糞鈣衛(wèi)蛋白的檢測方法及在炎癥性腸病中的研究進(jìn)展

沈 嘉，謝 芳

（上海市松江區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 201600）

糞鈣衛(wèi)蛋白（faecal calprotectin，F(xiàn)C）是一種相對分子質(zhì)量為36 000 的鈣鋅結(jié)合蛋白，是一種炎癥標(biāo)記物。FC 大多數(shù)來源于中性粒細(xì)胞，也可存在于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、鱗狀上皮細(xì)胞等細(xì)胞中，可以在血液、體液中檢測到，尤其是經(jīng)腸道的糞便標(biāo)本中更易檢測[1]。當(dāng)腸道發(fā)生炎癥反應(yīng)時，腸黏膜滲透性增加，中性粒細(xì)胞趨向滲透到腸道，并釋放出鈣衛(wèi)蛋白；由于FC 在糞便中極其穩(wěn)定，被釋放后在腸道內(nèi)不易被降解，所以FC 被應(yīng)用于腸道疾病患者炎癥程度和營養(yǎng)狀態(tài)的評估[2]。FC檢測方法主要是半定量分析和定量分析，前者多為膠體金免疫層析法，后者包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光法（CLIA）、免疫透射比濁法（PETIA）等[3]。炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）是一種特殊的慢性腸道炎癥性疾病，目前病因尚未闡明，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）、克羅恩?。╟rohn’s disease，CD）及一些病毒性或細(xì)菌性引起的非特異性腸道炎癥[4]。在臨床上，可用于診斷和評估病情的方法包括腸道內(nèi)鏡檢查、影像學(xué)檢查、實(shí)驗(yàn)室血液學(xué)檢測和臨床活動指數(shù)評分等，這些傳統(tǒng)診療手段具有有創(chuàng)性、侵入性、放射性、費(fèi)用昂貴、耗時久等缺點(diǎn)，患者依從性較差。對比而言，F(xiàn)C 的檢測有實(shí)用性較強(qiáng)、操作較簡單方便、可反復(fù)檢測、價格較低廉、耗時較少等優(yōu)勢，同樣可滿足臨床需求，F(xiàn)C 可作為診斷和預(yù)后評估的潛在生物標(biāo)記物。

本文將就FC的實(shí)驗(yàn)室檢測方法和FC在臨床應(yīng)用價值的最新研究展開綜述。

1 實(shí)驗(yàn)室檢測方法

檢測方法主要是半定量分析和定量分析，見表1。半定量多為膠體金免疫層析法，操作方便，耗時短、成本低。FC 正常參考范圍：＜15 μg/g；炎癥時FC 參考范圍：≥60 μg/g，提示腸道存在炎癥的可能；而FC 水平15～60 μg/g，提示可能處于正常水平，也可能出現(xiàn)腸易激綜合征[5]。FC 有較高的陰性預(yù)測值，當(dāng)FC＜15 μg/g，即可排除活動性IBD[6]；在一項(xiàng)半定量研究中，用膠體金法測定FC，以60 μg/g 為臨界值，即可有效判斷疾病是否處于活動期[6]，需要進(jìn)一步臨床干預(yù)和定量分析。定量分析包括ELISA、CLIA、PETIA 等，ELISA 可同時處理大批量標(biāo)本，但是操作繁瑣、耗時久、重復(fù)性較差；CLIA 是目前較為理想的方法，自動化程度高，敏感度和特異度較高；PETIA 是新型檢測方法，穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性高，但檢測敏感度和線性范圍都略遜于CLIA。3 種常見定量分析方法的對比見表2[7]。

表1 4 種方法學(xué)優(yōu)缺點(diǎn)比較

表2 3 種定量分析方法比較

2 FC 在炎癥性腸道疾病的應(yīng)用與研究進(jìn)展

IBD 是一類慢性炎癥性腸道疾病，具有病程較長、遷延不愈的特點(diǎn)，主要包括UC 和CD，根據(jù)炎癥的活動度可分為活動期和緩解期。目前白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞沉降率、C 反應(yīng)蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)指標(biāo)被用于反映腸道炎癥程度，但常規(guī)檢測項(xiàng)目對于腸道炎癥的診斷特異性和分期判斷并不理想[8]，目前對上述兩者仍缺乏簡單、可靠的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。FC 在腸道中的穩(wěn)定性使FC 有作為腸道炎癥生物標(biāo)記物的潛力，于是進(jìn)入研究者視野。

