自研中草藥預(yù)防家兔巴氏桿菌病田間試驗(yàn)研究

楊 威，李杰峰，張 寧，趙志強(qiáng)，姜 曄，鄭麗麗★

（1.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北 保定 071001；2.河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071001）

兔巴氏桿菌病是由多殺性巴氏桿菌引起的一種急性型以敗血癥和出血性炎癥為特征的烈性傳染病。家兔對(duì)多殺性巴氏桿菌非常敏感，常引起大批死亡，造成重大損失。根據(jù)臨床表現(xiàn)可分為敗血型、傳染性鼻炎型、地方流行性肺炎型、中耳炎型、結(jié)膜炎型、生殖器官感染和膿腫型等7 種病型。兔多殺性巴氏桿菌在我國(guó)分布很廣，常以帶菌狀態(tài)寄生于家兔的呼吸道粘膜以及扁桃體中。家兔的帶菌率一般為35%～70%，發(fā)病率為20%～70%。常因氣候、飼養(yǎng)管理等應(yīng)激因素或其他疾病使機(jī)體抵抗力降低時(shí)引起群體發(fā)病，是對(duì)家兔養(yǎng)殖業(yè)危害嚴(yán)重的疾病之一。

在畜牧業(yè)生產(chǎn)實(shí)踐中，廣大養(yǎng)殖者為生產(chǎn)更多的畜禽和動(dòng)物產(chǎn)品，提高畜禽的飼養(yǎng)效率，滿(mǎn)足人們對(duì)畜產(chǎn)品的需求，特別重視對(duì)動(dòng)物傳染病的防治。因此，獸藥生產(chǎn)中的許多抗菌藥，特別是抗生素被廣泛用于動(dòng)物飼養(yǎng)和疾病防治的全過(guò)程。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展和食品安全技術(shù)的進(jìn)步，使人們逐步認(rèn)識(shí)到，大量長(zhǎng)期和不規(guī)范使用抗生素、添加劑及激素類(lèi)物質(zhì)，會(huì)造成這些物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)的殘留和蓄積，導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體免疫力下降，病原微生物的耐藥性增強(qiáng)，進(jìn)而給動(dòng)物、動(dòng)物產(chǎn)品安全和公眾健康造成嚴(yán)重危害。目前，畜產(chǎn)品安全問(wèn)題已成為國(guó)際貿(mào)易中最敏感、消費(fèi)者最關(guān)注以及全球科技工作者著力研究解決的焦點(diǎn)問(wèn)題。為保障畜產(chǎn)品安全和人民健康，我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部已正式宣布啟動(dòng)在畜牧業(yè)生產(chǎn)中，實(shí)施抗菌藥物應(yīng)用減抗行動(dòng)計(jì)劃，明確了動(dòng)物養(yǎng)殖端減抗和限抗的時(shí)間表。為適應(yīng)這一新形勢(shì)的要求，加強(qiáng)完善抗菌藥物的科學(xué)應(yīng)用和改進(jìn)，研制新型抗菌藥物替代品的工作已成為廣大科技工作者的當(dāng)務(wù)之急、為此，我所兔病課題組開(kāi)展了應(yīng)用天然中草藥預(yù)防兔巴氏桿菌病的試驗(yàn)研究工作。本試驗(yàn)旨在通過(guò)科學(xué)系統(tǒng)規(guī)范的試驗(yàn)研究工作，進(jìn)一步深入了解天然中草藥在養(yǎng)殖業(yè)過(guò)程中，預(yù)防家兔巴氏桿菌病的實(shí)際作用和效果，有效預(yù)防兔巴氏桿菌病和其他細(xì)菌病，以及通過(guò)中草藥對(duì)家兔的試驗(yàn)研究，為今后其它畜禽的疫病預(yù)防提供可靠的數(shù)據(jù)支持和科學(xué)理論依據(jù)。繼而探索新的防治途徑，確保畜禽產(chǎn)品的質(zhì)量安全和公眾健康。

