雞新城疫的診斷與防控技術

謝 旖，寧靜媛

（ 益陽職業(yè)技術學院，湖南 益陽 413055 ）

雞新城疫又名亞洲雞瘟、偽雞瘟，是由新城疫病毒引起的一種急性、烈性傳染病，發(fā)病率和病死率可高達90%[1]。雞新城疫一年四季均可發(fā)生，春秋兩季較多，在易感雞群中傳播迅速，傳播途徑主要是呼吸道，其次是消化道感染。雞感染新城疫后24 h，口、鼻分泌物和糞便中開始排出病毒。自1927年，新城疫病毒首次在家禽中分離得到后一直是國內(nèi)外學者研究和關注的重點內(nèi)容。新城疫對家禽養(yǎng)殖的危害十分嚴重，《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020）》將其列為重點防范的一類動物疫病。因此，提升新城疫的檢測技術和加大新城疫的防治力度尤為關鍵。本文介紹了雞新城疫的流行特點、臨床癥狀、病理變化及實驗室檢測方法，提出加強日常管理以及采取科學疫苗免疫、中西醫(yī)結合防治等綜合防治措施，以期為雞新城疫的防控提供參考。

1 雞新城疫流行特點

新城疫病毒屬于副黏病毒科、正禽腮腺炎病毒屬的禽副黏病毒Ⅰ型（APMV-1），病毒粒子呈圓形，核衣殼呈螺旋對稱，大小為120～300 nm，多數(shù)在180 nm 左右，基因組為不分節(jié)段的單股負鏈RNA[1]。新城疫病毒基因總長度約為15 kb，由可編碼核衣殼蛋白、血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白、基質(zhì)蛋白、融合蛋白、磷蛋白、大分子蛋白的6個基因組組成[2]。新城疫因致病毒株不同，所引起的癥狀和病變等也存在很大差異，目前新城疫流行株優(yōu)勢基因型大部分是Ⅶ型病毒[3]。

近年來，養(yǎng)雞場已經(jīng)開始重視雞新城疫的預防措施，也加大了雞新城疫疫苗在雞群中的普及率，雞體內(nèi)新城疫抗體水平有所加強[4]。對武漢市部分雞場進行新城疫定點流行病學調(diào)查，檢測新城疫4個季度免疫抗體水平，免疫抗體合格率在76.4%～98.8%，達到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的免疫抗體合格率70%的標準[5]。但也有個別雞場因常用疫苗與基因Ⅶ型新城疫病毒基因型和抗原型不匹配，導致其清除病毒的能力弱，雞群新城疫抗體水平不高且不均勻，免疫效果差，免疫后受強毒感染，雞群仍然可能會發(fā)生非典型性新城疫[6-7]。雞非典型新城疫無太大的季節(jié)性，一年四季均可病發(fā)，發(fā)病雞與帶毒雞是傳染源。由北京密云地區(qū)新城疫流行病學調(diào)查結果可知，夏季發(fā)病相對較多，發(fā)病雞群多數(shù)為免疫雞群，病情比較溫和[8]。40～70 d雞齡發(fā)病率最高，成年雞在進行疫苗免疫后的4～15 d 易感，低于一定抗體效價的成年雞群最容易染?。划a(chǎn)蛋雞大多在產(chǎn)蛋前后感染，特別是產(chǎn)蛋高峰期之前易感。

2 雞新城疫臨床癥狀

雞新城疫的臨床癥狀差異較大，嚴重程度主要取決于感染毒株的毒力、免疫狀態(tài)、感染途徑、品種日齡、其他病原混合感染情況及環(huán)境因素等。典型的新城疫根據(jù)臨床表現(xiàn)不同可分為嗜神經(jīng)速發(fā)型、嗜內(nèi)臟速發(fā)型、中發(fā)型、緩發(fā)型、無癥狀腸道型。

非典型新城疫以低發(fā)病率、低死亡率、高淘汰率為特征，同時存在持續(xù)感染、隱形感染、免疫耐受等現(xiàn)象，發(fā)病率和死亡率通常在10%～35%之間，但因為其病程延續(xù)時間較長，經(jīng)常與一些呼吸系統(tǒng)疾病交叉感染。雞群表現(xiàn)食欲不振、精神萎靡，呼吸不暢，聲音異常，有些患病雞伴隨神經(jīng)性癥狀，糞便綠色或者黃色，產(chǎn)蛋數(shù)量和質(zhì)量下降明顯。由于非典型雞新城疫患病雞不常表現(xiàn)出雞新城疫感染的典型癥狀，易被誤認為是溫和型禽流感，因而導致養(yǎng)雞場不能及時采取措施進行補救，對養(yǎng)雞場造成了嚴重的經(jīng)濟損失[7]。

