茯苓化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量控制研究進(jìn)展

葉青，劉東升，王蘭霞，?，劉競，張邁娜，高嘉雯，朱旭江

（1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000； 2.甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730030；3.國家藥品監(jiān)督管理局中藥材及飲片質(zhì)量控制重點實驗室，甘肅 蘭州 730030）

中藥材茯苓是真菌茯苓［Poria cocos（Schw）Wolf］的干燥菌核，來源于多孔菌科［1］，具有很強(qiáng)的寄生性，常寄生于松科植物赤松和馬尾松等植物的根上，性味甘、淡、平，主入心、腎、肺、脾，可利水消腫、健脾寧心，臨床主要治療水腫、痰飲、心悸等［2］，因其用藥部位不同，將加工后的茯苓分為赤茯苓、白茯苓、茯苓皮以及茯神四種，炮制后的茯苓分為茯苓皮、茯苓塊、茯苓粉、赤茯苓、朱茯苓、炒茯苓和茯苓片。宋代《開寶本草》《圖經(jīng)本草》對茯苓記載為赤和白兩種［3-4］，《太平惠民和劑局方》中則為白茯苓、赤茯苓、茯神、茯苓皮，《紹興本草》中將茯苓和茯神分列為兩藥［5］。明代《本草集要》在“白色者補， 赤色者利”基礎(chǔ)上又加上了“赤者破結(jié)氣，如小便多及汗多、陰虛者不宜服”［6］?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》把茯苓也叫“茯菟”，這個別稱來源于“上有菟絲，下有茯苓”。在《史記·龜策列傳》也把茯苓稱作“伏靈”。明清以前，茯苓就被廣泛使用和記載，《本草圖經(jīng)》載茯苓可以經(jīng)常服用，“補益殊勝”，但此書沒有記載調(diào)中止瀉和敷瘡毒的作用，而在《本草拾遺》中則增加了這兩個功用。明清時期，《滇南本草》指出茯苓可以祛風(fēng)濕、通利關(guān)節(jié)，《本草綱目》中記載“治拘攣骨痛”，《萬病回春》中載有茯苓的養(yǎng)血湯藥方，茯苓可與肉桂、當(dāng)歸等同用。另外許多民間偏方中也有茯苓，以《浙江常用民間草藥》為例，將茯苓刮去外皮并稱取半斤，加上豬肉一起燉爛，分多次服用，可以治療風(fēng)濕骨痛?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)茯苓可用于銀屑病、抗腫瘤等，茯苓與天冬、麥冬等藥材配伍后可以制成扶正養(yǎng)陰湯，對原發(fā)性支氣管癌有很好的療效［7］。

1 化學(xué)成分

1.1 萜類化合物

現(xiàn)在從茯苓中分離得到的三萜類化合物共有50余種，多數(shù)為四環(huán)三萜類化合物［8］。有6種基本物質(zhì)骨架，分別是羊毛甾－7，9（11）－二烯型、7，8－脫氫羊毛甾烷型、開環(huán)羊毛甾烷型、羊毛甾烷型、齒孔甾烷型和開環(huán)齒孔甾烷型。其中報道具有活性的共有18個，主要分為7種［9-10］，包括羊毛甾－7，9（11）－二烯型三萜、齊墩果烷型三萜、羊毛甾－8－烯型三萜、三環(huán)二萜類、3，4－開環(huán)－羊毛甾－8，11－烯型三萜、3，4－開環(huán)－羊毛甾－8－烯型三萜和羊毛甾－8－烯型三萜。董遠(yuǎn)文［11］利用柱層析薄層以及高效液相方法分離純化茯苓得到去氫土莫酸等7種化合物；易中宏［12］通過分離茯苓三萜化合物得到茯苓酸和豬苓酸C；王利亞等［13］通過乙醚、乙醇萃取茯苓并經(jīng)光譜分析找到了β－香樹脂醇乙酸酯，目前該物質(zhì)為首次發(fā)現(xiàn)；楊鵬飛等［14］發(fā)現(xiàn)茯苓中存在一些新的化學(xué)成分，例如齊墩果酸以及齊墩果酸乙酸酯等。

