金釵石斛對衰老模型大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的影響及機(jī)制研究*

蔣瑞，趙楠，張乃心，周駿潔，朱昭瓊

（1.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 麻醉科，貴州 遵義 563000； 2.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院麻醉科，貴州 遵義 563000）

術(shù)后認(rèn)知功能障礙（postoperative cognitive dysfunction, POCD）是指在手術(shù)及麻醉后患者出現(xiàn)的一種神經(jīng)精神障礙，對患者的學(xué)習(xí)記憶能力、認(rèn)知功能及運(yùn)動能力有不同程度的影響，尤其在老年患者中更為常見[1-2]。目前對于POCD的確切發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為POCD的發(fā)生可能是炎癥、氧化應(yīng)激、自噬障礙、突觸功能受損等多因素綜合作用的結(jié)果。近來研究顯示，在圍手術(shù)期認(rèn)知障礙的患者和動物模型中都發(fā)現(xiàn)了促炎信號分子[3-4]。因此，炎癥反應(yīng)機(jī)制在POCD中的作用引起廣泛的關(guān)注。圍手術(shù)期傷害性刺激會導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，促炎細(xì)胞因子及腫瘤壞死因子表達(dá)升高可引起Tau蛋白過度磷酸化，促使β淀粉樣蛋白聚集，膠質(zhì)細(xì)胞過度激活，神經(jīng)毒性物質(zhì)釋放，進(jìn)而改變神經(jīng)遞質(zhì)的正常傳遞及突觸可塑性，最終導(dǎo)致POCD[5]。值得注意的是，神經(jīng)炎癥和POCD的發(fā)生與年齡相關(guān)[6-7]。

以滋補(bǔ)為特點(diǎn)的中藥在防治各種因衰老引起的神經(jīng)退行性疾病方面越來越受到重視?，F(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)現(xiàn)金釵石斛（dendrobium nobile lindl, DNL）的化學(xué)成分具有保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)、抗炎、提高記憶、抗衰老等多種藥理活性，在治療神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙方面具有巨大潛力[8-10]。但目前針對DNL的研究主要集中在單一提取物或活性成分方面，而作為便利的、公認(rèn)的、習(xí)慣飲用的單味中藥是否對POCD具有改善作用的研究卻鮮有嘗試。D-半乳糖所致的衰老動物模型的理化特征可與自然衰老的大鼠一致，且該模型復(fù)制方法操作簡單、效果穩(wěn)定[11-12]。因此，本研究選用七氟烷麻醉衰老大鼠行單側(cè)腎切除術(shù)復(fù)制POCD模型，探討DNL可能與神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)相關(guān)的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

60只4月齡雄性SD大鼠，體重（450±20）g，SPF級，購于長沙市天勤生物技術(shù)有限責(zé)任公司[實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0014]。飼養(yǎng)房內(nèi)溫度維持于22～26 ℃，濕度維持于45%～55%，通風(fēng)良好、環(huán)境清潔，晝夜各12 h光線變換，并可自由獲得食物和水。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院動物倫理委員會批準(zhǔn)（編號：KLL-2021-051）。

1.2 主要試劑及儀器

DNL（赤水信天斛滿堂藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)許可證號：黔20170150，生產(chǎn)批號：190802），D-半乳糖（北京索萊寶科技有限公司，批號：301K057），七氟烷（魯南貝特制藥有限公司，批號：65210304），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒（上海江萊生物科技有限公司，批號：JL13202），白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）ELISA檢測試劑盒（上海江萊生物科技有限公司，批號：JL20884），白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA檢測試劑盒（上海江萊生物科技有限公司，批號：JL20896），核因子κB（NF-κB）抗體（美國Abcam有限公司，批號：ab16502），NF-κB抑制蛋白IκBα抗體（杭州華安生物技術(shù)有限公司，批號：ET1611-15），BCA蛋白定量試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號：20210608）。MT-200型Morrris水迷宮（中國成都泰盟科技有限公司），-80 ℃超低溫冰箱（中國海爾公司），Drager麻醉機(jī)（中國德爾格醫(yī)療設(shè)備有限公司），電子分析天平、低溫高速離心機(jī)（美國Thermo公司），超純水凈化器、全波長酶標(biāo)儀、ChemiDocTMtouchimaging system、電泳儀（美國BioRad公司）。