3 雞新城疫病理變化

剖檢典型新城疫的患病雞可見全身黏膜和漿膜出血，以消化道和呼吸道最為嚴重；腺胃、盲腸扁桃體出血水腫，十二指腸和直腸黏膜出血，腦膜充血和出血，氣管黏膜充血、出血。

非典型新城疫的病理變化以腺胃乳頭有少數(shù)出血點，直腸黏膜和盲腸扁桃體出血為主。對病死雞進行解剖可更直觀地看到病理變化比較輕微，氣管和咽喉處有充血和水腫等現(xiàn)象，氣管壁較為脆弱，氣囊混沌；腦膜出血和充血，腺胃變化不明顯，乳頭有小范圍出血點；扁桃體膨脹充血，肌胃角質(zhì)層下有出血斑，輸卵管有發(fā)炎、紅腫、松弛等現(xiàn)象[7]。

4 實驗室檢測

隨著科技不斷進步，關于新城疫的實驗室診斷技術也日趨精準高效，血清學檢測方法主要有膠體金免疫層析技術、瓊脂擴散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫組化技術、免疫熒光技術及血凝和血凝抑制試驗，分子生物學檢測主要有逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）、實時熒光RT-PCR、環(huán)介導等溫核酸擴增技術、微陣列雜交技術、高通量測序技術等[9-14]。

（1）病毒分離與鑒定。新城疫病毒的分離鑒定包括雞胚接種培養(yǎng)與細胞接種培養(yǎng)，但該方法對實驗室條件提出了一定要求，操作煩瑣，耗時較長，適用于有科研條件的科研院所，不適于養(yǎng)殖場的快速檢測。

（2）血凝和血凝抑制試驗。新城疫病毒的血凝素可以使雞紅細胞發(fā)生凝集，而具有新城疫特異性抗體的血清可以抑制新城疫病毒凝集紅細胞。血凝試驗和血凝抑制試驗是目前基礎實驗室和養(yǎng)殖場用于檢測新城疫抗體水平最常見的方法。由于頻繁采血會對雞產(chǎn)生應激反應，也有研究表明，可采用卵黃抗體代替血清抗體檢測[15]。

（3）RT-PCR。單獨新城疫RT-PCR 檢測和多重RTPCR 檢測均可快速、靈敏、準確、特異性地檢測新城疫病毒，針對新城疫病毒F基因設計引物[14]，對于病毒含量較低的樣品不適宜選擇RT-PCR方法。

（4）實時熒光RT-PCR。其原理是熒光探針與目標片段結合，從而根據(jù)熒光信號強度的變化給目標產(chǎn)物定量，《新城疫診斷技術》（GB/T 16550—2020）根據(jù)我國流行的所有基因型新城疫強毒F基因序列設計了引物和探針[14]。

（5）環(huán)介導等溫核酸擴增技術。該方法由Pham 等在2005年建立，主要針對新城疫靶基因的6個區(qū)間進行核酸擴增，特異性強，可實現(xiàn)對新城疫進行準確快速的檢測。

（6）微陣列雜交技術。該技術是生物芯片的一種，如雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒和雞傳染性喉氣管炎病毒的基因芯片和試劑盒可以準確、有效地檢測雞傳染性喉氣管炎病毒、雞新城疫病毒和雞傳染性支氣管炎病毒，且特異性強、靈敏度高、耗時短，檢測快速，應用前景良好。

（7）高通量測序技術。該技術能夠一次并行對大量核酸分子進行平行序列測定，表達量極少的轉錄本均能夠被精準地定量。高通量測序技術在未來可能成為新城疫檢測的常規(guī)手段。

5 防控措施

5.1 加強飼養(yǎng)管理

目前為止尚無針對治療新城疫的有效藥物，日常飼養(yǎng)中保證雞群各階段的營養(yǎng)需求，保證飼料飲水安全，嚴格控制飼養(yǎng)密度，做好溫濕度、通風等環(huán)境因素控制，減少環(huán)境應激，降低呼吸道疾病并發(fā)新城疫的可能性[16-17]。建立養(yǎng)殖場生物安全體系，實行全進全出，對雞舍定期消毒，可交替使用聚維酮碘、葵甲溴銨溶液、新潔爾滅、燒堿等消毒劑，如空欄期可使用2%燒堿水溶液或0.2%次氯酸鈉溶液噴灑消毒對雞舍消毒，用0.2%次氯酸鈉溶液消毒料線和水線，車輛、用具進場前進行嚴格消毒處理[18]。建立雞新城疫預警、診斷和防治信息化體系，當發(fā)現(xiàn)雞群內(nèi)出現(xiàn)病例時，可及時采取緊急接種措施，同時做好病雞淘汰和死雞無害化處理[19]。