目前從茯苓中得到的二萜類化合物為數(shù)不多，包括去氫松香酸甲酯［15］以及7－oxo－15－h(huán)ydroxydehydroabietic acid、dehydroabietic acid methylester［15-17］。

1.2 多糖類

根據(jù)其多糖結(jié)構(gòu)，茯苓主要分為兩大類，一類是主鏈為β－（1→3），附屬結(jié)構(gòu)為β－（1→6）的葡聚糖支鏈，另一類是以甲基戊糖、五碳醛糖、甘露糖、半乳糖等多種糖類構(gòu)成［18］。目前報道的11個多糖成分中，有D－Glucan類均多糖和雜多糖，雜多糖成分中含有果糖等成分，多為1→3連接［19］。

1.3 其他類化合物

包括麥角甾醇［20］、麥角甾醇過氧化物（1）［21］等。還有L－尿苷、檸檬酸三甲酯、胡蘿卜苷［22］。金屬元素鈣、鎂、銅等和揮發(fā)油如苯甲醛、戊基呋喃等以及氨基酸、脂肪等其他成分。

2 藥理作用

2.1 利尿作用

茯苓的利尿作用具有特異性。所謂特異性，其原理是收集體內(nèi)多余的水分通過腎臟代謝排出體外［23］。茯苓利尿的有效成分是茯苓素，是一種四環(huán)三萜類化合物。寧康健等［24］通過對家兔注射不同劑量的茯苓水煎醇沉液，發(fā)現(xiàn)茯苓對家兔有正向的利尿作用。

2.2 保肝作用

通過文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，茯苓中起保肝作用的成分是羧甲基茯苓多糖［25］。段會平等［26］研究羧甲基茯苓多糖在2.2.15細(xì)胞株培養(yǎng)中抗乙型肝炎病毒的作用，發(fā)現(xiàn)此成分療效高于臨床的抗病毒的阿昔洛韋，證實了羧甲基茯苓多糖具有保肝的作用。陳春霞［27］通過小鼠實驗也證實了茯苓中的羧甲基茯苓多糖具有保肝作用。張先淑等［28］通過研究茯苓三萜對小鼠的肝損傷的作用，發(fā)現(xiàn)與模型組相比茯苓三萜治療組能夠顯著降低小鼠血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性，這表明茯苓三萜也是茯苓保肝的有效成分之一。

2.3 抗炎作用

茯苓可以治療不同動物模型下的急性或慢性炎癥，其抗炎效果認(rèn)可度極高。汪電雷等［29］研究茯苓總?cè)茖甭匝装Y的抑制作用，發(fā)現(xiàn)茯苓總?cè)茖Χ妆秸T導(dǎo)的小鼠腫脹等具有明顯的抑制作用。侯安繼等［30］發(fā)現(xiàn)，茯苓多糖對二甲苯引發(fā)的小鼠急性炎癥和無菌棉球引發(fā)的大鼠慢性炎癥都有明顯的抑制作用，表明茯苓多糖也是茯苓的抗炎作用成分之一。

2.4 胃腸功能作用

茯苓的水浸劑可以防止大鼠實驗性胃潰瘍，可以松弛家兔的離體腸肌，研究表明茯苓三萜及其衍生物可抑制無水硫酸銅導(dǎo)致的嘔吐［31］。茯苓配伍甘草，可以治療功能性消化不良，動物實驗表明其體內(nèi)5－羥色胺含量增加，胃腸蠕動明顯加快，改善了大鼠的功能性消化不良［32］。

2.5 免疫功能作用

鄧媛媛等［33］發(fā)現(xiàn)茯苓調(diào)節(jié)免疫功能的有效成分為三萜類、水溶性多糖以及酸性多糖，課題組發(fā)現(xiàn)無論是茯苓醇提物質(zhì)還是水溶性或者堿溶性部位，這些部位對小鼠內(nèi)腹腔吞噬細(xì)胞的吞噬百分率和指數(shù)均有促進(jìn)作用，血清內(nèi)含有的免疫因子IL－2和TNF－α也有所增加。張秀軍等［34］通過實驗發(fā)現(xiàn)，小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖可通過羧甲基茯苓多糖靜脈注射和體外給藥實現(xiàn)，該方法具有明顯的促進(jìn)作用，可以鞏固淋巴和巨噬細(xì)胞功能，以提高免疫作用。另外，茯苓中三萜、水溶性多糖以及酸性多糖成分都可以改善免疫功能，使小鼠血清中免疫因子增加［35］。

