雞白血病的發(fā)生及防控

賀學(xué)龍

(寧蒗彝族自治縣永寧坪鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 寧蒗 674301)

0 引言

禽白血病(avian leukosis，AL)是由禽白血病病毒(avian leukosis viruses，ALV)引起家禽不同組織、細(xì)胞的良性或惡性致瘤性疾病[1-2]。AL 除導(dǎo)致腫瘤外，還會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制，增加家禽對(duì)其他微生物的易感性以及后續(xù)對(duì)其他疾病疫苗接種的失敗率，同時(shí)，還將降低家禽生長速度、蛋重、產(chǎn)蛋量、受精率和孵化率等，從而造成養(yǎng)禽業(yè)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。目前沒有有效的疫苗或藥物來預(yù)防或控制ALV 感染，以淘汰ALV 陽性種雞和凈化雞群來阻斷垂直和水平傳播，是目前雞場防控AL 發(fā)展的有效途徑[5]。

1 病原

ALV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科中的α逆轉(zhuǎn)錄病毒屬[4]，該病毒含有逆轉(zhuǎn)錄酶的RNA病毒，RNA可逆轉(zhuǎn)錄為DNA，即在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下，以病毒RNA為模板，合成互補(bǔ)的負(fù)鏈DNA，以形成RNA-DNA中間體，而中間體中的RNA 被RNA酶水解，同時(shí)在DNA聚合酶的作用下，使單鏈DNA復(fù)制形成雙鏈DNA的過程[6]。

ALV病毒粒子近似于球形，可分為3層：類脂質(zhì)囊膜層、病毒內(nèi)膜層和核心層[2，7]。ALV基因組大小約為7.3 kb，每個(gè)基因組分子中均包含3個(gè)主要編碼基因：gag基因編碼ALV特異性抗原(衣殼蛋白p27)和其他內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白(基質(zhì)蛋白、核衣殼蛋白等)；pol基因編碼RNA依賴性DNA聚合酶；env基因編碼囊膜糖蛋白(gp 跨膜蛋白和gp85表面蛋白)[7]。這3個(gè)編碼基因在基因組上的排列為5’LTR-leader-gag/pro-pol-env-3’LTR，LTR是編碼區(qū)兩端的長末端重復(fù)序列也是非編碼區(qū)，包含有與病毒RNA的復(fù)制和翻譯有關(guān)的順式作用元件和轉(zhuǎn)錄控制元件[8-9]。

ALV根據(jù)病毒表面gp 85包膜蛋白結(jié)構(gòu)、宿主范圍和與中和抗體的交叉反應(yīng)性，可分為11個(gè)亞群(A-K)[10]。不同的禽類可能感染不同亞型的ALV，而感染雞的禽白血病病毒主要有7個(gè)亞群，包括A至E、J和K[1]。其中，A、B、C、D、J和K是外源性ALV，E亞群是內(nèi)源性ALV，它可通過孟德爾遺傳垂直傳播，存在遺傳缺陷，其致病性很低或無，但會(huì)干擾外源性ALV的檢測結(jié)果，從而給根除外源性ALV造成很大的困難[4，10]。A和B亞群是引起淋巴性白血病和肉瘤的常見病原病毒，而C和D亞群目前鮮有報(bào)道[3]。自1988年在英國從商用肉雞中分離出第一株禽白血病病毒亞群J(ALV-J)以來，它迅速傳播到世界各地，在雞群中具有較強(qiáng)的致病性和傳播性，它與ALV其他亞群相比更容易導(dǎo)致雞患腫瘤，如造血系統(tǒng)惡性腫瘤、髓系白血病和血管瘤等[11]。此外，ALV-J還與其他雞病毒因子如馬克立氏病毒、網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增多癥病毒或雞傳染性貧血病毒之間發(fā)生共同感染。ALV-K是近些年發(fā)現(xiàn)的新亞群。王鑫 等[12]于2012年從我國本土蘆花雞中分離出3株新的ALV毒株(JS11C1、JS11C2和JS11C3)其gp85序列與其他已知亞群之間的同源性較低，因此命名為ALV-K。該亞群會(huì)引起亞臨床感染，導(dǎo)致雞群生長緩慢和免疫器官萎縮，進(jìn)而引起免疫抑制[10]。Zhao et al.[10]發(fā)現(xiàn)由華南黃羽肉雞中分離出的6株ALV-K毒株具有與內(nèi)源性ALV相似的序列，并推測ALV-K能從健康雞中分離出來可能是由于其病毒復(fù)制能力弱和致病性低，使其能夠輕易逃脫檢測并垂直傳播。

