北極茴魚人工繁育技術(shù)初探

◎文/胡軍 陳朋 楊茂源 邢君霞 李立偉 孫建 伍仕焱 郭焱

北極茴魚在我國僅分布于新疆北部的額爾齊斯河流域，近些年由于人為活動和生存環(huán)境變化等因素，導(dǎo)致其資源量急劇衰退，該魚2021年被列為國家Ⅱ級重點保護(hù)野生動物。為豐富該物種資源，團(tuán)隊用兩年時間開展了人工繁育試驗，旨在為北極茴魚人工繁殖和苗種培育提供初步的技術(shù)方案，并為今后的規(guī)?；庇头N質(zhì)資源保護(hù)打下基礎(chǔ)。

北極茴魚（Thymallus arcticus grubei）為冷水性河道型魚類，主要分布于額爾齊斯河支流哈巴河、布爾津河，以及上游卡依爾特河和庫依爾特河等水域，每年春季有短距離的生殖和索餌洄游，以及秋季為躲避干旱和冰凍的洄游。北極茴魚曾是額爾齊斯河重要土著經(jīng)濟(jì)魚類，是我國重要的水產(chǎn)種質(zhì)資源。近些年，受人為活動和生存環(huán)境變化等因素影響，其種群資源量急劇衰退，2004年被列為新疆維吾爾自治區(qū)Ⅱ級重點保護(hù)水生野生動物，2021被列為國家Ⅱ級重點保護(hù)野生動物。

為了使北極茴魚種質(zhì)資源能得到有效保護(hù)和利用，開展人工繁殖技術(shù)研究勢在必行。目前，北極茴魚野生親魚的人工繁殖已有過報道，但馴養(yǎng)野生親魚的人工繁殖方面還未有研究。2021年和2022年，團(tuán)隊對2020年～2021年采集和馴養(yǎng)的北極茴魚進(jìn)行了人工繁殖技術(shù)探索。

一、材料與方法

（一）親魚的來源及培育

2021年開展了馴養(yǎng)組和野生組人工繁殖試驗。馴養(yǎng)組A，是于2020年4月～5月和9月～10月在額爾齊斯河支流布爾津河及輸水渠道通過拉網(wǎng)、垂釣等方式采集的北極茴魚親魚。從中挑選腹部柔軟飽滿、生殖孔外凸的雌魚和有較小生殖突的雄魚共50尾，暫養(yǎng)于養(yǎng)殖車間內(nèi)，放養(yǎng)密度為35尾/m3。暫養(yǎng)缸為直徑2m、高1m的PE圓桶，馴養(yǎng)前用高錳酸鉀對PE桶浸泡消毒，PE桶水深為0.8m，桶周圍上方用豎網(wǎng)圍住，防止親魚跳出。每日投喂黃粉蟲和大麥蟲馴養(yǎng)，投喂量約為魚體重的2%～3%，每日投喂3次（10:00，14:30，19:30）。野生組A，是于2021年4月～5月在額爾齊斯河支流布爾津河通過拉網(wǎng)方式采集的野生北極茴魚親魚，篩選出15尾，暫養(yǎng)于槽形池（4m×1m×0.8m），上方覆蓋鐵絲網(wǎng)防止魚跳出，本組親魚采集后不馴養(yǎng)直接用于人工催產(chǎn)繁殖。暫養(yǎng)水源為井水，PE桶內(nèi)和槽形池內(nèi)均放置抽水泵，使PE桶內(nèi)形成環(huán)形水流，槽形池內(nèi)形成單向水流刺激，水流速度為（0.37±0.1）m/s，水溫為9.8℃～11.2℃。采用增氧設(shè)備增氧，保持水體溶解氧大于6mg/L。每三日換一次水，并刷洗PE桶和槽形池，保持水質(zhì)清潔。