2.6 鎮(zhèn)靜作用

李明玉等［36］發(fā)現(xiàn)，高劑量茯苓水提液能明顯增加小鼠睡眠時間和小鼠入睡天數(shù)，具有明顯鎮(zhèn)靜催眠作用。游秋云等［37］發(fā)現(xiàn)，茯苓、茯神等無直接催眠作用，但其水煎液具有協(xié)同戊巴比妥鈉的中樞抑制作用，進(jìn)一步驗證了茯苓水煎液的鎮(zhèn)靜催眠作用。趙天國［38］通過設(shè)立空白對照、陽性對照以及茯苓多糖高、中、低三個劑量組來觀察茯苓多糖對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茯苓多糖高、中、低三個劑量組協(xié)同本巴比妥作用后均不同程度增加了小鼠的睡眠持續(xù)時間，抗驚厥率也不同程度地增加，可見茯苓多糖對小鼠有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。

2.7 抗腫瘤作用

惡性腫瘤作為當(dāng)今危害人體健康的疾病之一，因此防治惡性腫瘤已經(jīng)成為了關(guān)鍵問題。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腫瘤的成因是機(jī)體正氣不足，而后邪氣踞之所致。茯苓藥性溫和，功能利水滲濕、寧心安神，又可扶正祛邪。研究表明，硫酸化茯苓多糖能增強(qiáng)對NK細(xì)胞的殺傷活力，增殖淋巴細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體特異性免疫功能，達(dá)到抗腫瘤的效果［39］。蔣瑜［40］經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，茯苓中茯苓醇可以抗乳腺癌，藥理實驗驗證了小鼠的腫瘤在茯苓醇的作用下增長變緩，最終降低了腫瘤的重量，對腫瘤小鼠肝腎具有良好的保護(hù)作用。林嘉［41］通過對茯苓總?cè)普T導(dǎo)人結(jié)腸癌RKO細(xì)胞凋亡的研究，發(fā)現(xiàn)茯苓可以抑制細(xì)胞的增殖反應(yīng)（代謝活力），其機(jī)制大概與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有聯(lián)系，其途徑主要是線粒體凋亡途徑，表明茯苓三萜在結(jié)腸癌治療中具有廣闊的應(yīng)用前景。宋波等［42］研究茯苓多糖和修飾的羧甲基茯苓多糖的抗腫瘤活性，并采用MTT法測定茯苓多糖和羧甲基茯苓多糖對人肝癌細(xì)胞HepG－2的毒性反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種成分均對肝癌細(xì)胞有抑制作用，其中羧甲基多糖對肝癌細(xì)胞抑制作用更強(qiáng)，證明了茯苓中羧甲基茯苓多糖具有良好的生物活性。

2.8 抗衰老作用

侯安繼等［30］觀察茯苓多糖對正常小鼠與老齡小鼠抗寒和抗疲勞實驗的影響，結(jié)果證明了茯苓多糖可以減緩小鼠衰老。天然的茯苓酸是一種三萜類化合物，中草藥茯苓、靈芝等中均含有此成分，可升高肺成纖維細(xì)胞的細(xì)胞毒性，增加自噬相關(guān)蛋白表達(dá)能力，可以減慢衰老［43］。

2.9 降血脂作用

李景輝等［44］研究茯苓和維生素對單純性肥胖大鼠體重及血脂影響，發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠體質(zhì)量在茯苓的作用下明顯降低，這一結(jié)論可以通過其體內(nèi)甘油三酯和高密度脂蛋白膽固醇這兩個指標(biāo)看出，給藥后均有所下降，這一發(fā)現(xiàn)證明了茯苓具有減肥和降脂的作用，今后可以進(jìn)行相關(guān)減肥和降脂的藥物研發(fā)。鄭彩云［45］給四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病模型大鼠灌胃茯苓多糖，觀察灌胃后5、15、30 d后血糖濃度以及肝臟中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茯苓多糖可減緩實驗大鼠體質(zhì)量負(fù)增長，丙二醛含量降低，超氧化物歧化酶含量升高，和模型組差異較大，可以降低大鼠的血糖，與處理濃度時間呈正相關(guān)，幾乎不影響谷胱甘肽過氧化物酶的含量，說明茯苓多糖有降血糖和抗脂質(zhì)過氧化作用。楊瑾等［46］驗證了茯苓胞外多糖在一定濃度下可促進(jìn)高胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗速率，并對此濃度具有依賴性，其團(tuán)隊還發(fā)現(xiàn)與其他藥物配合使用優(yōu)于單獨使用茯苓胞外多糖。

