超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅康牟淮_定度評(píng)定

單長(zhǎng)海，李 翔，楊 周，龍 洋，胡 容，孫 輝

（國(guó)家富硒產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖北恩施 445000）

氟苯尼考是一種畜禽動(dòng)物專用的酰胺醇類的廣譜抗菌藥，治療畜禽動(dòng)物的細(xì)菌性疾病，尤其對(duì)呼吸道系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著[1-2]。氟苯尼考具有一定的毒性，畜牧農(nóng)產(chǎn)品中氟苯尼考累積到一定限量，會(huì)對(duì)人體造成危害[3-4]?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）規(guī)定，雞肉中氟苯尼考?xì)埩粝蘖啃∮?00 μg·kg-1，是國(guó)家對(duì)農(nóng)產(chǎn)品重點(diǎn)監(jiān)督項(xiàng)目?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB 31658.5—2021）自2022年2月1日起開始實(shí)施，是國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)督抽檢指定的唯一檢測(cè)方法。在獸藥殘留的分析檢測(cè)工作中，由于試劑耗材質(zhì)量等級(jí)的不同、檢測(cè)設(shè)備的精密度和靈敏度的不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生一定的偏差，通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測(cè)量不確定度分析并關(guān)注主要不確定度來(lái)源，能夠提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度[5-6]。本文依據(jù)GB 31658.5—2021、《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》（CNAS—GL006：2019），對(duì)雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅繙y(cè)定的不確定度進(jìn)行評(píng)定，旨在為采用新標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)找出關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)并加以控制，以降低檢驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

雞肉樣品，市場(chǎng)采購(gòu)。

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品（100.0 mg·L-1，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，濃度不確定度U=3.0 mg·L-1）；乙腈、甲酸、正己烷、乙酸乙酯（色譜純，德國(guó)CNW公司）；實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q超純水，雞肉中氟苯尼定量分析質(zhì)控樣（自制）。

Triple Quad 5500三重四級(jí)桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)ABSCIEX公司）；ST 40R離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher公司）；Vac Elut SPS 24半自動(dòng)固相萃取儀（美國(guó)Agilent Technologies公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制以及樣品處理

標(biāo)準(zhǔn)溶液及內(nèi)標(biāo)配制：精密量取1.0 mL氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，得到10 μg·mL-1氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)工作液；同樣方法制備100 ng·mL-1內(nèi) 標(biāo) 工 作 溶 液。 按 照 GB 31658.5—2021中8.3的方法制備得濃度分別為10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、500 ng·mL-1和1 000 ng·mL-1的校準(zhǔn)工作溶液。

樣品處理按GB 31658.5—2021中8.1、8.2、8.3的方法處理，色譜和質(zhì)譜條件按照8.4的條件設(shè)置。

1.2.2 數(shù)學(xué)模型的建立

根據(jù)測(cè)量方法建立雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅慷糠治龅臄?shù)學(xué)模型為

式中：X為雞肉中氟苯尼考含量，μg·kg-1；c為試樣溶液中氟苯尼考濃度，μg·L-1；m為供試試料質(zhì)量，g；v為試樣定容體積，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來(lái)源的識(shí)別

根據(jù)GB 31658.5—2021標(biāo)準(zhǔn)方法的測(cè)量過(guò)程和測(cè)量模型，影響雞肉中氟苯尼考定量分析的不確定度來(lái)源有：①樣品稱量引入的不確定度urel(a)；②氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性引入的不確定度urel(c)；③校準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel(q)；④檢測(cè)方法重復(fù)性引入的不確定度urel(r)；⑤檢測(cè)方法加標(biāo)回收率引入的不確定度urel(h)。由于檢測(cè)方法加標(biāo)回收率引入的不確定度包含了提取凈化過(guò)程引入的不確定度，因此在評(píng)定過(guò)程中忽略了提取凈化過(guò)程引入的不確定度。

2.2 不確定度測(cè)量

2.2.1 樣品稱量引入的不確定度urel(a)