2.1 UC UC 是一種結(jié)腸慢性炎癥性疾病，以活動期和緩解期交替為特征[9]。主要臨床癥狀有腹瀉、排黏液性膿血便，常有陣發(fā)性、痙攣性疼痛，并伴有里急后重感。診斷金標(biāo)準(zhǔn)主要是結(jié)腸內(nèi)鏡檢查和腸黏膜組織活檢，此過程耗時久、費(fèi)用昂貴，而且易出現(xiàn)穿孔、出血等并發(fā)癥。在一項(xiàng)67 例UC 患者的研究中，F(xiàn)C 對UC 活動性診斷敏感度（85.5%）、特異度（88.2%）、陽性預(yù)測值（84.5%），都明顯高于CRP 和紅細(xì)胞沉降率（ESR）（P＜0.05），說明FC 能夠有效反映 UC 患者的炎癥活動情況，且優(yōu)于CRP、ESR[10]。有研究就FC 和其他炎癥指標(biāo)預(yù)測內(nèi)鏡下UC 是否是活動狀態(tài)，進(jìn)行診斷效能的分析比較[11]，結(jié)果顯示FC 的表達(dá)水平由小到大依次是：對照組、緩解組、輕度組、中度組、重度組，發(fā)現(xiàn)單一FC 診斷的曲線下面積（AUC）為0.801，已具有很高的診斷價值；當(dāng)FC 聯(lián)合其他指標(biāo)，AUC 為0.827，診斷價值更優(yōu)。以上內(nèi)容表明，F(xiàn)C無論作為單一指標(biāo)還是聯(lián)合其他炎癥指標(biāo)，都與UC 的內(nèi)鏡檢查有很好的相關(guān)性，對UC 的診斷以及臨床分期都有評估價值。其簡單易操作，也為不適用于結(jié)腸鏡檢查的患者提供可靠替代方案。

2.2 CD CD 的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，以慢性特發(fā)性腸道炎癥為特征，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢[12]，還具有遷延不愈、病情不易控制、活動期和緩解期反復(fù)交替等特點(diǎn)，可伴隨終生。胃腸內(nèi)鏡檢查及病理組織活檢是判斷CD 消化道黏膜炎癥程度的主要依據(jù)，但由于是有侵入性檢查，所以不被大多數(shù)患者接受。及時評估患者疾病的活動度，有助于緩解病情，改善預(yù)后。在一項(xiàng)有關(guān)FC、IL-6、CRP 診斷CD 的研究中[13]，多因素Logistic 回歸分析結(jié)果提示，以上幾種檢測指標(biāo)中，僅有FC 是CD 患者消化道黏膜受損的獨(dú)立影響因素（OR=1.006，P＜0.05）；FC 和CRP 聯(lián)合檢測，以及FC、IL-6 和CRP 聯(lián)合檢測均能有效判斷克羅恩病患者消化道黏膜損傷情況，診斷價值相當(dāng)；基于簡便性及檢測成本，臨床上更推薦使用FC 和CRP 聯(lián)合檢測。當(dāng)患者在胃腸鏡不耐受情況下，CT 成像檢查和FC 水平測定作為非侵入性檢查方法可以替代內(nèi)鏡檢查，用于監(jiān)測 CD 患者的活動性。FC 水平與克羅恩病簡化內(nèi)鏡評分及CT 小腸成像表現(xiàn)相關(guān)，F(xiàn)C 水平預(yù)測內(nèi)鏡緩解臨界值為 100 μg/g，敏感度92%，特異度65%[14]。有研究分析顯示，重度炎癥組、中度炎癥組患者FC 表達(dá)水平均高于輕度炎癥組（P＜0.05，Z=-3.364、-2.411），回結(jié)腸病變組患者FC 表達(dá)水平明顯高于回腸病變組（P＜0.05，Z=-3.261）[15]。中度活動期、輕度活動期患者的FC 表達(dá)水平均高于緩解期，中度活動期患者FC 表達(dá)水平高于輕度活動期（均P＜0.05），證明FC 可作為CD 病程中病情評估的無創(chuàng)標(biāo)記物，由緩解期到活動期，F(xiàn)C 隨之升高，同時FC 還與結(jié)腸、回腸有相關(guān)性，有參考價值。國內(nèi)外就通過監(jiān)測FC指標(biāo)來判斷CD 腸切除吻合術(shù)后是否復(fù)發(fā)進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，F(xiàn)C 的表達(dá)水平與內(nèi)鏡復(fù)發(fā)的存在及程度均有相關(guān)性[16-18]。

