花椒膏藥病發(fā)生規(guī)律與防治藥劑篩選

陳德西,何忠全,張 鴻,向運佳,李其勇,劉 歡

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所/農(nóng)業(yè)部西南作物有害生物綜合治理重點實驗室，四川成都 610066)

花椒(ZanthoxylumbungeanumMaxim)原產(chǎn)于我國，為蕓香科花椒屬落葉灌木或小喬木，是重要的香料和油料經(jīng)濟樹種之一，在廣大山區(qū)是脫貧致富的支柱產(chǎn)業(yè)之一。全國總產(chǎn)量在5萬t左右，花椒出口占世界第一。但隨著種植面積的擴大，花椒病蟲害也日趨嚴重，特別是真菌性枝干病害[1]?；ń犯嗨幉∈且环N常見且危害較嚴重的枝干病害，影響枝干組織的正常生長、破壞枝干的表皮，輕則導(dǎo)致樹勢衰弱，產(chǎn)量下降，重則導(dǎo)致枝條枯死，椒園絕收。花椒膏藥病是茂物隔擔耳(Septobasidiumbogoriensepat)引起的真菌性病害,病原屬擔子菌亞門隔擔子菌屬。膏藥病在桑樹[2-3]、板栗[4-6]、獼猴桃[7-8]和櫻桃[9]等植物上有報道?；ń犯嗨幉〉陌l(fā)生危害研究較少，加上一般殺菌劑對該病的防治效果較差，致使膏藥病在花椒產(chǎn)區(qū)成為一種難防治的重要病害。因此,深入開展花椒膏藥病治理措施的研究,找出防治病害的經(jīng)濟有效、簡便、易行的方法，對提高花椒產(chǎn)量和品質(zhì)具有極其重要的現(xiàn)實意義。筆者以漢源縣的花椒膏藥病為研究對象，通過對漢源花椒膏藥病的發(fā)生情況、發(fā)生發(fā)展規(guī)律調(diào)查、防治藥劑室內(nèi)毒力和田間防治膏藥病效果等研究，為膏藥病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗地概況試驗地位于四川省漢源縣清溪鎮(zhèn)(1 700～2 200 m)、宜東鎮(zhèn)(1 700～3 100 m)、三交鄉(xiāng)(1 750～3 100 m)、西溪鄉(xiāng)(1 700～2 500 m)和梨園鄉(xiāng)(1 700～3 100 m)5個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，其年平均氣溫12 ℃，無霜期300 d，日照時數(shù)1 500 h，年降雨量為 745 mm，其中降雨時間80%集中在6—8月，全年相對濕度為69%。氣候干熱特征明顯，垂直變化顯著，冬無嚴寒，夏無酷熱，日照充足，干濕季分明，在花椒成熟期晝夜溫差平均達12 ℃。

1.2 膏藥病發(fā)生危害調(diào)查在漢源縣花椒主產(chǎn)區(qū)海拔1 700～2 200 m(清溪鎮(zhèn))、1 700～3 100 m(宜東鎮(zhèn))、1 750～3 100 m(三交鄉(xiāng))、1 700～2 500 m(西溪鄉(xiāng))和1 700～3 100 m (梨園鄉(xiāng))5個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的椒園設(shè)點進行定點連續(xù)3年調(diào)查。花椒品種為正路椒。采用3～5點取樣方法調(diào)查，每點調(diào)查6株，分別記錄發(fā)病株數(shù)和發(fā)病程度?；ń犯嗨幉〉姆旨墭藴剩?，無病斑；1，病斑覆蓋枝干面積的5%以下；3，病斑覆蓋枝干面積的5%～10%；5，病斑覆蓋枝干面積的10%～20%；7，病斑覆蓋枝干面積的20%～40%；9，病斑覆蓋枝干面積的40%以上。

采用以下公式計算病情指數(shù):

1.3 膏藥病發(fā)生危害與樹齡的關(guān)系調(diào)查在凈作花椒園區(qū)，隨機選取1～5年生、5～8年生、8～15年生和15年以上的花椒樹各30株，調(diào)查不同樹齡的病株率及危害程度，計算出不同樹齡的病情指數(shù)。

1.4 不同殺菌劑室內(nèi)抑菌活性測定采集新鮮的膏藥病病斑，帶回實驗室進行分離培養(yǎng)與鑒定。將取回的病斑清洗干凈，在超凈工作臺上用滅菌的刀片取病斑邊緣帶有菌絲的表皮，使用組織分離法，在PDA培養(yǎng)基上進行病原菌分離。觀察純化膏藥病菌株的菌落形狀、生長速度、菌落表面特征、菌落邊緣特征、菌落質(zhì)地、顏色及孢子產(chǎn)生情況，并在顯微鏡下觀測孢子的形態(tài)和大小。