1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

1.1 應(yīng)用中草藥預(yù)防兔巴氏桿菌病的試驗(yàn)研究，有針對(duì)性地選擇在巴氏桿菌污染較為嚴(yán)重的養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)研究工作選在易發(fā)生兔巴氏桿菌病的冬季進(jìn)行。試驗(yàn)時(shí)間從1 月15 日～3 月底為止。

1.3 試驗(yàn)的參試兔要求為同品種、同批生產(chǎn)、臨床上精神食欲都正常。

1.4 試驗(yàn)用兔按照原有習(xí)慣只注射兔瘟疫苗，不注射巴氏桿菌疫苗及其它疫苗。試期試兔不注射和服用任何抗菌藥物和其他保健性制劑。

1.5 該廠用于試驗(yàn)的家兔，除飼喂中草藥的試驗(yàn)組外，其他參試兔的飼養(yǎng)管理、疫病防治及養(yǎng)殖環(huán)境等，仍保持原有習(xí)慣，確保試驗(yàn)條件的一致性。

1.6 本試驗(yàn)所用的中草藥購(gòu)于河北安國(guó)中草藥集散地，購(gòu)銷(xiāo)渠道可靠質(zhì)量上乘。本課題組自行研制的中草藥預(yù)防兔巴氏桿菌病的配方，經(jīng)顆粒機(jī)按照藥料比加工制成的中草藥顆粒飼料。

1.7 用于試驗(yàn)研究的中草藥配方為2 個(gè)，分別制成顆粒料。為方便試驗(yàn)需要，簡(jiǎn)稱(chēng)配方三和配方四。試驗(yàn)組所用顆粒料為普通顆粒料打碎添加中草藥后制成，所使用的普通顆粒料與對(duì)照組所用的相同。

1.8 試驗(yàn)開(kāi)始前，在同批產(chǎn)300 只參試兔中，隨機(jī)抽取用于飼喂中草藥顆粒料的30 只試驗(yàn)兔，再進(jìn)行兔巴氏桿菌帶菌情況的檢測(cè)。檢測(cè)方法應(yīng)用PCR技術(shù)和細(xì)菌分離培養(yǎng)方法結(jié)合進(jìn)行。進(jìn)一步了解掌握巴氏桿菌在兔群的感染帶菌情況。

1.9 本實(shí)驗(yàn)分3 個(gè)組，2 個(gè)試驗(yàn)組1 個(gè)對(duì)照組。試驗(yàn)組兔共30 只，每組各15 只，試驗(yàn)一組飼喂配方三顆粒料，試驗(yàn)二組飼喂配方四顆粒料；對(duì)照組飼喂不含中草藥的普通顆粒料。對(duì)照組所用飼料除不含試驗(yàn)組配方中所用中草藥外，其余成分與試驗(yàn)組相同。

1.10 試驗(yàn)開(kāi)始前，對(duì)參試的所有家兔籠具、飼喂飲水工具及周?chē)h(huán)境統(tǒng)一進(jìn)行安全檢查，防止因物理性化學(xué)性及生物性因素的傷害和應(yīng)激，保證試驗(yàn)工作的順利進(jìn)行。

1.11 試驗(yàn)用中草藥顆粒料（包括普通料），均堅(jiān)持定時(shí)間飼喂、限量給料、自由飲水的試驗(yàn)要求。每日早晚定時(shí)給料一次，每日投喂量根據(jù)試驗(yàn)兔的生長(zhǎng)、體重、飲食等情況控制在120～160g，保證吃?xún)?。晚間投喂量占每日總投喂量的70%掌握。