（1）天平允差引入的不確定度u(a1)。根據(jù)《電子天平校準(zhǔn)規(guī)程》（JJG 1036—2008），使用0.001 g分度的天平，稱樣量在2 g（±0.02 g）時(shí)最大允許誤差為±0.005 g，供試品稱樣按照均勻分布，則樣品稱樣時(shí)由電子天平允許誤差引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

（2）天平重復(fù)性引入的不確定度u(b)。根據(jù)電子天平校準(zhǔn)證書得天平重復(fù)性引入的不確定度為u(b)=0.003 g。

（3）樣品稱樣引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(a)。樣品稱量按2.00 g計(jì)算，稱量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.2 氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性引入的不確定度urel(c)

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書給出的濃度為100.0 mg·L-1，不確定度為3.0 mg·L-1。氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確性引入的不確定度為

2.2.3 校準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度urel(q)

校準(zhǔn)曲線以氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的濃度和儀器分析得到的峰面積見表1，擬合線性方程為Y=0.181X+0.379 1，R2=0.999 9，其中斜率a=0.181，截距b=0.379 1，測(cè)量樣品的次數(shù)p=2，標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量次數(shù)n=6，被測(cè)供試品溶液濃度均值c=152 ng·mL-1，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液理論平均值c=310 ng·mL-1。計(jì)算校準(zhǔn)曲線的殘差S2為

表1 校準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度及峰面積統(tǒng)計(jì)表

校準(zhǔn)曲線擬合引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

校準(zhǔn)曲線擬合引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.4 檢測(cè)方法重復(fù)性測(cè)定引入的不確定度urel(r)

稱取雞肉樣品10份，按1.2.1的方法進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定雞肉中氟苯尼考含量。雞肉中氟苯尼考含量 檢 測(cè) 結(jié) 果xi分 別 為 76.3 μg·kg-1、78.2 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、72.1 μg·kg-1、70.6 μg·kg-1、75.6 μg·kg-1、78.9 μg·kg-1、77.2 μg·kg-1、73.6 μg·kg-1和 75.2 μg·kg-1，均值X=75.3 μg·kg-1，按公式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差S為

檢測(cè)方法重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(r)為

檢測(cè)方法重復(fù)性引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.5 檢測(cè)方法回收率引入的不確定度urel(h)

稱取雞肉樣品，按照樣品中氟苯尼考含量分別為 50 μg·kg-1、100 μg·kg-1、200 μg·kg-1水平進(jìn)行加標(biāo)，每個(gè)水平按照3個(gè)平行樣進(jìn)行稱樣加標(biāo)處理，按照1.2.1的方法進(jìn)行回收率測(cè)定。9個(gè)樣品的加標(biāo)回收率分別為88.7%、89.6%、90.5%、92.2%、90.5%、95.6%、94.5%、96.4%和94.6%。方法回收率的平均值x為92.5%，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差S為

檢測(cè)方法回收率引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

檢測(cè)方法回收率引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.2.6 合成不確定度urel

通過(guò)測(cè)定過(guò)程的不確定度來(lái)源分析，該方法的相對(duì)合成不確定度urel為

本次測(cè)定的雞肉中氟苯尼考含量的平均值x為75.3 μg·kg-1，則本次雞肉中氟苯尼考測(cè)定的合成不確定度uc為

2.2.7 擴(kuò)展不確定度U

按照CNAS-GL006：2018，選擇95%置信水平時(shí)，包含因子k=2，則測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度U為

因此，按照GB 31658.5—2021方法測(cè)定雞肉中氟苯尼考的結(jié)果為（75.3±6.4） μg·kg-1。

3 結(jié)論

本研究依據(jù)GB 31658.5—2021標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)雞肉中氟苯尼考?xì)埩袅繙y(cè)量過(guò)程中的不確定度來(lái)源進(jìn)行了分析，對(duì)測(cè)量不確定度分量進(jìn)行評(píng)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度影響最主要的因素為標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，而校準(zhǔn)曲線擬合與人員操作檢測(cè)熟練程度和儀器性能有關(guān)。因此，在檢測(cè)過(guò)程中，需要對(duì)人員檢測(cè)能力和儀器維護(hù)保養(yǎng)進(jìn)行定期監(jiān)控，以降低檢驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)。