5.2 科學疫苗免疫

我國對新城疫實施全面免疫政策，要達到科學的免疫效果，需根據(jù)本場的實際情況選擇疫苗種類，優(yōu)化免疫程序，制定合理免疫方案[20]。新城疫疫苗目前主要有活疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗和基因疫苗，同時還有新流二聯(lián)苗、新支流三聯(lián)苗、新城疫基因Ⅶ型多聯(lián)滅活疫苗等聯(lián)苗[7,21-23]。A-NDV-Ⅶ和A-NDV-LX/I4 分別是我國針對新城疫基因Ⅶ型的滅活疫苗株和弱毒活疫苗株，解決了原有疫苗株與流行株不匹配的問題[6]。

我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部制定的免疫方案是商品肉雞在7～10 日齡進行初免，2 周后二免；種雞、商品蛋雞在3～7 日齡初免，10～14日齡二免，12周、17～18周強化免疫，開產(chǎn)后根據(jù)免疫抗體水平進行補免[24]。針對基因Ⅶ型新城疫的預防，目前國外主流使用種雞和蛋雞2+1 免疫程序，即分別在4周齡、8周齡使用基因Ⅶ型活疫苗氣霧免疫，16周齡用基因Ⅶ型滅活疫苗進行免疫[6]。有文獻指出，在體內(nèi)母源抗體接近消失或剛消失時進行首次免疫，可以取得良好的效果。因此，在對雛雞進行初免前，大型雞場以抽樣率不低于0.1%，小型雞場抽樣率不低于2%的抽樣標準，對出殼后1 d的雛雞采血檢測HI效價，再根據(jù)公式確定雛雞初次免疫的日齡。土雞和仿土雞品種每次免疫間隔25～30 d，籠養(yǎng)雞每次免疫間隔40 d。湖南某蛋雞場一般在18 周齡稱重，在20周、30周、36周和43周分別抽血檢測以密切關注新城疫的免疫情況，免疫抗體滴度大于70%，抗體效價在5 log2及以上，表明群體免疫合格；若抗體滴度下降或無效，應及時進行二次免疫接種[25]。

5.3 中西醫(yī)防治

全場雞群緊急免疫新城疫Ⅳ系疫苗4 羽份，發(fā)病雞用高免血清和卵黃抗體新城疫核酸制劑和白細胞介素-2（IL-2）進行治療，同時在飲水中添加多維，提高機體免疫力[26]。若出現(xiàn)新城疫和大腸桿菌混合感染，飲水中還需添加抗菌藥物如頭孢噻肟鈉、氟苯尼考，頭孢噻肟鈉按5 g/50 kg 的比例添加，每日2 次；70%水溶性氟苯尼考粉100 g/500 kg，每日1 次，連用3 d；或采用磺胺二甲嘧啶混合連用3 d[27]。對還未發(fā)病的雞群可用抗菌藥物和中藥組方，如環(huán)丙沙星、恩諾沙星等進行預防。

中藥防治畜禽疾病在長期的臨床實踐中顯示了天然、低毒、刺激小、殘留少等天然優(yōu)勢。中藥通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫功能，進而提升雞的免疫功能與生長能力，加強疫苗對雞新城疫的預防效果，最終起到預防雞新城疫的作用。目前中藥應用于防治新城疫的研究方向主要集中于提取中藥有效成分作為疫苗免疫佐劑，增強雞新城疫疫苗的免疫效果[28]。國內(nèi)外研究結果表明，刺五加、黃芪等多種中藥提取物及其化學成分和5%的核桃青皮均可加強疫苗免疫效果，達到顯著提升新城疫抗體水平的目的[3]。中藥煎劑如黃芪、絞股藍、蒲公英、苦參、秦皮作為組方研制的口服液，以及華薺苧、珍珠草兩味中藥配成中藥口服液，或以板藍根、魚腥草、大青葉、百部、虎杖等幾類中草藥根據(jù)一定配比制成中藥口服液，均可實現(xiàn)防治雞新城疫的目的。復方多糖如蟬花蟲草粗多糖是主要源自植物的天然有效成分，可有效增加雞新城疫抗體含量，提升雞血清免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）的含量，促進雞T淋巴細胞轉化，持續(xù)作用時間長，效果確切，在養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中具有良好前景[28-30]。此外，微生態(tài)制劑如熱滅活草分枝桿菌科作為口服非特異性免疫調(diào)節(jié)劑也可增強新城疫疫苗的免疫作用[31]。

6 結論

目前，高發(fā)病率、高死亡率的雞新城疫已鮮有報道，但仍然存在由于疫苗使用不當、免疫程序不合理等問題導致非典型性新城疫發(fā)生。養(yǎng)殖人員應保證禽養(yǎng)殖場內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生，堅持科學飼喂，建立生物安全體系，及時監(jiān)測本場雞群免疫情況，使雞群始終處于較好的免疫水平，同時充分了解雞新城疫的病原特點、臨床癥狀和病理特點，熟悉實驗室檢測流程，能夠對疫情進行及時的早期診斷，做到有效防控。