GeneXpertMTB/RIF 對結(jié)核病的診斷價值及復(fù)治患者群體特征研究

劉乃剛，高迎春

(1.寶應(yīng)縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 寶應(yīng) 225800；2.寶應(yīng)縣疾病預(yù)防控制中心檢驗科，江蘇 寶應(yīng) 225800)

結(jié)核?。╰uberculosis）是由于結(jié)核桿菌引起的一種慢性傳染病，結(jié)核菌會對人體器官造成損傷，其中肺部最容易受到侵犯，故肺結(jié)核是結(jié)核病的主要類型[1]。相關(guān)研究顯示[2，3]，結(jié)核病患者人群中，80%以上的患者存在肺部癥狀，由于呼吸道是結(jié)核病患者的主要傳播方式，特別是隨著近年來經(jīng)濟發(fā)展快速，環(huán)境污染嚴重，結(jié)核病發(fā)病率呈逐年上升趨勢。因此，準確診斷、及時有效治療是關(guān)鍵。目前，診斷結(jié)核病的方法較多，其中常規(guī)抗酸染色陽性率低，而培養(yǎng)耗時長，均不能滿足臨床對結(jié)核病早期診斷、治療需求[4]。GeneXpertMTB/RIF 屬于分子診斷技術(shù)，具有操作簡單、耗時短的優(yōu)勢。但是對結(jié)核病的診斷效能尚無統(tǒng)一定論，其診斷價值還需要臨床不斷探究證實[5]。本研究結(jié)合2021 年6 月-2022 年1 月在寶應(yīng)縣人民醫(yī)院診治的126 例疑似結(jié)核病患者臨床資料，研究GeneXpertMTB/RIF 對結(jié)核病的診斷價值及復(fù)治患者群體特征，為臨床結(jié)核病診斷以及預(yù)防和控制復(fù)治提供一定的參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021 年6 月-2022 年1 月在寶應(yīng)縣人民醫(yī)院診治的126 例疑似結(jié)核病患者，其中男92 例，女34 例；年齡17～78 歲，平均年齡（45.19±5.10）歲；其中復(fù)治患者28 例。患者自愿參加本研究，并簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標準 納入標準：①均合并不同程度咳嗽、咳痰、痰中帶血或咯血[6]；②未接受免疫抑制劑治療患者以及并發(fā)糖尿病患者；③認知、交流正常。排除標準：①合并肝、腎、心、腦血管系統(tǒng)等嚴重疾病者；②依從性較差，不能配合者；③隨訪資料不完善者。

1.3 方法

1.3.1 痰涂片染色 采用接種環(huán)取痰液樣本中干奶酪樣壞死血塊，制成厚涂片，并快速干燥固定，制定結(jié)束后將涂片用石碳酸復(fù)紅溶液染色，下部火焰加熱5 min，流水沖洗，然后用3%鹽酸乙醇將紅色圖片脫色1 min，流水沖凈，再用亞甲藍溶液將厚涂片染色30 s[7]。制備完成后在油鏡下觀察，出現(xiàn)駝色細菌或染色片呈紅色現(xiàn)象，提示體內(nèi)細菌具有抗酸性，如果出現(xiàn)藍色且駝色現(xiàn)象提示體內(nèi)細菌呈非抗酸性[8]。

1.3.2 改良羅氏培養(yǎng)法 將痰液標本采用4%的氫氧化鈉溶液進行處理，通過無菌操作的方法將標本在改良羅氏培養(yǎng)基斜面上進行接種，在37 ℃的條件下分別培養(yǎng)3 d 和7 d 后進行觀察，然后再每周觀察1次，對生長情況進行詳細記錄，直至培養(yǎng)出陽性結(jié)果；如果60 d 后無生長，則判斷為陰性[8，9]。