1.3 方法

1.3.1 衰老模型復(fù)制 參考文獻(xiàn)及沿用本課題組前期研究成果[13-14]，采用10% D-半乳糖以0.125 g/（kg·d）注射于大鼠頸背部皮下，連續(xù)注射42 d，注射完成后可成功復(fù)制20月齡自然衰老模型。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)動物分組 將60只衰老模型大鼠以隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組（對照組）、DNL水煎劑治療組（POCD+DNL組）及POCD模型組（POCD組），每組20只。對照組不復(fù)制POCD模型，POCD組與POCD+DNL組在七氟烷麻醉下行單側(cè)腎切除術(shù)進(jìn)行POCD模型復(fù)制。

1.3.3 POCD模型復(fù)制 參考文獻(xiàn)[15]，POCD組與POCD+DNL組大鼠術(shù)前禁食12 h，禁飲2 h，在自制麻醉誘導(dǎo)箱內(nèi)用七氟烷誘導(dǎo)10 min，待翻正反射消失后視為麻醉生效，仰臥位固定于帶有電子發(fā)熱墊的手術(shù)臺，腹部剃毛備皮，手術(shù)切口常規(guī)3遍碘伏消毒，鋪無菌洞巾，于左上腹部行縱行切口2 cm，逐層進(jìn)入腹腔游離左腎，于腎蒂遠(yuǎn)端分別結(jié)扎腎動、靜脈，結(jié)扎輸尿管，完整摘除左腎，止血，檢查無滲血及其他臟器損傷后，用0號絲線按腹膜、肌肉、皮膚逐層縫合。所有手術(shù)操作均嚴(yán)格按照無菌要求進(jìn)行，手術(shù)全程采用大鼠專用麻醉面罩維持麻醉，監(jiān)護(hù)儀監(jiān)護(hù)大鼠生命體征，維持大鼠血氧飽和度99%～100%，體溫（36.0±0.2） ℃。為了確保實(shí)驗(yàn)條件的一致性，所有手術(shù)均由同一術(shù)者完成。術(shù)中及術(shù)后全程保暖，維持手術(shù)室室溫（24±1） ℃，大鼠翻正反射恢復(fù)、可自由行走后判斷為麻醉恢復(fù)，將大鼠按分組回籠飼養(yǎng)，備下一步實(shí)驗(yàn)。

1.3.4 DNL水煎劑制備 稱取DNL超微粉300 g，每100 g單獨(dú)盛放，分別加4 500、3 600、3 000 mL超純水，100 ℃煮1 h，過濾，抽取3次濾液，合并，濃縮成150 mL藥液（相當(dāng)于生藥2 g/mL），整個煎煮過程耗時4 h，煎煮完成后4℃冰箱保存?zhèn)溆茫R用時加熱至常溫[16-17]。

1.3.5 3組模型大鼠的給藥方法 POCD組與POCD+DNL組大鼠于麻醉蘇醒2 h后灌胃，POCD+DNL組按10 g/（kg·d）DNL水煎劑連續(xù)灌胃，POCD組與對照組給予相同體積生理鹽水連續(xù)灌胃。每組取10只，分別灌胃7 d和14 d。

1.3.6 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮由圓形水池（直徑120 cm、高60 cm）、可移動平臺（直徑20 cm、高30 cm）及圖像采集記錄系統(tǒng)三部分組成。將水迷宮平均劃分為4個象限，依次逆時針命名為一、二、三、四象限。將可移動平臺放置于第三象限中央處，水池中注水深度至超過移動平臺（2.0±0.1）cm，加入奶粉600 g混勻，以肉眼無法直視平臺為準(zhǔn)。①定位航行實(shí)驗(yàn)：于復(fù)制POCD模型前進(jìn)行，每天訓(xùn)練4次，連續(xù)測試5 d；依次從4個象限的盆壁中點(diǎn)處將大鼠背向水池放入水中，記錄大鼠從入水到登上平臺時間，即逃避潛伏期，限時120 s；若大鼠在120 s計時結(jié)束時未登上平臺，則將其引導(dǎo)至平臺上休息20 s。②工作記憶實(shí)驗(yàn)：于灌胃后第7、14天進(jìn)行，隨機(jī)放置平臺位置，觀察大鼠找到新平臺位置的時間，記錄為逃避潛伏期時間。