2.3 腸道疾病的鑒別診斷

2.3.1 下消化道疾病 隨著現(xiàn)代生活習(xí)慣的改變，下消化道疾病也已成為常見疾病，并且因有交替反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，很大程度上影響患者的生活質(zhì)量。下消化道疾病多出現(xiàn)類似的癥狀，包括腹瀉、腹痛、便血，因此當(dāng)患者在首次就診時，導(dǎo)致很難通過臨床癥狀的差異精準(zhǔn)判斷疾病的病因[19]。按照病理，下消化道疾病在臨床上分為兩大類：器質(zhì)性病變和非器質(zhì)性病變，鑒別診斷的手段主要是腸道內(nèi)鏡檢查。但絕大多數(shù)下消化道疾病腸道內(nèi)鏡檢查結(jié)果顯示無明顯異常，而過度的檢查又使患者無法耐受[20]。FC 在血液及糞便內(nèi)均可表達(dá)，在糞便中的FC 表達(dá)水平是血液的6 倍，且穩(wěn)定性好、取樣方便、患者依從性高，F(xiàn)C 在輔助診斷下消化道疾病時，具有作為生物指標(biāo)的潛在價值[11，21]。有研究表明，F(xiàn)C 有望用于鑒別腸道器質(zhì)性和非器質(zhì)性病變[22]，在炎癥性腸病中FC 顯著高于腸道腫瘤和增生性息肉，腸癌組FC[（551.32±112.79)μg/g]、腸炎組FC[（815.29±214.07)μg/g]及腸道增生性息肉組FC[（144.47±24.67)μg/g]均高于對照組[（35.32±10.38)μg/g]，并且腸癌組、腸炎組患者FC 表達(dá)水平均高于腸道增生性息肉組，腸炎組患者FC 高于腸癌組（P＜0.05）。在檢測陽性率上，腸癌組、腸炎組及腸道增生性息肉組也高于對照組，且腸癌組、腸炎組均高于腸道增生性息肉組，腸炎組高于腸癌組（P＜0.05）。當(dāng)以腸道內(nèi)鏡檢查病理組織切片結(jié)果作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)時，F(xiàn)C 檢測檢出腸癌的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度分別為78.95%、96.51%、94.76%；檢出腸炎的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度分別為 83.87%、87.60%、86.39%；檢出腸道增生性息肉的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度分別為83.64%、90.12%、86.39%，說明FC 在鑒別診斷不同下消化道疾病時，有很高的價值，值得臨床應(yīng)用。

2.3.2 FC 鑒別IBD 與腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS） 腸易激綜合征是臨床常見的一種以腹痛伴排便習(xí)慣改變（腹瀉/便秘）、糞便性狀異常（稀便、黏液便/便秘）為特征，與IBD 類似。有研究顯示，當(dāng)以50 μg/g 作為 FC 臨界值，鑒別IBD 與IBS 的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值分別為76%、93%、97%[3]。針對是否存在IBD 和IBS 共存情況，可通過監(jiān)測FC 的動態(tài)變化來判斷IBS。

2.3.3 FC 鑒別IBD、腸道感染 有研究表明，以15 μg/g作為診斷臨界值，F(xiàn)C 診斷急性細(xì)菌性腹瀉的敏感度、特異度分別為83%和87%，優(yōu)于糞乳鐵蛋白、糞便隱血實(shí)驗(yàn)[23-24]。

3 思考與總結(jié)

綜上所述，F(xiàn)C 可以較好地反映腸道炎癥程度，同時也可以提示病變部位，與傳統(tǒng)的內(nèi)鏡檢查有很好的相關(guān)性，F(xiàn)C 聯(lián)合其他檢查可作為內(nèi)鏡檢查的替代方案。這說明FC在腸道疾病診療有著很重要的價值和地位，也逐漸被重視起來，也有更多的檢測技術(shù)和方法被開發(fā)，以優(yōu)化相關(guān)疾病的診療方案。但目前國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室開展FC檢測的普及度并不高，而且主要為半定量的膠體金法。根據(jù)上述內(nèi)容，總結(jié)如下：①FC 作為炎癥指標(biāo)，穩(wěn)定存在于腸道糞便中。當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)時，血清學(xué)指標(biāo)如PCT、CRP、WBC、IL-6 等水平隨之升高，因?yàn)镕C 的腸道特異性體現(xiàn)，如果檢測到FC 高于生物參考區(qū)間上限，則可以快速定位是腸道的炎癥反應(yīng)。②膠體金檢測FC 具有無創(chuàng)檢測、價格低廉、簡單快速等優(yōu)點(diǎn)，由于FC 的高陰性預(yù)測值，半定量膠體金法可用于臨床初診的排除性診斷IBD，以及IBD 患者治療后的隨訪監(jiān)測。③當(dāng)輔助判斷IBD 活動度時，則需要FC 的定量分析，F(xiàn)C 的表達(dá)水平隨炎癥程度升高而升高，來判斷炎癥程度；FC 也可在一定程度上提示CD 患者的病變部位。

就目前研究來說，尚未確立公認(rèn)的醫(yī)學(xué)指標(biāo)決策閾值，來界定IBD 輕度、中度、重度及活動期、緩解期；而且開展的檢測方法不同，尚未達(dá)到結(jié)果互認(rèn)的程度。期待在后續(xù)的研究中，完善FC 的檢測體系，優(yōu)化腸道炎癥性疾病的診治方案；FC 的存在形式，也導(dǎo)致其結(jié)果易受飲食、藥物、生活習(xí)慣等因素影響。研究結(jié)果表明，在動態(tài)監(jiān)測IBD 患者FC 表達(dá)水平時，清晨第1 次的糞便標(biāo)本檢測結(jié)果與內(nèi)鏡下疾病活動度評分相關(guān)性最好，而其他時間段的糞便標(biāo)本變異系數(shù)較大，可達(dá)13%～26%[25-26]。因此，建議用清晨第1 次糞便檢測更可靠，且連續(xù)監(jiān)測FC 濃度變化對IBD 療效評估和疾病管理有重要意義。