1.3.3 GeneXpertMTB/RIF 檢測 在痰液標本中以1∶2比例加入處理液，然后放置于渦旋振蕩器上渦旋15～30 s，然后室溫孵育10 min，在渦旋震蕩15～30 s，室溫孵育5 min，待標本完全液化，加入樣品盒。將樣品盒放入由美國Cepheid 公司生產(chǎn)的GeneXpertMTB/RIF 核酸擴增儀中，2 h 后讀取結(jié)果。探針循環(huán)閾值≤38 時表示樣本為陽性,早、晚期閾值差值≤3.5 表示利福平敏感[10，11]。

1.4 觀察指標 觀察不同檢測方法（痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法、GeneXpertMTB/RIF）對結(jié)核病診斷效能、分枝桿菌利福平藥敏性以及復(fù)治患者群體特征。

1.4.1 診斷效能[12]靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%。

1.4.2 癥狀和體征評分[13]包括咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困難、乏力，依據(jù)嚴重程度分為無癥狀、輕度、中度、重度，依次記為0、1、2、3 分，評分越高癥狀越嚴重。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計軟件包SPSS 21.0 版本對本研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用（P＜0.05 說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測方法陽性率比較 GeneXpertMTB/RIF檢測陽性率高于痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法檢測陽性率（P＜0.05），見表1。

表1 不同檢測方法陽性率比較[（%）]

表1 不同檢測方法陽性率比較[（%）]

注：與痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法比較，*P＜0.05

2.2 不同檢測方法診斷效能比較 3 種方法聯(lián)合檢測敏感度均高于GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法（P＜0.05），特異度小于改良羅氏培養(yǎng)法、GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色（P＜0.05），且GeneXpertMTB/RIF 特異度小于改良羅氏培養(yǎng)法（P＜0.05），見表2。

表2 不同檢測方法診斷效能比較（,%）

表2 不同檢測方法診斷效能比較（,%）

注：與3 種方法聯(lián)合比較，P＜0.05；與痰涂片染色、GeneXpertMTB/RIF、3 種方法聯(lián)合比較，**P＜0.05

2.3 GeneXpertMTB/RIF 檢測方法與改良羅氏培養(yǎng)法結(jié)果一致性 GeneXpertMTB/RIF 檢測利福平結(jié)核枝桿菌藥敏結(jié)果與改良羅氏培養(yǎng)法結(jié)果一致性良好（Kappa=0.722，=0.001）。

2.4 復(fù)治患者單因素分析 復(fù)治患者單因素分析顯示，不同地區(qū)、職業(yè)、結(jié)核病接觸史、治療前癥狀和體征評分、既往治療次數(shù)、既往用藥種類、既往用藥不良反應(yīng)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而不同年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 復(fù)治患者單因素分析（,%）

表3 復(fù)治患者單因素分析（,%）

2.5 多因素Logistic 回歸分析復(fù)治患者獨立危險因素 治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次、農(nóng)村、農(nóng)民是復(fù)治患者發(fā)生的獨立危險因素（P＜0.05），見表4。

表4 多因素Logistic 回歸分析復(fù)治患者獨立危險因素

3 討論

結(jié)核病傳統(tǒng)痰涂片鏡檢和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)在臨床應(yīng)用均具有一定的局限性[14，15]。本研究選擇的GeneXpertMTB/RIF 技術(shù)是一種全新的體外診斷技術(shù)，可實現(xiàn)定量聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）擴增和熒光擴增于一體，采用一次性試劑盒，可自動完成檢測，相對可減少檢測過程中的干擾因素，且檢測時間僅為2 h，從理論基礎(chǔ)上分析可滿足早期結(jié)核病診斷和治療需求[16，17]。基于以上優(yōu)點，GeneXpertMTB/RIF技術(shù)可作為結(jié)核病診斷首選方式。但是目前關(guān)于GeneXpertMTB/RIF 對結(jié)核病診斷敏感度、特異度相關(guān)研究存在差異[18]。