1.3.7 ELISA法檢測血清IL-1β、IL-6、TNF-α的水平于灌胃后第7、14天Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，以1%戊巴比妥鈉30 mg/kg經(jīng)腹腔注射，待大鼠夾尾反射消失表明麻醉生效。腹主動脈取血，裝入抗凝真空采血管內(nèi)，3 000 r/min離心15 min，取上清液，置于-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?；ELISA法檢測血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書操作。

1.3.8 HE染色觀察海馬細(xì)胞形態(tài) 大鼠斷頭取腦，分離右側(cè)腦組織放入4%多聚甲醛中固定24 h，隨后送至遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科進(jìn)行脫水、包埋、切片。采用二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，蘇木精染色液染色，鹽酸乙醇分化液分化，自來水沖洗返藍(lán)，伊紅染色液染色，乙醇水合，二甲苯透明、封片、觀察。

1.3.9 Western blotting檢測海馬中NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量 大鼠斷頭取腦，取左側(cè)海馬組織，在RIPA裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑混合物中勻漿，4 ℃、13 000 r/min離心15 min，取上清液，進(jìn)行蛋白定量，制備上樣蛋白，電泳、轉(zhuǎn)膜、脫脂牛奶封閉；隨后將膜與相應(yīng)Ⅰ抗在4 ℃搖床上孵育過夜。次日TBST緩沖液洗滌3次后，ECL發(fā)光液曝光，采用Image J分析軟件進(jìn)行定量。以Lamin B及GAPDH為內(nèi)參蛋白計算NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用方差分析或重復(fù)測量的方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)或Dunnett's T3檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DNL對衰老模型大鼠術(shù)后學(xué)習(xí)記憶功能的影響

Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練天數(shù)延長，各組大鼠逃避潛伏期呈逐漸縮短且趨于穩(wěn)定趨勢，提示術(shù)前各組大鼠處于同一學(xué)習(xí)基線水平上。見圖1。

圖1 大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期的變化趨勢

工作記憶實(shí)驗(yàn)中，灌胃后第7天，對照組、POCD+DNL組及POCD組的逃避潛伏期分別為（13.93±7.68）、（15.44±6.91）及（27.15±8.76）s，3組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=5.130，P=0.020），POCD組大鼠逃避潛伏期延長；灌胃后第14天，對照組、POCD + DNL組及POCD組的逃避潛伏期分別為（13.58±8.09）、（13.46±9.36）及（24.98±7.74）s，3組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=3.701，P=0.049），POCD組大鼠逃避潛伏期延長。見圖2。

圖2 3組衰老模型大鼠灌胃后的逃避潛伏期比較

2.2 DNL對衰老模型大鼠術(shù)后海馬神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)的影響

對照組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列緊密、整齊，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞核清晰可見，胞質(zhì)清楚（見圖3A、D）。POCD+DNL組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元部分細(xì)胞排列紊亂，少量細(xì)胞核固縮，染色較POCD組均勻（見圖3B、E）。POCD組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列松散，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核固縮，染色較深（見圖3C、F）。

圖3 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài) （HE×200）

2.3 DNL對衰老模型大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的影響

灌胃后第7天和第14天，對照組、POCD+DNL組及POCD組的IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），POCD組較對照組及POCD+DNL組均升高。見表1和圖4。

圖4 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較

表1 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 （n =10，pg/mL，±s）

表1 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平比較 （n =10，pg/mL，±s）

注： ?與POCD組比較，P ＜0.05。

組別對照組POCD + DNL組POCD組F 值P 值第7天IL-1β 4.04±0.56 5.52±0.63?6.85±0.56 34.834 0.000 IL-6 14.98±1.33 18.79±2.61?22.35±2.61 21.052 0.000 TNF-α 36.99±5.56 39.58±4.97?50.50±6.04 13.651 0.000第14天IL-1β 4.52±1.00 4.82±1.04?6.94±1.06 12.986 0.000 IL-6 14.29±1.17 20.23±3.29?26.66±1.26 49.933 0.000 TNF-α 36.50±4.56 38.32±5.54?54.54±3.90 26.602 0.000

