血清細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶對消化道腫瘤診斷價值分析

王政江，朱金紅，王德霞，楊麥青

(1.諸城市人民醫(yī)院病理科，山東 諸城 262200；2.濰坊市人民醫(yī)院病理科，山東 濰坊 261041；3.諸城市人民醫(yī)院兒科，山東 諸城 262200)

癌癥嚴(yán)重危害人類健康，影響患者生活質(zhì)量，其中消化道腫瘤的發(fā)病率及死亡率均位居前列[1，2]。消化道腫瘤包括包括胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌和食道癌，在我國男性中，為繼肺癌之后的前5 大癌癥類型之一[1]。早期消化道腫瘤無特異性表現(xiàn)，且缺乏根治術(shù)后患者預(yù)后判斷的有效標(biāo)準(zhǔn)[3，4]。及早對消化道腫瘤進(jìn)行篩查，尋找消化道早期腫瘤的標(biāo)志物成為近年來的研究重點。胸苷激酶1（serum thymidine kinase，TK1）屬于催化胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)化為單磷酸胸腺嘧啶的重要酶，其含量和腫瘤DNA 的合成呈正相關(guān)性。據(jù)報道，健康成人血清及組織中TK1 水平極低，而在胃腸癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤患者中，TK1水平隨腫瘤細(xì)胞增殖速度而升高，超出正常人群水平的2～100 倍。因此，TKl 水平升高和腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài)關(guān)系密切。TK1 表達(dá)異常參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此，血清學(xué)TK1 水平的檢測可作為動態(tài)觀察體內(nèi)腫瘤細(xì)胞增殖的指標(biāo)[5-8]。血清癌胚抗原（CEA）的含量與胃癌的分期和轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等惡性行為相關(guān)[9，10]。本研究檢測了238 例消化道病變患者血清中TK1 水平并進(jìn)行術(shù)后隨訪，以探究TK1 能否作為消化道早期腫瘤篩查的標(biāo)志物以及其與術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的相關(guān)性。并探討TK1 對于診斷消化道腫瘤的敏感性及TK1 與CEA 的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年3 月-2019 年12 月在諸城市人民醫(yī)院行消化道手術(shù)的238 例消化道病變患者。將消化道早期腫瘤患者77 例設(shè)為早期組，消化道中晚期腫瘤患者85 例設(shè)為中晚期組，另選消化道良性疾病患者76 例設(shè)為對照組。中晚期組男43例，女42 例；年齡35～82 歲，平均年齡（56.31±5.82）歲；癌癥類型：胃癌40 例，腸癌36 例，食管癌9 例。早期組男39 例，女38 例；年齡33～78 歲，平均年齡（54.72±4.65）歲；癌癥類型：胃癌56 例，腸癌15 例，食管癌6 例。對照組男40 例，女36 例；年齡25～78歲，平均年齡（55.24±5.17）歲；疾病類型：炎性病變55 例，息肉21 例。3 組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），可比較。本研究經(jīng)諸城市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，患者及家屬均對本研究知情，并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) ①中晚期腫瘤組、早期組及對照組患者均經(jīng)內(nèi)窺鏡確診；②無心腦血管、神經(jīng)精神等其它影響試驗結(jié)果的疾?。虎劬鶠槭状未_診并未經(jīng)手術(shù)及其他治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①月經(jīng)期女性；②患有血液系統(tǒng)疾病者及實驗中途可能退出的患者。

1.3 方法 患者進(jìn)行TK1 檢測前1 d 20∶00 后禁止飲食及飲水，并于次日清晨采集患者空腹靜脈血2～3 ml，經(jīng)過3600 r/min 離心10 min，所有樣品均在當(dāng)天完成檢驗。使用深圳華瑞同康生物科技有限公司提供的TK1 診斷試劑盒進(jìn)行TK1 檢測，操作流程嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行，使用免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法測定TK1。腫瘤患者由普外科醫(yī)生評估后接受常規(guī)手術(shù)治療，早期組患者于內(nèi)鏡下清楚評估病灶，對照組患者密切隨診，輔助治療，無臨床癥狀，不予手術(shù)治療。CEA 采用免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法，應(yīng)用ADVIACentaurCP 化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測定。當(dāng)TK1＞2 μmol/L，CEA＞15 IU/ml判斷為陽性結(jié)果。

1.4 評價指標(biāo) 比較中晚期腫瘤組、早期組、對照組術(shù)前TK1 值，中晚期組和早期組術(shù)后TK1 值，分析TK1 對于診斷消化道腫瘤的敏感性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料采用（P＜0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組TK1、CEA 表達(dá)水平比較 免疫印跡增強化學(xué)發(fā)光法分析顯示，中晚期組術(shù)前TK1 水平為（2.43±2.01）pmol/L，早期組為（2.03±1.69）pmol/L，均高于良性組的（1.13±0.78）pmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）；事后分析表明，中晚期組與早期組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。