選取4種藥劑進行花椒膏藥病的抑菌試驗，藥劑分別為25%丙環(huán)唑乳油(天津市綠亨化工有限公司產(chǎn)品，市售)，43%戊唑醇懸浮劑(上?；莨饣瘜W(xué)有限公司，市售)，25%苯醚甲環(huán)唑乳油(浙江禾本科技有限公司，市售)和70%百菌清可濕性粉劑(山東曹達化工有限公司，市售)。 用無菌水將各藥劑稀釋成不同濃度，加入PDA培養(yǎng)基倒入 9 cm 培養(yǎng)皿中，制成含不同濃度梯度的藥液培養(yǎng)基。 在超凈臺上，用4 mm 打孔器將供試菌株打孔，將菌餅移植在含藥培養(yǎng)基上，菌絲一面朝下，每皿一塊菌餅，重復(fù)3次，置于27 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)6 d后取出，十字交叉法測量菌落直徑(測量法)，根據(jù)下列公式計算抑制率。用DPS統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，并計算出每種藥劑的毒力回歸曲線。

菌落生長直徑(mm)=測量平均值-4(菌餅直徑)

1.5 不同殺菌劑的田間防治效果田間試驗設(shè)計6個處理，分別為25%丙環(huán)唑乳油1 500倍液、43%戊唑醇懸浮劑2 000倍液、25%苯醚甲環(huán)唑乳油2 000倍液、70%百菌清可濕性粉劑800倍液、3%甲霜惡霉靈500倍液和清水對照。在漢源縣海拔1 900～2 000 m(關(guān)華村)和2 200～3 100 m(高橋村)2個區(qū)域的花椒園進行，每個處理選取4株受膏藥病危害的花椒樹，用PB-16型手動背負式噴霧器進行全株噴霧防治，每株噴霧藥液用量為1 000 mL，15 d后進行第二次噴霧。分別于第一次噴藥后15 d和第二次噴藥后15 d對每株膏藥病病斑死亡情況進行調(diào)查，死亡的膏藥病病斑其顏色會逐漸變黑，中間開裂，且邊緣沒有新的菌絲，膏藥子實體質(zhì)地變干，失去水分，漸漸脫落。根據(jù)膏藥病病斑的死亡率來計算膏藥病的防治效果。運用DPS統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 漢源花椒膏藥病發(fā)生危害情況由表1可知，花椒膏藥病病株率為15.04%～55.56%，平均31.65%，病情指數(shù)3.21～26.42，平均13.36。膏藥病危害程度為西溪鄉(xiāng)>三交鄉(xiāng)>宜東鎮(zhèn)>清溪鎮(zhèn)>梨園鄉(xiāng)，其中西溪鄉(xiāng)危害程度最大，病株率高達55.56%，病情指數(shù)達26.42；梨園鄉(xiāng)危害程度最小，病株率17.78%，病情指數(shù)為3.21。另外，還發(fā)現(xiàn)膏藥病菌膜內(nèi)聚集有大量的越冬介殼蟲，膏藥病病斑數(shù)占越冬介殼蟲發(fā)生簇數(shù)的比率為52.25%～99.54%，其中海拔 1 750～1 800 m(順利村)為52.25%，海拔1 900～2 000 m(關(guān)華村)為93.07%，海拔2 200～3 100 m(高橋村)為99.54%。隨著海拔的升高，膏藥病病斑數(shù)與介殼蟲發(fā)生簇數(shù)趨于相同。膏藥病與介殼蟲共同危害花椒樹，導(dǎo)致花椒樹植株死亡?？梢姡嗨幉≡跐h源縣的花椒產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生危害，同時還伴隨著介殼蟲的發(fā)生，輕者樹勢減弱，重者植株死亡。

表1 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)椒園膏藥病發(fā)生危害情況

2.2 花椒膏藥病發(fā)生危害與樹齡的關(guān)系調(diào)查結(jié)果顯示，1～5年生的花椒樹膏藥病發(fā)病程度較輕，花椒樹上的膏藥病病斑普遍以單個病斑著生在花椒樹表皮上，平均病株率為8.82%，病情指數(shù)為1.74。隨著樹齡的增長，膏藥病的染病能力迅速提高，病株率和病情指數(shù)成倍增加。8～15年生的花椒樹較1～5年生花椒樹的發(fā)病率提升了約3倍，相應(yīng)的病情指數(shù)增加了15倍左右。樹齡在15年以上的花椒樹膏藥病病斑由幾個或十幾個病斑結(jié)合在一起形成無規(guī)則的病斑群，包裹在花椒樹的枝條上，病株率高達63.16%，病情指數(shù)高達57.64。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，花椒樹樹齡與花椒感膏藥病的指數(shù)呈極顯著正相關(guān),樹齡小膏藥病發(fā)病輕，樹齡大則發(fā)病重(表2)。