2.4 DNL對衰老模型大鼠術(shù)后海馬NF-κB、IκBα蛋白表達(dá)的影響

灌胃后第7天，對照組、POCD+DNL組及POCD組海馬NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），POCD組海馬NF-κB蛋白相對表達(dá)量較對照組及POCD+DNL組升高，IκBα蛋白相對表達(dá)量較對照組及POCD+DNL組降低；灌胃后第14天，對照組、POCD+DNL組及POCD組的海馬NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），POCD組海馬NF-κB蛋白相對表達(dá)量較對照組及POCD+DNL組升高，IκBα蛋白相對表達(dá)量較對照組及POCD+DNL組降低。見表2和圖5、6。

表2 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天海馬NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量比較 （n =10，±s）

表2 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天海馬NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量比較 （n =10，±s）

注： ?與POCD組比較，P ＜0.05。

組別對照組POCD+DNL組POCD組F 值P 值第7天NF-κB 0.60±0.08 0.61±0.15?1.18±0.21 28.434 0.000 IκBα 1.20±0.29 1.22±0.31?0.49±0.12 15.388 0.000第14天NF-κB 0.60±0.09 0.62±0.16?0.96±0.14 14.162 0.000 IκBα 1.23±0.48 1.21±0.32?0.45±0.24 9.085 0.003

圖5 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天海馬NF-κB、IκBα蛋白的表達(dá)

3 討論

POCD作為術(shù)后常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，在老年患者術(shù)后1周發(fā)生率高達(dá)25.5%[2]。POCD不僅延長患者住院時間、降低術(shù)后生活質(zhì)量，術(shù)后并發(fā)癥和死亡率也隨之增加，給家庭照護(hù)及社會公共資源帶來沉重負(fù)擔(dān)[18]。目前臨床上針對POCD的治療手段有限，因此，探尋POCD的發(fā)病機(jī)制、降低其發(fā)生率及尋找一種有效的方法進(jìn)行預(yù)防和治療已成為目前臨床麻醉工作中所面臨的重要挑戰(zhàn)。近來研究表明，DNL能夠通過降低Aβ含量、抑制Tau蛋白磷酸化等起到神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)、抗炎、提高記憶、抗衰老等作用[19-20]。

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測嚙齒動物學(xué)習(xí)記憶能力、空間定位導(dǎo)航能力被認(rèn)為是行為學(xué)研究的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，被廣泛應(yīng)用在學(xué)習(xí)記憶、海馬研究、老年癡呆等多個領(lǐng)域[21]。術(shù)前進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)可反映大鼠獲取空間定位信息的能力，評測大鼠術(shù)前學(xué)習(xí)記憶能力；術(shù)后進(jìn)行工作記憶實(shí)驗(yàn)則反映大鼠術(shù)后的新學(xué)習(xí)能力和瞬時記憶能力[22]。本研究結(jié)果顯示，POCD組在灌胃后第7天及第14天Morris水迷宮工作記憶實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期明顯延長，POCD + DNL組在Morris水迷宮工作記憶實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期明顯縮短。POCD組在灌胃后第14天較灌胃后第7天的逃避潛伏期縮短，但與對照組比較，逃避潛伏期延長，提示經(jīng)過手術(shù)及麻醉后第14天衰老模型大鼠仍存在學(xué)習(xí)記憶能力的損害。此前也曾有報道通過麻醉復(fù)合手術(shù)復(fù)制的POCD動物模型術(shù)后認(rèn)知功能改變最長可到術(shù)后30 d[23]。而中藥藥效發(fā)揮是一個緩慢起效的過程，達(dá)到所需藥效需要一定作用時間[24]。基于以上結(jié)果，本研究推測利用麻醉復(fù)合手術(shù)復(fù)制的POCD動物模型，或許可為今后利用中藥研究POCD提供良好、穩(wěn)定的POCD動物模型。