2.2 腫瘤組患者TK1 與腫瘤分型的關(guān)系 在消化道腫瘤患者中TK1 的表達(dá)與腫瘤的類型（胃癌、腸癌、食管癌）無關(guān)（=0.463，=0.643）。

2.3 中晚期組與早期組術(shù)后TK1 水平與病情嚴(yán)重性分析 中晚期組術(shù)后TK1 水平為（2.89±1.97）pmol/L，高于早期組的（2.06±1.63）pmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=2.073，=0.041）。

2.4 TK1 與CEA 的相關(guān)性及TK1 的診斷價值分析TK1 與CEA 呈正相關(guān)（=0.312，=0.028）；以血清TK1 水平升高來診斷消化道腫瘤，繪制ROC 曲線結(jié)果顯示，AUC=0.746，=0.002，診斷消化道腫瘤的敏感度和特異度較高，分別為0.85、0.84，對于消化道腫瘤具有診斷意義，見圖1。

圖1 血清TK1 水平的ROC 曲線

3 討論

消化道腫瘤是我國常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢，并困擾著越來越多的年輕患者。飲食不規(guī)律、大量飲酒、吸煙、高鹽、高脂飲食、腌制食物均可能是誘發(fā)消化道腫瘤的原因[11，12]。內(nèi)窺鏡檢查的局限性和不普遍性使得人們無法在早期對腫瘤進(jìn)行檢查和治療[4]，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)過度增殖。因此，新的治療技術(shù)在不斷地發(fā)展和創(chuàng)新，其中免疫治療在胃腸道腫瘤治療方面正處于一個新的時代。然而，免疫抑制性腫瘤微環(huán)境（TME）的復(fù)雜性和多樣性給胃腸道實體瘤的免疫治療帶來了許多困難[13]。腫瘤與其微環(huán)境之間的持續(xù)串?dāng)_是腫瘤生存和最終患者死亡的關(guān)鍵。

TK1 是一種DNA 挽救途徑酶，定位于染色體17q23.2～q25，參與了胸腺嘧啶的再生，用于DNA合成和DNA 損傷。有研究表明，TK1 可以影響TME，進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展。TME 是由腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞組成的復(fù)雜環(huán)境，其中許多因素可以促進(jìn)惡性進(jìn)程。而且TME 參與免疫細(xì)胞的激活和募集、血管生成等[14-16]。三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）是TME 的主要生化成分之一，它能促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展或抑制腫瘤的發(fā)生[17]。TK1 通過從ATP 轉(zhuǎn)移磷酸鹽將dThd 轉(zhuǎn)化為dTMP，用于DNA 合成和轉(zhuǎn)錄。TK1 對于DNA 損傷后的細(xì)胞修復(fù)至關(guān)重要[18，19]。TK1 是細(xì)胞周期依賴性標(biāo)志物，在非增殖細(xì)胞中不存在[9，10]。癌癥患者體內(nèi)處于S 期、G2期的細(xì)胞比例高，導(dǎo)致機體細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量TK1 釋放入血，因此在健康人中TK1 水平很低或無法檢測到，當(dāng)發(fā)生惡性腫瘤時，血清中TKI 的水平迅速升高至遠(yuǎn)來的百倍至千倍，由此血清TK1 被用作腫瘤的生物標(biāo)志物[20-23]。TK1 可通過血清進(jìn)行檢測，與傳統(tǒng)內(nèi)窺鏡檢測比較，具有患者依從性高、方便快捷等優(yōu)點，對于腫瘤的及早發(fā)現(xiàn)具有重要意義[19]。

本研究結(jié)果表明，術(shù)前中晚期組與早期組患者TK1 水平與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；事后分析表明，晚期組與早期組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明TK1 水平可輔助臨床進(jìn)行早期惡行消化系統(tǒng)腫瘤診斷和分期。術(shù)后中晚期組TK1 水平高于早期組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明在消化道惡行腫瘤中，病情嚴(yán)重程度與TK1 水平可能有關(guān)，且臨床分期越晚，TK1 水平越高，對消化道腫瘤的診斷具有較高的臨床應(yīng)用價值。血清TK1 用于診斷消化道腫瘤的敏感性較高，并且TK1 的高表達(dá)與CEA 的表達(dá)呈正相關(guān)，提示TK1 在消化道腫瘤的診斷、預(yù)后等方面有更高的價值和前景。

綜上所述，TK1 作為重要的腫瘤標(biāo)志物，有助于盡早地發(fā)現(xiàn)消化道腫瘤，提高鑒別癌前病變和評估腫瘤進(jìn)展，從而實現(xiàn)腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。