2022年設(shè)置馴養(yǎng)組B開展人工繁殖試驗，該批親魚為2021年馴養(yǎng)組A產(chǎn)后康復(fù)培育、促熟后再次使用?？祻?fù)培育與再促熟在恒溫車間PE桶內(nèi)進(jìn)行，保持水體循環(huán)，水溫12℃～14℃，溶解氧大于6mg/L，培育首月投喂黃粉蟲，其余時間投喂配合飼料。

（二）人工繁殖

選取成熟度較好、體表無傷的親魚進(jìn)行人工催產(chǎn)，本次用于催產(chǎn)的雌魚平均體重（312.89±53.52）g，雄魚平均體重（256.62±42.72）g。

1.雌雄鑒別

北極茴魚雌性個體（見圖1）背鰭高小于頭長，背鰭前緣輪廓較方，有棱角，背鰭整體形狀呈平行四邊形；雌性個體生殖孔呈圓形，繁殖季節(jié)腹部柔軟、圓潤飽滿，生殖孔發(fā)紅或外凸。雄性個體（見圖1）背鰭高大于頭長，背鰭前緣輪廓較圓潤，后部長而高，整體較高大；雄魚背鰭及體兩側(cè)的斑點數(shù)量較多；雄性個體生殖孔有較小生殖突，繁殖季節(jié)輕壓有乳白色精液流出。

2.催產(chǎn)劑選擇

催產(chǎn)藥物為促黃體素釋放激素類似物L(fēng)RH-A2（100μg）和地歐酮DOM（100mg）。用濃度為0.033g/L的MS-222麻醉魚體，麻醉時間2min～3min，蘇醒時間3min。將催產(chǎn)劑配置好后，在胸鰭基部45°進(jìn)針約0.5cm，雌魚按照每千克魚體質(zhì)量注射LRH-A25μg，DOM 5mg，間隔24h注射一次，成熟度較好的雌魚注射2次相同的劑量，成熟度相對較差的雌魚注射3次，第3次劑量減半。雄魚劑量為雌魚劑量一半，注射1次，與雌魚第一針同時注射，輕輕擠壓能流出少量精液的不注射催產(chǎn)劑。

3.人工授精

采用干法授精。親魚麻醉后，擦拭干凈魚體，輕拍腹部多次，從上至下將卵子和精液先后擠入干燥的盆中，羽毛順時針攪拌均勻，向盆內(nèi)加入少量生理鹽水，攪動靜置3min～5min，使魚卵充分受精。加入清水，羽毛輕輕攪動洗卵2次～3次，后補(bǔ)足清水，靜置40min，期間換水2次，使受精卵充分吸水膨脹。待受精卵完全吸水膨脹后計數(shù)，并放置至孵化器中。

4.孵化

將受精卵置于方形孵化槽（80cm×50cm）進(jìn)行微流水孵化，孵化槽上方用遮陽網(wǎng)遮蓋，避免強(qiáng)光照射，定時挑出死卵。隨時觀察水流速度，避免水流過大將受精卵沖出孵化槽。

5.產(chǎn)后親魚護(hù)理

擠卵后及時使用碘制劑或4%高錳酸鉀溶液擦拭雌魚生殖孔消毒，防止因擠壓造成親魚受傷死亡，再將親魚放入池中，以流水刺激加快麻醉的親魚恢復(fù)，待游動正常后減小水流。

（三）苗種培育

1.水源

采用井水，溶氧8mg/L以上，水溫9℃～13℃，微流水。

2.培育池的選擇及處理

魚苗培育采用長形水槽，將水槽刷洗干凈并用高錳酸鉀或聚維酮碘浸泡24h消毒后，用水沖洗干凈，加水待用。由于仔魚較小，為防止魚苗從出水口漏出，出水口加裝篩絹。前期水位保持在0.15m～0.2m，待魚苗生長至20mm～30mm，再加高水位至0.3m～0.5m。