圖6 3組衰老模型大鼠灌胃后第7天、第14天海馬NF-κB、IκBα蛋白相對表達(dá)量比較

大腦海馬組織位于丘腦和內(nèi)側(cè)顳葉之間，參與構(gòu)成大腦邊緣系統(tǒng)，主要負(fù)責(zé)機(jī)體定向記憶、記憶存儲和認(rèn)知功能[25]，如損害海馬內(nèi)神經(jīng)元，則會影響機(jī)體學(xué)習(xí)記憶進(jìn)程并最終導(dǎo)致認(rèn)知功能的損傷[26]。研究證實(shí)POCD引起的腦損傷會激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，而被激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞能釋放大量炎癥因子進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷[27]。對于腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞損害程度的甄別，形態(tài)學(xué)改變被認(rèn)為是當(dāng)前最佳診斷依據(jù)[28]。為了證實(shí)DNL能夠減輕POCD所致神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度，在行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后使用光學(xué)顯微鏡對各組大鼠腦組織的海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行觀察。結(jié)果顯示，不論在術(shù)后第7天還是第14天，對照組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列緊密、整齊，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞核清晰可見，胞質(zhì)清楚；POCD+DNL組部分細(xì)胞排列紊亂，少量細(xì)胞核固縮，染色較均勻。POCD組海馬神經(jīng)元細(xì)胞排列松散，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核固縮，染色較深。以上研究結(jié)果表明，手術(shù)及麻醉可造成衰老模型大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞的破壞，經(jīng)DNL連續(xù)灌胃可減少衰老大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞的損傷。

目前研究證實(shí)POCD的發(fā)生發(fā)展主要與神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激、β-淀粉樣蛋白和磷酸化Tau蛋白等因素密切相關(guān)，其中神經(jīng)炎癥的機(jī)制研究逐漸受到重視[29]。來自動物實(shí)驗(yàn)的大量數(shù)據(jù)表明，外界刺激因素（如：外傷、手術(shù)等）可誘發(fā)外周炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生大量炎癥因子；炎癥因子跨過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起中樞炎癥反應(yīng)，釋放IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子，從而引起Tau蛋白過度磷酸化，促使β淀粉樣蛋白聚集、膠質(zhì)細(xì)胞過度激活及神經(jīng)毒性物質(zhì)釋放，使神經(jīng)元和神經(jīng)突觸受到損害，最終導(dǎo)致POCD的發(fā)生[30-31]。本研究結(jié)果顯示，POCD組IL-1β、IL-6、TNF-α水平較POCD+DNL組和對照組升高，提示經(jīng)歷手術(shù)和麻醉刺激會引起衰老模型大鼠體內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，但經(jīng)DNL水煎劑治療后，衰老模型大鼠術(shù)后血清炎癥因子水平降低，說明DNL能有效降低炎癥因子水平，發(fā)揮改善神經(jīng)炎癥的作用。

NF-κB信號通路是機(jī)體炎癥反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中參與調(diào)控多種細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)釋放和活性的重要分子通路，在炎癥反應(yīng)的調(diào)控中起核心作用[32]。其中，NF-κB、IκBα是NF-κB信號通路中的重要蛋白[33-34]。本研究結(jié)果也表明，術(shù)后第7天及第14天，POCD組NF-κB蛋白表達(dá)較POCD+DNL組和對照組上調(diào)，IκBα蛋白表達(dá)下降，提示麻醉復(fù)合手術(shù)激活衰老模型大鼠海馬NF-κB信號通路，而經(jīng)DNL水煎劑連續(xù)灌胃后，衰老模型大鼠海馬NF-κB蛋白表達(dá)下降，IκBα蛋白表達(dá)上調(diào)，提示DNL水煎劑可通過抑制NF-κB信號通路，抑制炎癥反應(yīng)，改善POCD。

綜上所述，DNL水煎劑連續(xù)灌胃可明顯減少衰老模型大鼠術(shù)后認(rèn)知功能的損害、減輕神經(jīng)細(xì)胞的損傷程度，降低炎癥因子的水平。DNL水煎劑可能通過抗炎作用及抑制NF-κB信號通路，發(fā)揮減輕神經(jīng)炎癥、改善POCD的功效。