表2 不同樹齡花椒膏藥病病株率和病情指數(shù)

2.3 花椒膏藥病病菌生物學(xué)特性花椒膏藥病病菌菌絲在PDA培養(yǎng)基上初期整個菌落為白色，隨著菌落的生長菌落中間顏色逐漸變深并向邊緣擴展，菌落質(zhì)地變黑變硬。顯微鏡下觀察初期菌絲為白色透明狀，后期菌絲中出現(xiàn)深灰色或褐色小顆粒。由菌絲頂端產(chǎn)生孢子(圖1)，孢子堆顏色為粉紅色，形似葫蘆和耳朵狀。初期孢子無隔，成熟孢子有1個隔。菌絲在PDA平板上3 d菌落直徑可達1.4 cm左右，6 d菌落直徑可達5.3 cm左右。

圖1 膏藥病病菌菌絲與孢子特征Fig.1 Characteristics of hyphae and spores of plaster disease pathogens

2.4 不同殺菌劑對花椒膏藥病病菌菌絲的毒力選取的4種殺菌劑中，43%戊唑醇乳油、25%苯醚甲環(huán)唑乳油和25%丙環(huán)唑懸浮劑3種咪唑類藥劑對花椒膏藥病病菌菌絲生長都有較好的抑制作用，抑制中濃度分別為0.074 80、0.049 09、0.055 03 g/L，而百菌清的抑制中濃度為0.423 58 g/L。43%戊唑醇乳油、25%苯醚甲環(huán)唑乳油和25%丙環(huán)唑懸浮劑原藥稀釋2 000倍以上均能完全抑制膏藥病病菌菌絲生長(表3)。

表3 4種殺菌劑對花椒膏藥病菌菌絲生長的抑制毒力測定結(jié)果

2.5 不同殺菌劑對花椒膏藥病的防治效果由表4可知，施藥2次后，43%戊唑醇懸浮劑2 000倍液的防治效果為84.75%～89.26%，25%苯醚甲環(huán)唑乳油2 000倍液的防治效果為65.95%～81.59%， 25%丙環(huán)唑乳油1 500倍液的防治效果為55.87%～72.22%，70%百菌清可濕性粉劑800倍液和3%甲霜惡霉靈水劑500倍液防效差。43%戊唑醇懸浮劑2 000 倍液和25%苯醚甲環(huán)唑乳油2 000倍液對花椒膏藥病的防治效果在海拔2 000 m以下溫暖地區(qū)差異不顯著，但在海拔2 000 m以上地區(qū)對花椒膏藥病的防效存在極顯著差異，43%戊唑醇懸浮劑2 000倍液對花椒膏藥病的防治效果優(yōu)于25%苯醚甲環(huán)唑乳油2 000倍液?？梢?，在不同生態(tài)環(huán)境下43%戊唑醇懸浮劑2 000倍液防治效果較好，可在生產(chǎn)中應(yīng)用。

表4 不同藥劑在不同海拔的防治效果

3 結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明，膏藥病在花椒產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生，1～5年生花椒樹膏藥病發(fā)病輕，隨著樹齡增長，膏藥病病菌量增加，導(dǎo)致膏藥病的發(fā)生危害加重，樹齡 15年以上的植株膏藥病發(fā)生危害嚴重。同時，膏藥病菌膜能夠為介殼蟲提供越冬場所。通過室內(nèi)毒力測定，43%戊唑醇懸浮劑、25%苯醚甲環(huán)唑乳油和25%丙環(huán)唑乳油在室內(nèi)毒力相對較高，進一步的田間試驗篩選結(jié)果顯示43%戊唑醇懸浮劑可作為大田防治藥劑。25%苯醚甲環(huán)唑乳油在海拔2 000 m以下溫暖地區(qū)防治效果好，但在海拔2 200 m冷涼地區(qū)防治效果不理想，這可能與生態(tài)環(huán)境和藥劑自身特性有關(guān)，有待于進一步研究。

膏藥病發(fā)生與桑白蚧有密切的關(guān)系[10]，因此，膏藥病的防治需要與介殼蟲的防治相結(jié)合。一是在冬季采用石硫合劑清園，一方面可控制膏藥病的擴散，還可消滅越冬介殼蟲；二是在介殼蟲若蟲期，采用膏藥病防治藥劑如戊唑醇與介殼蟲防治藥劑如礦物油或阿維菌素等控制介殼蟲，有效防治膏藥病的發(fā)生。