雞滑液囊支原體檢測方法和防控措施研究進(jìn)展

任智彬，邵麗瑋，王玨，潘保革，何團(tuán)擁，林向前，王志民，崔秋佳，李茜★

（1.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定 071000；2.棗強(qiáng)縣畜牧站，河北棗強(qiáng) 053100）

雞滑液囊支原體（Mycoplasma synoviae，MS）感染多發(fā)于春秋兩季。一般情況下，4～16 周齡的雞最易出現(xiàn)MS 感染。 病雞與MS 隱性感染雞是該病主要傳染源， 隱性感染雞無明顯的發(fā)病癥狀， 在養(yǎng)雞場的日常管理中很難進(jìn)行排查，給MS 防控造成極大困難。 MS 檢測與防控是目前家雞養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展中的關(guān)鍵問題，對于MS 檢測與防控的研究取得了以下進(jìn)展。

1 雞滑液囊支原體檢測方法研究現(xiàn)狀

1.1 分離鑒定

病原的分離鑒定是檢測MS 是否感染最好的方法。 郭婷婷、王柏林等人在各自研究中使用加入了馬血清的改良KM2 培養(yǎng)基， 從MS 感染的病雞患病部位提取滲出液或增生物混入培養(yǎng)基中攪勻，進(jìn)行10 倍梯度稀釋至10-3，37℃恒溫培養(yǎng)5～7 天后傳代， 直到培養(yǎng)基內(nèi)物質(zhì)變?yōu)辄S色，后從中提取液體于37℃濕盒中繼續(xù)培養(yǎng)，4～5 天后提取特征明顯的菌落重復(fù)上述培養(yǎng)步驟，共進(jìn)行3 次培養(yǎng)得到分離純化的MS 菌株。劉廷江等人在研究中使用這一方法對12 份MS 感染個(gè)體的腫脹跗關(guān)節(jié)腔內(nèi)關(guān)節(jié)液與內(nèi)容物進(jìn)行分離鑒定，成功分離出5 份MS 菌株。 謝志勤等人從福建省疑似感染MS 的病雞關(guān)節(jié)腔內(nèi)容物中分離到MS 菌株，并將其命名為MS-FJ01，該分離株與MS HN01 和MS 5-9 均存在良好的共線性關(guān)系且與MS 5-9 親緣關(guān)系更近。

1.2 分子生物學(xué)檢測

分子生物學(xué)檢測技術(shù)手段目前在MS 實(shí)驗(yàn)室檢測中被廣泛使用。 該領(lǐng)域研究中，M S K 、Tianhao K、Xiaona W 等人都在各自的研究中以mgC2 為檢測靶標(biāo)，建立了能夠正確區(qū)分野毒株和疫苗株的PCR 檢測方法。mgC2 與人肺炎支原體p30 和生殖支原體p32 基因的同源性很高，這提示mgC2 基因的功能可能與人肺炎支原體和生殖支原體中的粘附蛋白的功能相似。Xiu Y、Kriengwich L、M.V G P 等人在研究中建立多層級PCR 進(jìn)行MS 檢測， 試驗(yàn)結(jié)果證明這一方法在MS、MG 野毒株與MG-F 疫苗株檢測中檢出率都極高，展現(xiàn)出速度快、靈敏度高、特異性強(qiáng)等諸多優(yōu)良特性。 劉洋、 張鑫等人在各自研究中，均根據(jù)不同類型MS 基因序列設(shè)計(jì)了引物與Taq Man-MGB 探針進(jìn)行檢測。 這種檢測方法在檢測速率上有著明顯的優(yōu)勢。 王晨燕、張永康與曾婷婷等人在研究中，都選取MS 與MG 的保守基因作為靶標(biāo)， 在高度保守的特定區(qū)域設(shè)計(jì)專門服務(wù)于MS 與MG 檢測的引物與探針，進(jìn)而形成一種以MS-MG 雙重實(shí)時(shí)定量為基礎(chǔ)的PCR檢測方法。