圖1 雌魚（左）與雄魚（右）特征

表1 親魚體重及懷卵量

圖2 北極茴魚幼魚全長

3.餌料選擇及投飼

在水溫10.5℃～12.8℃條件下，受精卵孵化13d左右開始陸續(xù)破膜，初孵仔魚體長約9mm，卵黃囊較大，行內(nèi)源性營養(yǎng)。10日齡左右，卵黃囊吸收過半，選用鹵蟲無節(jié)幼體作為開口餌料，每天投喂4次，每次每萬尾投喂量1.2g～1.6g，餌料密度為600ind/ L～960ind/L。30日齡后，用鹵蟲和粉末飼料混合投喂，逐漸馴化至完全攝食飼料，每日3次，日投餌量為魚體總重的10%～15%。飼料主要營養(yǎng)成分為：粗蛋白≥51%，粗脂肪≥9%，粗灰分≤18%，粗纖維≤3%。投喂40min后清理殘餌糞便，保持水質(zhì)清潔。

二、結(jié)果

（一）雌魚懷卵量及卵徑

統(tǒng)計了6尾魚懷卵量，如表1所示。絕對懷卵量為2105粒/尾～3911粒/尾，平均（3182.8±700.4）粒/尾；相對懷卵量為7.2粒/g～13.2粒/g，平均（11.3±2.3）粒/g；未吸水卵徑為（2.46±0.14）mm，吸水后平均卵徑為（3.14±0.18）mm。體重在277.6g～300.0g時，體重與絕對懷卵量呈一定的正相關(guān)關(guān)系（R2=0.8054）。

（二）卵子質(zhì)量

馴養(yǎng)組A及野生組A的親魚卵子均呈金黃色。馴養(yǎng)組B的親魚中，有部分親魚卵子呈白色，另有少量親魚卵子呈白黃相間，白卵卵徑大于黃卵，白卵形狀較規(guī)則（卵徑2mm），黃卵較干癟（卵徑1mm）。

（三）雌性親本催產(chǎn)效果

人工繁殖共分為8組（見表2），在水溫10.68℃～11.56℃條件下，雄魚注射1次或不注射，雌魚注射2針～3針，效應(yīng)時間72h～120h。2021年共有8尾雌魚產(chǎn)卵，共計采卵20000余粒，平均受精率為65.22%，歷時301h，獲初孵仔魚5360尾，平均孵化率為40.50%。2022年共有10尾雌魚產(chǎn)卵，采卵18000粒，獲初孵仔魚280尾。整體來看，野生組的受精率和孵化率高于馴養(yǎng)組。

（四）幼魚生長情況

如圖2所示，北極茴魚幼魚全長生長曲線公式為：L=0.4418d+9.4206（R2=0.9957）。表明，180日齡前北極茴魚幼魚全長隨日齡的增加而增長，但全長生長速度隨日齡的增加呈下降趨勢。

三、討論

（一）親魚適宜的養(yǎng)殖條件和營養(yǎng)需求

培育環(huán)境和營養(yǎng)條件是影響親魚性腺發(fā)育的重要因素。一方面，人工培育環(huán)境與天然環(huán)境在水溫、水流等方面存在差別，人工培育環(huán)境應(yīng)盡可能還原其生境條件，以利于魚體內(nèi)分泌系統(tǒng)發(fā)揮功能，從而促進(jìn)性腺發(fā)育及成熟。另一方面，投喂餌料的營養(yǎng)與天然餌料有一定差距，可以在初期使用天然餌料，并進(jìn)一步優(yōu)化飼料成分，滿足北極茴魚的營養(yǎng)需求。北極茴魚在自然環(huán)境中有頂水的習(xí)性，在繁殖季節(jié)可加大水流刺激，水流直接影響魚類的游動，而運(yùn)動的增加將影響其新陳代謝和生理功能，進(jìn)而影響魚類生長發(fā)育。