本研究結(jié)果顯示，GeneXpertMTB/RIF 檢測陽性率高于痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法檢測陽性率（＜0.05），與常規(guī)結(jié)核病檢測方法比較，GeneXpertMTB/RIF 可提高檢測陽性率，可對人群進行篩查，有效縮小篩查范圍，確定高危人群，該結(jié)論與張玉等[19]的研究結(jié)果基本一致。同時研究結(jié)果顯示，3 種方法聯(lián)合檢測敏感度均高于GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色、改良羅氏培養(yǎng)法（P＜0.05），特異度小于改良羅氏培養(yǎng)法、GeneXpertMTB/RIF、痰涂片染色（P＜0.05），且GeneXpertMTB/RIF 特異度小于改良羅氏培養(yǎng)法（P＜0.05），提示3 種方法比較GeneXpertMTB/RI 具有較高的診斷敏感度，但是改良羅氏培養(yǎng)法對診斷特異度極高，與涂陰結(jié)核臨床診斷一致性良好。雖然3 種方法聯(lián)合診斷可提高敏感度，但特異度卻降低。因此，對于結(jié)核病患者，GeneXpertMTB/RI 檢測方式是最佳的診斷方法，但是為了進一步提高診斷敏感度和特異度，可采用3 種檢測方法聯(lián)合，以獲得更準確的診斷效果。GeneXpertMTB/RIF 檢測利福平結(jié)核枝桿菌藥敏結(jié)果與改良羅氏培養(yǎng)法結(jié)果一致性良好（Kappa=0.722，P＜0.05），該結(jié)論提示GeneXpertMTB/RI 檢測和改良羅氏培養(yǎng)法藥敏試驗具有較高的一致性，可見該方法診斷結(jié)核病可獲得良好的診斷效能，尤其是其與藥敏試驗較高一致性可為復(fù)治結(jié)核病患者治療提供可靠的參考，并有利于減少耐藥結(jié)核病的傳播。此外，對復(fù)治患者進行單因素分析，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)、職業(yè)、結(jié)核病接觸史、治療前癥狀和體征評分、既往治療次數(shù)、既往用藥種類、既往用藥不良反應(yīng)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而不同年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示復(fù)治結(jié)核病患者具有一定的群體特點，與職業(yè)、所在地域、結(jié)核病接觸史、治療前癥狀評分、既往治療次數(shù)和用藥種類以及用藥不良反應(yīng)密切相關(guān)。分析認為可能與農(nóng)村生活環(huán)境差，農(nóng)民文化程度相對較低，對疾病相關(guān)預(yù)防知識了解及重視少，從而容易造成結(jié)核病感染和傳播，從而增加再次感染的風險[20]。同時臨床治療前癥狀評分越高，病情越嚴重，且治療次數(shù)、用藥種類越多，耐藥風險越高，從而增加健康人群的感染，提高復(fù)治率。多因素Logistic 回歸分析，農(nóng)村、農(nóng)民治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次是復(fù)治患者發(fā)生的獨立危險因素（p＜0.05），表明農(nóng)村、農(nóng)民、治療前癥狀及體征評分≥6 分、既往治療＞2 次是結(jié)核病復(fù)治患者高危人群。因此，加強對農(nóng)村、農(nóng)民結(jié)核病患者健康宣教，尤其對治療癥狀評分較高患者，在治療過程進行密切監(jiān)測，從而有效控制以上風險因素，降低結(jié)核病復(fù)治發(fā)生率，提高臨床結(jié)核病初始治愈率。

綜上所述，GeneXpertMTB/RIF 對結(jié)核病具有較高的診斷價值，且可獲得與改良羅氏培養(yǎng)法結(jié)果一致的利福平結(jié)核枝桿菌藥敏結(jié)果。臨床依據(jù)GeneXpertMTB/RIF 診斷結(jié)果，并結(jié)合結(jié)核病復(fù)治患者群體特征（農(nóng)村、農(nóng)民、治療前癥狀及體征評分≥6分、既往治療＞2 次），加強對高危群體監(jiān)測和防控，從而減少結(jié)核病的復(fù)發(fā)和傳播。