Ridit檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3組HBV-DNA陽性率比較

A組21例患者中檢出HBA-DNA陽性18例,B組45例患者中檢出HBA-DNA陽性13例,C組28例患者中檢出HBA-DNA陽性2例。3組HBV-DNA陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且A組85.71%(18/21)>B組28.89%(13/45)>C組7.14%(2/28)(χ2=33.983,P<0.001)。

2.2 3組HBV-DNA濃度分布情況比較

3組不同HBV-DNA濃度分布情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且A組HBV-DNA濃度分布>B組>C組(P<0.05),見表1。

表1 3組HBV-DNA濃度分布情況[n(%)]

2.3 HBsAg、HBeAg檢出結(jié)果與HBV-DNA陽性符合率的關(guān)系比較

HBV-DNA陽性患者中,HBsAg陽性符合率為93.94%(31/33),明顯高于HBeAg陽性符合率54.55%(18/33)(χ2=13.390,P<0.001),見表2。

表2 HBsAg、HBeAg檢出結(jié)果與HBV-DNA陽性符合率的關(guān)系比較

3 討論

HBV感染在世界范圍內(nèi)均有較高發(fā)生率,不同區(qū)域雖存在一定差異,但總體處于較高水平,有數(shù)據(jù)顯示,全世界曾有20億人感染過HBV,且3.5億左右為HBV慢性感染,每年約100萬人由于HBV感染導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭、肝癌,是危害社會(huì)公共健康的嚴(yán)重問題[2]。HBV可侵蝕肝細(xì)胞,在肝細(xì)胞內(nèi)寄生并復(fù)制,導(dǎo)致肝功能異常,誘發(fā)乙型肝炎后可由于免疫復(fù)合物而造成肝外損傷,威脅患者健康[3]。因此,通過早期檢查確診并進(jìn)行干預(yù),對(duì)改善患者預(yù)后有重要臨床意義。

乙肝兩對(duì)半檢測(cè)主要是對(duì)乙肝表面抗體、表面抗原、核心抗體、e抗體、e抗原的檢測(cè),是目前診斷HBV感染的主要依據(jù),尤其HBeAg具有傳染性強(qiáng)、繁殖快、病毒復(fù)制活躍等特點(diǎn),接觸后傳染風(fēng)險(xiǎn)高[4]。近年來隨著DNA技術(shù)的不斷發(fā)展,高靈敏HBV-DNA技術(shù)逐漸受到臨床關(guān)注,由于具有線性范圍廣、檢測(cè)下限低等優(yōu)勢(shì),在HBV感染中的前景較好,是未來HBV感染檢測(cè)發(fā)展的主要方向。目前高靈敏HBV-DNA技術(shù)應(yīng)用于HBV感染檢測(cè)具有較高特異性、靈敏度,若高靈敏HBV-DNA技術(shù)檢測(cè)結(jié)果為陽性,提示HBV傳染性較強(qiáng),HBV-DNA濃度越高病毒復(fù)制能力越強(qiáng)[5]。本研究對(duì)不同類型HBV感染患者檢測(cè),發(fā)現(xiàn)大三陽患者HBV-DNA陽性率及濃度分布情況均為最高,其次為小三陽患者,說明HBV-DNA與乙肝兩對(duì)半檢測(cè)存在一定關(guān)系,且通過檢測(cè)HBV-DNA可直接分析HBV情況。

HBV-DNA定量與乙肝兩對(duì)半檢測(cè)的相關(guān)性是乙型肝炎相關(guān)診療中研究的重點(diǎn)方向。有學(xué)者認(rèn)為,乙肝兩對(duì)半檢測(cè)與HBV-DNA熒光定量及肝臟纖維化存在一定相關(guān)性,HBV-DNA熒光定量及肝臟纖維化可用于分析HBV病毒傳染性及復(fù)制能力,評(píng)估肝硬化情況,從而指導(dǎo)臨床治療[6]。另有報(bào)道顯示,通過熒光定量分析法檢測(cè)HBV-DNA與乙肝兩對(duì)半檢測(cè)對(duì)比,前S1抗原與HBV-DNA符合率>90%[7]。本研究進(jìn)一步分析HBsAg、HBeAg檢出結(jié)果與HBV-DNA陽性符合率的關(guān)系,結(jié)果顯示HBsAg陽性符合率高達(dá)93.94%,而HBeAg陽性符合率僅為54.55%,相差39.39%,證實(shí)HBsAg陽性時(shí)HBV-DNA陽性率較高,二者具有較好一致性,呈正相關(guān)關(guān)系。因此,通過檢測(cè)HBsAg對(duì)分析HBV-DNA陽性情況有一定價(jià)值。但同時(shí)需指出,通過檢測(cè)HBsAg及HBeAg水平可間接判斷HBV-DNA情況,但并不能證實(shí)HBsAg、HBeAg轉(zhuǎn)陰HBV-DNA停止復(fù)制。本研究A組中HBV-DNA濃度<5.0 lg copies·mL-1的患者仍存在HBsAg陽性情況,其原因可能與機(jī)體C區(qū)基因突變、特異性免疫耐受有關(guān)。但同時(shí)應(yīng)注意,HBV-DNA技術(shù)雖擁有較高檢出能力,但其局限性在于結(jié)果易受核酸污染影響,導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性;同時(shí)高靈敏HBV-DNA技術(shù)作為新興技術(shù),臨床對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室相關(guān)管理文件中尚未明確相關(guān)要求,缺少對(duì)抗干擾能力、試劑盒性能驗(yàn)證、室內(nèi)質(zhì)控等質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)程序,臨床標(biāo)準(zhǔn)化管理存在一定難度,導(dǎo)致部分醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室、檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢測(cè)質(zhì)量存在差異。

綜上所述,高靈敏HBV-DNA技術(shù)與乙肝兩對(duì)半檢測(cè)具有互補(bǔ)作用,其HBV-DNA與HBsAg存在正相關(guān)關(guān)系,二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)提高診斷準(zhǔn)確率、提供臨床相關(guān)依據(jù)有重要價(jià)值。