研究指出，油球是北極茴魚胚胎發(fā)育過程中的關(guān)鍵物質(zhì)，受精卵中油球數(shù)量和空間分布經(jīng)歷了規(guī)律性變化。據(jù)相關(guān)報道，葉尼塞河流域的北極茴魚繁殖季節(jié)前在肌肉組織中積累了必需多不飽和脂肪酸（PUFA），如二十碳五烯（EPA）和二十二碳六烯（DHA），然后在卵巢發(fā)育過程中PUFA從肌肉轉(zhuǎn)移到了卵巢中，性腺組織的PUFA含量是肌肉組織的3倍～4倍，說明PUFA對該魚繁殖有至關(guān)重要的作用。本試驗中北極茴魚卵子油球是否含有大量PUFA有待進(jìn)一步驗證?？赏ㄟ^向餌料中添加相應(yīng)藻類及維生素礦物質(zhì)，使魚體富集PUFA。還需要通過投喂?fàn)I養(yǎng)更豐富的餌料，如鮮活餌料魚、搖蚊幼蟲、大麥蟲等昆蟲以加強(qiáng)營養(yǎng)。

（二）繁殖期、催產(chǎn)及孵化方式

據(jù)報道，北極茴魚的繁殖期為4月下旬～7月，根據(jù)人工繁殖試驗及野外采捕親魚的發(fā)育情況來看，5月為北極茴魚產(chǎn)卵盛期。北極茴魚長期生活的水域環(huán)境水溫較低，因此其催產(chǎn)效應(yīng)時間較長。同時，試驗中發(fā)現(xiàn)北極茴魚卵的成熟期較短，若不及時檢查魚體就會錯過卵的成熟期，擠出的卵子出現(xiàn)過熟、帶血的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致受精率降低。因此，隨著催產(chǎn)激素注射劑次的增加，檢查魚體成熟度的時間間隔要縮短，以免錯過最佳采卵期。

在受精卵孵化過程中，孵化筐底部和受精卵表面時常有氣泡附著，長期有氣泡附著會導(dǎo)致受精卵缺氧死亡。用羽毛輕輕拂過孵化筐底部去除氣泡又會導(dǎo)致受精卵不能處于靜止?fàn)顟B(tài)從而影響孵化效果，產(chǎn)生氣泡的原因一是水質(zhì)硬度較高，二是水未充分曝氣。因此，孵化用水要充分曝氣后使用。

（三）精子、卵子質(zhì)量鑒定

北極茴魚雄魚的精巢靠近體前端，距離生殖孔較遠(yuǎn)，因此，擠出的精液量較少，對該魚的人工授精彌足珍貴。擠出的精液可以置于干燥的玻璃器皿4℃避光環(huán)境保存待用。用時取少量精液加生理鹽水激活后，在顯微鏡下觀察精子活力，整個視野中70%精子做不規(guī)則運(yùn)動，時間不少于40s的方可用于人工授精。

剛擠出的卵粒呈圓球形，金黃色，微黏性，大小均勻，外形飽滿有光澤，呈透明，卵的游離程度高，在解剖鏡下可清晰觀察到卵內(nèi)均勻分布的油球。具有以上特征的卵為較優(yōu)質(zhì)的成熟卵，優(yōu)先用于人工授精。顏色較淡的、未完全游離的、透明度低的、油球分布不均勻及出現(xiàn)白黃卵相間的則為質(zhì)量較差的卵。

（四）魚苗培育

初孵魚苗全長9.33mm，166日齡時，全長82.50mm，體重3.60g。在1日齡～166日齡，全長呈線性增長趨勢。在苗種培育期間需要注意以下事項，一是要根據(jù)魚苗規(guī)格及游動能力調(diào)整水位，隨著魚苗的生長逐漸加高水位。在魚苗游動能力較弱的情況下，若水位過高，則會使魚苗消耗過多體力。二是投喂期間應(yīng)及時清理殘餌糞便和換水，保持水質(zhì)清新和溶氧充足，以免積累的絮狀殘餌附著在魚鰓部影響魚苗呼吸并致死。三是魚苗的攝食能力不一，要及時挑選出攝食能力較差的魚苗，分批次培育，否則會造成體格健壯的魚苗搶食，加大魚苗之間的生長差異，并造成自殘。