1.3 血清學(xué)檢測

血清學(xué)檢測方法可以進(jìn)一步細(xì)分為血清平板凝集（Serum plate agglutination，SPA）試驗(yàn)、血凝 抑 制（Hemagglutination inhibition，HI）試 驗(yàn) 和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等技術(shù)。 在有關(guān)血清平板凝集試驗(yàn)方法的研究中，Chun W、M.S K、Anna P 等使用SPA 血清檢測方法進(jìn)行病例樣本的檢測， 同時(shí)對試驗(yàn)樣本使用PCR 方法進(jìn)行檢測。 結(jié)果表明，使用SPA 血清檢測方法的結(jié)果與PCR 方法完全一致。 相較于PCR 方法應(yīng)用，SPA血清檢測方法操作難度更小， 對客觀條件要求更低，而且檢測成本也更加低廉。 在檢測效果一致的情況下， 無疑SPA 方法有著更突出的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。 而在血凝抑制試驗(yàn)方法的研究中，黃紹田在研究中合成得到一種有極佳穩(wěn)定性與特異性的HI 抗原，并根據(jù)這一抗原建立了全新的MS 檢測方法。 周盡喜對該抗原的實(shí)際應(yīng)用效果進(jìn)行了檢驗(yàn)，結(jié)果表明，這種方法與目前通用的ELISA 檢測方法相比，有著更高的檢出率，兩種方法的檢出率分別為100%與77.07%。 但HI 試驗(yàn)耗時(shí)長、敏感性差，目前實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)中使用不多。

2 雞滑液囊支原體防控措施研究現(xiàn)狀

2.1 疫苗接種

有關(guān)疫苗接種防控MS 的研究中， 尹麗萍、費(fèi)強(qiáng)等人在各自研究中采用MS 分離株為原料，制得的含ISA 71 VG 佐劑的滅活疫苗能夠誘導(dǎo)雞體內(nèi)的高水平血清lgG 抗體，同時(shí)上調(diào)雞的免疫細(xì)胞的應(yīng)答， 為雞提供高效的MS 感染防護(hù)。王林浩的研究中以甲醛作為滅活劑， 配合ISA 206 VG 佐劑制得疫苗。在實(shí)際應(yīng)用中，這種疫苗能夠通過刺激雞體內(nèi)的T 淋巴細(xì)胞增殖， 提升雞體內(nèi)的IgG 抗體水平， 誘發(fā)免疫應(yīng)答。 Vijaykumar M、S O O、Pranoti G 等人在研究中使用二乙烯亞胺對MS 分離株進(jìn)行滅活處理，并分別選用四種佐劑合成制得四種不同的滅活疫苗。四種疫苗在應(yīng)用中均具備刺激機(jī)體形成MS 抗體的能力，展現(xiàn)出顯著的MS 防控效果。 針對疫苗注射，Paola G、Wenlong X 等人研究中指出，常用弱毒疫苗重點(diǎn)在父母代的健康雞身上使用,在疫苗接種前后都需要嚴(yán)格管控支原體敏感藥物使用,保證疫苗接種效果。 楊道斌研究中提出在MS 防控中雞毒支原體滅活苗的接種，要在雛雞5～7 日齡時(shí)進(jìn)行第一次接種，在母雞開始產(chǎn)蛋前的一個(gè)月進(jìn)行第二次接種,這一接種方案能夠進(jìn)一步提升疫苗使用效果。 孫佳琳針對雞滑液支原體活疫苗的接種,指出在接種該類型疫苗時(shí)可采用點(diǎn)眼接種的方式， 這一接種方式能夠最大限度避免雞的機(jī)體損傷，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，降低疾病的感染率。 另外該類型疫苗只起到單一的預(yù)防作用，MS 病雞接種該疾病是無效的。 實(shí)際免疫接種期間需要相關(guān)人員能夠掌握接種技巧和相關(guān)要點(diǎn), 還要定期檢查雞只的免疫抗體,若抗體消失應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免。 T.S E、Mendonca M S D等的研究中提到，美國家禽改良計(jì)劃中，針對雞群MS 防控，提出飼養(yǎng)的蛋雞在產(chǎn)蛋之前，雞群內(nèi)至少要有10%的個(gè)體接受過MS 血清學(xué)檢測，在之后的90 個(gè)自然日內(nèi)， 要對雞群中最少150個(gè)個(gè)體進(jìn)行MS 檢測，后續(xù)要實(shí)現(xiàn)MS 檢測的持續(xù)跟進(jìn)，對雞群中的子代進(jìn)行MS 檢測。 以上的檢測結(jié)果應(yīng)全部為陰性，一旦檢測出陽性，雞群所有種群都要作淘汰處理。