1.12 堅(jiān)持每日試驗(yàn)兔觀察記錄，仔細(xì)觀察每日試驗(yàn)兔的精神狀態(tài)、采食飲水和排泄等情況有無(wú)異常。并認(rèn)真將觀察到的實(shí)際情況隨時(shí)記錄到試驗(yàn)表中。試驗(yàn)記錄表文字規(guī)范表述，按照試驗(yàn)對(duì)試兔規(guī)定的觀察內(nèi)容填寫(xiě)，如表現(xiàn)正常，可填寫(xiě)為精神、飲水、食欲、糞便正常；如試驗(yàn)中觀察到試兔有異常表現(xiàn)，可根據(jù)觀察到的異常表現(xiàn)，在相應(yīng)的表格中填寫(xiě)為：精神沉郁、食欲減退或廢絕、飲水減少或停飲、糞便干硬或軟綿或有顏色變化。若出現(xiàn)其他異常變化，按相關(guān)專(zhuān)業(yè)表述在試驗(yàn)記錄表備注欄填寫(xiě)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 保護(hù)效果評(píng)價(jià) 按試驗(yàn)方案設(shè)定的實(shí)驗(yàn)思路、試驗(yàn)條件、試驗(yàn)方法和相關(guān)技術(shù)要求，通過(guò)應(yīng)用自研的中草藥顆粒料飼喂，進(jìn)行了試驗(yàn)。試驗(yàn)前對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)試驗(yàn)兔巴氏桿菌帶菌情況進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)30只陽(yáng)性數(shù)為19 只，陽(yáng)性率為63.3%。從試驗(yàn)效果來(lái)看，在為期2 個(gè)月的試驗(yàn)期內(nèi)，在一定時(shí)間內(nèi)多次發(fā)生巴氏桿菌疫情且嚴(yán)重污染的養(yǎng)兔場(chǎng)內(nèi)，飼喂中草藥顆粒飼料的30 只試兔無(wú)一發(fā)生巴氏桿菌病及其它疫情，參試兔巴氏桿菌帶菌率很低，所有試兔精神良好，食欲旺盛，膘肥體壯，保護(hù)率100%，而作為對(duì)照組參試的同批產(chǎn)270 只試兔試驗(yàn)前后共死亡115 只，其中，在中草藥防治巴氏桿菌病試驗(yàn)前300 只家兔死亡72 只，本試驗(yàn)正式開(kāi)始后對(duì)照組同批產(chǎn)家兔198 只死亡43 只，死亡率分別為24.0%和21.7%。

2.2 免疫水平分析 通過(guò)應(yīng)用中草藥預(yù)防兔巴氏桿菌病的試驗(yàn)，研究結(jié)果顯示，應(yīng)用中草藥預(yù)防兔的巴氏桿菌病，不但能有效預(yù)防和控制兔群巴氏桿菌病疫病的發(fā)生，而且天然中草藥還有增強(qiáng)體質(zhì)促進(jìn)和提高家兔機(jī)體增重、免疫器官發(fā)育、免疫力增強(qiáng)等生理生化指標(biāo)的顯著作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼喂中草藥顆粒料的試兔比同期飼喂普通顆粒料的對(duì)照兔，在兩個(gè)月的試驗(yàn)期結(jié)束后，體重平均增高0.5kg，脾臟平均重量增加，免疫球蛋白數(shù)量和干擾素水平有不同程度的增加，經(jīng)生物學(xué)統(tǒng)計(jì)幾項(xiàng)指標(biāo)和對(duì)照組比較呈現(xiàn)顯著差異（見(jiàn)圖1）。配方三和配方四在IgG 和IgA 水平上與對(duì)照組相比有明顯提高，與此同時(shí)，配方三還在IgM和γ-IFN 水平上與對(duì)照組相比有明顯升高。

圖1 用藥后IgG、IgA、IgM、γ-IFN 含量

2.3 藥物安全性檢測(cè) 試驗(yàn)后對(duì)飼喂中草藥顆粒料的試兔進(jìn)行剖檢，肝、心、脾、胰、腎、胃、腸等均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理?yè)p傷。精神、飲水、食欲、排泄等均表現(xiàn)正常。采取血清檢測(cè)，ALT、AST 等生化指標(biāo)與對(duì)照組相比未見(jiàn)顯著變化，顯示未出現(xiàn)明顯的肝臟損傷（圖2）。