2.10 其他作用

茯苓還具有抗病毒抗抑郁、抑菌等作用，羥甲基化多糖對乙肝病毒、艾滋病病毒等具有一定的作用，但其作用機(jī)制尚不清楚［47］。陳可琢等［48］以慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)模式為大鼠建模，用低、中、高（0.1、0.3、0.5 g/kg）劑量的茯苓酸性多糖給大鼠灌胃14 d，實驗顯示高、中、低三種劑量均可一定程度上抵抗抑郁，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和NLRP3炎癥小體信號通路有關(guān)。別蒙等［49］探究取代度不同的CMP的抑菌狀況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，取代度越大，CMP對食源性致病菌的抑制越好，與革蘭陰性菌比較，革蘭陽性菌抑菌能力要高于革蘭陰性菌。

3 質(zhì)量控制

3.1 茯苓藥材質(zhì)量控制

從目前大量的中藥臨床組方中來看，茯苓的配伍率已超過70%，茯苓藥材多數(shù)依靠藥農(nóng)或公司人工種植，野生茯苓因為植被破壞而大量減少，這就導(dǎo)致品質(zhì)出現(xiàn)差異，因此解決品質(zhì)問題迫在眉睫［50］?！吨腥A人民共和國藥典》（2020年版一部）茯苓項下只有性狀、鑒別、檢查和浸出物，缺少含量測定項，缺乏對藥材品質(zhì)優(yōu)劣、質(zhì)量高低進(jìn)行判別，不能有效地控制茯苓藥材、飲片及其相關(guān)制劑的整體質(zhì)量［51］。由于其所含成分較多，影響其質(zhì)量的因素較多，會影響最終的臨床療效，因此要找到一種可以全面檢測中藥材有效成分的檢測方法。

3.2 茯苓中化學(xué)成分的質(zhì)量控制

萬鳴等［52］確立了測定茯苓藥材中7種三萜含量方法，還比較了不同產(chǎn)地茯苓的不同，結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異不明顯。徐正龍［53］采用高效液相色譜法同時測定了存在于茯苓中的化學(xué)成分去氫土莫酸、去氫茯苓酸以及松苓新酸，方便簡便直接，具有很強(qiáng)的準(zhǔn)確性，重復(fù)性好，可以用于茯苓的品質(zhì)管理。田雙雙等［7］創(chuàng)建了茯苓三萜類成分包括去氫土莫酸等10個的特征圖譜，具有正相關(guān)性。張冠華等［54］建立了基于UPLC－MS結(jié)合代謝組學(xué)方法的同時定性和定量方法，對三萜化合物的四部分分布進(jìn)行了解釋。

4 小結(jié)

茯苓在我國分布范圍較廣，資源豐富，將中醫(yī)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)以及藥理學(xué)相結(jié)合在一起，對茯苓的開發(fā)利用有重大意義。而茯苓對泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)、免疫系統(tǒng)等具有一定的藥理作用，但部分藥理作用機(jī)制尚不明確，需要后續(xù)進(jìn)一步研究。質(zhì)量控制方面，現(xiàn)有研究可以從指紋圖譜和含量測定方面進(jìn)行控制，但由于研究指標(biāo)成分和研究方法不同，導(dǎo)致所獲得的含量測定方法等方面存在差異，下一步應(yīng)細(xì)化研究指標(biāo)成分和方法，給茯苓質(zhì)量控制提供參考，通過增加含量測定及指紋圖譜的方法，更加精確地控制質(zhì)量，對茯苓的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，以最大程度提取有效成分，讓茯苓鎮(zhèn)靜催眠、免疫等藥理作用發(fā)揮充分，藥理學(xué)研究應(yīng)加入細(xì)胞、分子或基因等現(xiàn)代技術(shù)，為揭示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。