2.2 藥物治療

在MS 藥物防控的研究中，學(xué)者們普遍認(rèn)為泰萬菌素與多西環(huán)素在MS 治療方面有更加突出的效果。陳予朋對出現(xiàn)MS 感染的樣本分別進(jìn)行藥物治療、疫苗接種與聯(lián)合治療三種形式。 結(jié)果表明，藥物治療與疫苗接種結(jié)合的方式，保護(hù)率能夠達(dá)到80%，效果最好。 沈?qū)W懷等人的研究結(jié)果顯示MS 分離株對金霉素、土霉素、吉他霉素、替米考星、多西環(huán)素、泰樂菌素和林可霉素耐藥率分別為98.8%、94.3%、 90.7%、78.2%、61.5%、 58.8%和57.7%。 Qianjin S、Nadia B 等人在研究中， 提取了2016 年到2018 年美國佐治亞州境內(nèi)的部分陽性雞群， 分離得到12 個(gè)MS菌株。 對這些分離株進(jìn)行敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示這些分離株對泰妙菌素有最高的敏感度， 強(qiáng)力霉素的敏感度排在第二位， 其余藥物的敏感度則處于較低的水平。 Wei C、Xiaorong Z 的研究中，采用微量肉湯稀釋的方法對二萜烯類、大環(huán)內(nèi)酯類與喹諾酮類藥物實(shí)際應(yīng)用中的抑菌效果進(jìn)行對比研究。研究發(fā)現(xiàn)MS 對大環(huán)內(nèi)酯類與氟喹諾酮類藥物有著更強(qiáng)的耐藥性， 這兩種藥物在MS 防控中很難起到實(shí)質(zhì)性的作用，耐藥性問題成為限制抗生素藥物在MS 防控中應(yīng)用的關(guān)鍵性因素。 孫杰龍從中醫(yī)角度分析MS 感染病因，認(rèn)為MS 感染對應(yīng)中醫(yī)學(xué)中的“濕弊”，雞自身免疫力弱， 雞舍環(huán)境潮濕與風(fēng)寒濕邪入侵都會誘發(fā)雞MS 感染。在藥物治療中可以使用舒筋活血、祛濕通絡(luò)的中草藥。 王選增的研究中參考孫杰龍的研究觀點(diǎn)，選用黃芩、土茯苓和川牛膝調(diào)配出“芩苓湯”處方，試驗(yàn)結(jié)果表明，該處方具有抗炎消毒、癰腫癤瘡、清熱燥濕、通利關(guān)節(jié)和逐瘀通經(jīng)等作用，在MS 防控中有良好效果。

3 結(jié)語與展望

綜上所述，在MS 檢測中，血清學(xué)檢測手段操作簡便，對客觀條件要求低，檢測結(jié)果正確率與其他檢測方法無顯著區(qū)別， 具有極突出實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。 在MS 防控中，藥物治療結(jié)合疫苗接種的防治手段應(yīng)用效果最佳。 種群凈化防控手段對養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益會產(chǎn)生重大影響， 不適宜在中小型養(yǎng)雞場MS 防控中使用。