2 流行病學(xué)

2.1 危害

民以食為天，為滿足人們對(duì)肉產(chǎn)品量的需求，養(yǎng)禽業(yè)為提高生產(chǎn)效率朝集約化養(yǎng)殖模式發(fā)展，這也使得AL感染日益凸顯，給全球養(yǎng)禽業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，并導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品不安全。ALV引起雞群淋巴樣、髓樣白細(xì)胞病以及其他組織器官中的致瘤性疾病的發(fā)生[2]。在商業(yè)化經(jīng)營的雞群中由ALV感染除造成的死亡率有1%～20%，其還會(huì)引起亞臨床疾病，從而降低種群生產(chǎn)力，如體重、蛋重、產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率等[3]，更為重要的是，該病毒可通過種蛋從母雞傳染給后代，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展造成重大影響。

2.2 自然宿主和實(shí)驗(yàn)宿主

ALV的自然宿主是雞，也在野雞、野鳥、鵪鶉、鴨等禽類中分離到該病毒[13]。為了AL的診斷以及ALV的相關(guān)研究，在實(shí)驗(yàn)室中需要通過實(shí)驗(yàn)宿主來分離培養(yǎng)ALV，而目前已有的實(shí)驗(yàn)宿主系統(tǒng)有細(xì)胞培養(yǎng)(雞胚成纖維細(xì)胞以及其可傳代細(xì)胞系DF1細(xì)胞)、雞胚(其他禽類胚)以及無特定病原體雞或其他禽類[3]。

2.3 易感動(dòng)物及傳染源

AL病變和死亡多發(fā)生于禽類性成熟后，尤其是開產(chǎn)期，即5～6月齡以上，但ALV最易感的是雛雞，特別是垂直感染的雛雞或出殼后不久的雛雞[3]。ALV的傳染源是病雞、隱性帶毒雞以及帶毒種蛋[2，6，8]。

2.4 傳播途徑

ALV的傳播方式主要有3種。①水平傳播，即通過與帶毒病雞或病雞分泌物的直接接觸，也可是間接接觸受感染的物質(zhì)，還可能通過飼養(yǎng)員被污染的手在給雞群輸精、斷喙和接種疫苗等過程中感染，該傳播方式除ALV-J外，其余亞群僅引起短暫的敗血癥[14]。②垂直傳播，即ALV 感染通過雞蛋從母體傳遞給后代，經(jīng)常導(dǎo)致雛雞出現(xiàn)慢性病毒血癥[14]。③遺傳傳播，主要是內(nèi)源性的逆轉(zhuǎn)錄病毒的傳播[5]。

2.5 致瘤機(jī)制

根據(jù)病毒潛伏期和誘發(fā)腫瘤的時(shí)間差異，可將ALV分為慢性致腫瘤型病毒和急性致腫瘤病毒。其中，慢性致腫瘤病毒需要經(jīng)數(shù)月甚至更長的時(shí)間才能形成腫瘤，經(jīng)病毒感染后，病毒在復(fù)制過程中通過LTR基因整合在宿主細(xì)胞基因組原癌基因的上下游或中間，引起插入性突變，使宿主細(xì)胞的原癌基因被LTR中的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子激活，進(jìn)而引起細(xì)胞的腫瘤基因的過表達(dá)從而產(chǎn)生腫瘤[15]。急性致瘤性病毒基因組中含有致瘤基因，其不受正常調(diào)控過程的控制，該基因的過表達(dá)產(chǎn)物在數(shù)天或數(shù)周內(nèi)即可引發(fā)腫瘤[15]。

2.6 臨床特征

同一病毒亞群不同毒株存在不同的臨床特征，而ALV存在多種亞型，其引起的發(fā)病特征存在差異[2，16]。常見的ALV感染的主要臨床癥狀為免疫抑制、精神不振、雞冠和肉髯蒼白、腹瀉、食欲逐漸降低甚至廢絕、生長遲緩、產(chǎn)蛋量低、受精率和孵化率下降等癥狀，將病雞剖檢后，可見小腸結(jié)節(jié)明顯增厚，肝臟、腎臟和脾臟等器官明顯腫大且有壞死灶，甚至形成腫瘤；還可引起多種上皮性腫瘤和內(nèi)皮腫瘤，如胰腺癌、肝癌、血管瘤、內(nèi)皮腫瘤等[1，2，6，8，14]。