圖2 血清中ALT、AST 水平變化

3 討論

對(duì)“自研中草藥預(yù)防家兔巴氏桿菌病試驗(yàn)研究”相關(guān)研究結(jié)果分析認(rèn)為：在家兔的養(yǎng)殖實(shí)踐中，科學(xué)應(yīng)用中草藥進(jìn)行家兔巴氏桿菌病的預(yù)防和控制工作，是完全可行的，而且是行之有效的?？茖W(xué)依據(jù)一方面是在理論上有中草藥藥理作用，對(duì)家兔生理生化指標(biāo)影響結(jié)果的試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，另一方面是在實(shí)踐中有中草藥科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的證實(shí)。

通過(guò)對(duì)為期2 個(gè)月的試驗(yàn)研究結(jié)果綜合分析論證看，科學(xué)應(yīng)用中草藥，不但能有效預(yù)防和控制兔巴氏桿菌病，而且，從科學(xué)的角度和實(shí)際試驗(yàn)的過(guò)程看，也同樣能有效預(yù)防和控制家兔其它的一些細(xì)菌性疾病。另外，從中草藥本身獨(dú)特的藥理藥性以及科學(xué)試驗(yàn)的時(shí)間節(jié)點(diǎn)、場(chǎng)地環(huán)境、環(huán)衛(wèi)條件等相關(guān)因素分析看，也說(shuō)明對(duì)家兔的一些病毒性疾病有良好的預(yù)防和控制作用，理由是：首先本試驗(yàn)場(chǎng)研究的時(shí)間節(jié)點(diǎn)正值冬季嚴(yán)寒，此時(shí)正是動(dòng)物疫病特別是病毒性疫病的敏感期高發(fā)期；其次在該養(yǎng)兔場(chǎng)安排本次試驗(yàn)的前后，一直發(fā)生零星散發(fā)的兔巴氏桿菌疫情，且經(jīng)過(guò)對(duì)病死動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果顯示，是以巴氏桿菌感染為主兼有繼發(fā)魏氏梭菌、波氏桿菌等混合感染的現(xiàn)象；另外該養(yǎng)兔場(chǎng)近些年來(lái)日常除只做兔瘟疫苗的免疫外，基本不做其它疫苗的免疫工作。

通過(guò)對(duì)自研中草藥試驗(yàn)研究相關(guān)結(jié)果的系統(tǒng)分析認(rèn)為，應(yīng)用中草藥既然能有效的預(yù)防和控制家兔的一些疾病，理論推認(rèn)，中草藥對(duì)其它畜種的一些疾病也應(yīng)有良好的預(yù)防和控制作用。因此，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)和拓展這些方面的科學(xué)研究工作，更好的服務(wù)于養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

中醫(yī)藥歷史悠久，內(nèi)容豐富，博大精深，自成體系，是中華民族的偉大創(chuàng)造，是中華文明瑰寶，是中華優(yōu)秀傳統(tǒng)文化的組成部分。應(yīng)用自研天然中草藥組方預(yù)防家兔巴氏桿菌病的試驗(yàn)研究結(jié)果證明：天然中草藥確實(shí)具有清熱解毒、抗菌消炎、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)合成代謝、提高生產(chǎn)性能的多重性、多功能的藥理作用。并充分顯現(xiàn)出中草藥在動(dòng)物疫病預(yù)防中，全體施治、強(qiáng)化機(jī)體、促進(jìn)免疫系統(tǒng)、有效預(yù)防和控制動(dòng)物疫病的重要作用。由此看來(lái)，今后進(jìn)一步加強(qiáng)中草藥的研究，應(yīng)用天然中草藥，有效預(yù)防控制動(dòng)物疫病，替代或減少抗菌藥物在養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用，逐步實(shí)現(xiàn)畜牧業(yè)生態(tài)養(yǎng)殖，保障動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的安全和公眾健康，具有重要的生態(tài)意義、現(xiàn)實(shí)意義和長(zhǎng)遠(yuǎn)意義。