3 檢測方法

禽白血病病毒作為一種RNA病毒，它具有高度可變性，且在內(nèi)源性病毒影響下，一些檢測結(jié)果呈現(xiàn)假陽性，使得可靠的檢測變得困難[11]。目前，檢測ALV的方法主要有病毒分離與培養(yǎng)、Elisa、常規(guī)PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫熒光檢測(IFA)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)[17]。

病毒分離與培養(yǎng)是檢測ALV的黃金標(biāo)準(zhǔn)，但耗時(shí)長，培養(yǎng)成纖維細(xì)胞或DF-1細(xì)胞需要培養(yǎng)7 d以上才能獲得最終結(jié)果，且需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和實(shí)驗(yàn)場所[17]。p27抗原的Elisa是鑒別ALV的常用方法，但其無法區(qū)分亞群[17]。常規(guī)PCR、qPCR和IFA可用于區(qū)分亞組，但更適用于實(shí)驗(yàn)室診斷，因其需要復(fù)雜的儀器設(shè)備，如普通PCR 儀、熒光定量PCR儀和熒光顯微鏡等。LAMP檢測需要在水浴或培養(yǎng)箱中進(jìn)行63 ℃反應(yīng)[17]。

在已有檢測方法的基礎(chǔ)上，研究人員仍在不斷研究一些能夠更加實(shí)用、方便、快捷的檢測方法，如Wang et al.[18]于2019 年利用抗p27單克隆抗體開發(fā)了一種簡單快速的熒光微球免疫層析試紙用于檢測ALV，是一款適用于現(xiàn)場對(duì)雞群進(jìn)行低成本、快速檢測的方法。Wang et al.[11]于2021年對(duì)特異性單克隆抗體的成功制備可作為檢測和診斷新型ALV-J的有效試劑。Wu et al.[17]于2022年開發(fā)了逆轉(zhuǎn)錄重組酶輔助擴(kuò)增試驗(yàn)(RT-RAA)是一種恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測時(shí)間短、操作簡單、無需昂貴儀器等優(yōu)點(diǎn)，如果與熒光探針結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)檢測和快速現(xiàn)場檢測。

4 防控措施

4.1 采取凈化措施

《國家中長期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012-2020)》和《全國肉雞遺傳改良計(jì)劃(2014-2025)》均將AL歸為優(yōu)先防控動(dòng)物疫病和首批動(dòng)物疫病凈化對(duì)象[2]。對(duì)于無有效疫苗和藥物防治AL的情況下，對(duì)雞群進(jìn)行凈化是控制和預(yù)防該病發(fā)生發(fā)展的有效措施。

對(duì)于原種雞場的凈化主要考慮兩方面，一是要盡最大可能檢出和淘汰每個(gè)世代外源性ALV的帶毒雞，對(duì)每個(gè)世代凈化程度越高，整個(gè)凈化過程耗費(fèi)周期越短，花費(fèi)也就越低；二是由于ALV檢測方法多樣，且沒有哪個(gè)方法能夠一次不漏完全檢出，所以需要采用不同方法多次檢測。一個(gè)世代需要完成對(duì)23～25周齡開產(chǎn)初期的留種雞、40～45周齡留種前的雞、種蛋、出殼雛雞胎糞、6～8周齡育雛后期的雞以及選留的后備種雞進(jìn)行ALV的檢測[19]。

4.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，有效切斷ALV的水平傳播。一是完善消毒體系，定期對(duì)雞舍內(nèi)外環(huán)境、雞籠、免疫接種工具、人工采精和受精器械等設(shè)施設(shè)備進(jìn)行消毒，飼養(yǎng)員在抓雞、翻肛等操作過程中勤換手套并進(jìn)行消毒；二是合理規(guī)劃雞舍，避免接觸污染；三是提高家禽對(duì)病毒的抵抗力，合理補(bǔ)充飼糧中的營養(yǎng)成分，定期接種疫苗；四是對(duì)引入雞種和定期接種的疫苗進(jìn)行檢測[2，19]。

5 結(jié)語

隨著全球人口的持續(xù)增長，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)必須在提高質(zhì)量的同時(shí)確保產(chǎn)量的持續(xù)增加。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，在動(dòng)物生產(chǎn)過程中就必須預(yù)防和控制好各類疾病暴發(fā)。目前，仍沒有可有效預(yù)防禽白血病病毒感染的疫苗或藥物，同時(shí)，外源性禽白血病病毒的高變異性和不斷出現(xiàn)的新亞群或毒株，這使得檢測變得越來越困難，因此，控制和根除禽白血病病毒仍是家禽生產(chǎn)中的重大挑戰(zhàn)之一。