• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    食品危害物重組抗體的親和力提升策略研究進(jìn)展

    2023-03-09 13:55:44馬路凱肖更生沈玉棟徐振林
    食品科學(xué) 2023年3期
    關(guān)鍵詞:危害

    王 鋒,謝 曦,馬路凱,王 琴,肖更生,沈玉棟,徐振林,王 弘,*

    (1.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部嶺南特色食品綠色加工與智能制造重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省嶺南特色食品科學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510225;2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510642)

    基于抗原-抗體識(shí)別的免疫分析方法是可用于食品抽查檢測(cè)的快速檢測(cè)技術(shù),其具有操作簡(jiǎn)單、高特異性、高靈敏度和高通量等優(yōu)點(diǎn)??贵w作為免疫分析的核心試劑,已被廣泛應(yīng)用于食品中多種危害物的快速檢測(cè)。目前,基于特異性抗體建立了酶聯(lián)免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、熒光免疫分析、電化學(xué)免疫分析等多種方法,實(shí)現(xiàn)了食品中多種危害物的靈敏、快速和高通量檢測(cè)[1-4]。包括多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈抗體、納米抗體在內(nèi)的多樣化抗體被大量研發(fā)和應(yīng)用,抗體制備技術(shù)經(jīng)歷了從隨機(jī)非定向制備多克隆抗體到定向制備重組抗體(單鏈抗體、抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment,F(xiàn)ab)抗體、納米抗體等)的跨越式發(fā)展[5-7]。然而,食品危害物不僅包括小分子質(zhì)量的農(nóng)藥、獸藥和生物毒素等,還包括具有大分子特征蛋白的食品致病菌、過(guò)敏原等,不同特性的危害物增加了重組抗體制備的難度[8-9]。一些重組抗體對(duì)分析物的親和力較低,限制了其在免疫分析中的應(yīng)用及其免疫快速檢測(cè)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)[10]。

    抗體親和力是抗體與抗原之間的特異性結(jié)合的能力,體現(xiàn)了兩者特異性識(shí)別作用的強(qiáng)弱,在目標(biāo)分析物的定量分析、抗體的進(jìn)化改造、免疫分析方法的建立及快速檢測(cè)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域具有重要的研究意義和應(yīng)用價(jià)值[11]。提升重組抗體親和力可以突破現(xiàn)有重組抗體親和力不佳的局限性,拓寬原始抗體的生物活性和應(yīng)用價(jià)值。本文概述食品危害物重組抗體的制備技術(shù),從重組抗體突變進(jìn)化、突變庫(kù)篩選、多價(jià)抗體及融合蛋白自組裝等方面闡述重組抗體親和力的提升策略,探討重組抗體親和力提升研究面臨的技術(shù)瓶頸,并對(duì)該領(lǐng)域研究方向進(jìn)行展望。

    1 食品危害物重組抗體的制備技術(shù)

    食品危害物的重組抗體作為一種已知氨基酸序列的基因工程抗體,主要包括單鏈抗體、Fab、納米抗體等,可以通過(guò)抗體基因克隆和抗體庫(kù)篩選兩種方式制備(圖1)[12-13]??贵w基因克隆技術(shù)主要是利用抗體簡(jiǎn)并引物對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增,再通過(guò)外源表達(dá)獲得重組抗體;而抗體庫(kù)篩選技術(shù)是以前期構(gòu)建的抗體庫(kù)為基礎(chǔ),通過(guò)噬菌體展示技術(shù)、酵母展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等多種策略實(shí)現(xiàn)重組抗體的制備[14-15]。與抗體基因克隆技術(shù)相比,抗體庫(kù)篩選技術(shù)具有更高的制備效率,獲得的重組抗體具有更高的抗原特異性和抗體多樣性。以農(nóng)藥、獸藥、重金屬、生物毒素為代表的小分子類危害物具有較小的分子質(zhì)量,一般采用動(dòng)物免疫策略來(lái)提高重組抗體制備的有效性,其重組抗體制備存在一定的難度;以食源性致病菌和過(guò)敏原為代表的大分子類危害物,其特征蛋白具有多個(gè)抗原決定簇,重組抗體的制備較為容易,但針對(duì)單個(gè)抗原決定簇的抗體不易獲得。因此,食品危害物重組抗體的制備技術(shù)較為單一,通過(guò)上述方式制備的重組抗體存在非定向性和非精準(zhǔn)性,一般來(lái)說(shuō)重組抗體親和力具有很大的提升空間。

    圖1 食品危害物重組抗體種類及其制備技術(shù)Fig.1 Types of and preparation technologies for recombinant antibodies against food hazards

    2 食品危害物重組抗體的親和力提升策略

    食品危害物重組抗體的親和力決定了免疫分析方法檢測(cè)靈敏度,對(duì)于食品危害物的快速檢測(cè)具有重要意義。作為一種基因工程抗體,食品危害物重組抗體具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易于通過(guò)基因工程手段進(jìn)行改造等特點(diǎn),可以通過(guò)重組抗體突變進(jìn)化、重組抗體突變庫(kù)篩選、常規(guī)多價(jià)重組抗體、重組抗體融合蛋白自組裝等策略實(shí)現(xiàn)重組抗體親和力的提升(圖2)。

    圖2 重組抗體親和力提升的幾種策略Fig.2 Several strategies for improving the affniity of recombinant antibodies

    2.1 重組抗體突變進(jìn)化提升親和力

    與傳統(tǒng)抗體(多克隆抗體、單克隆抗體)相比,重組抗體在分子水平上的突變進(jìn)化非常簡(jiǎn)單[16]。重組抗體關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的鑒定是抗體突變進(jìn)化的關(guān)鍵,利用抗體同源模建和分子對(duì)接技術(shù)獲得抗體-目標(biāo)物關(guān)鍵識(shí)別位點(diǎn)的定位[17],進(jìn)而利用抗體單點(diǎn)突變或多點(diǎn)突變對(duì)原始抗體進(jìn)行改造,實(shí)現(xiàn)高親和力新抗體的制備和突破抗體親和力不高的限制[18-20]。鄧龍等[21]通過(guò)同源模建得到克百威農(nóng)藥單鏈抗體抗體的三維模型,并利用分子對(duì)接技術(shù)將其與小分子農(nóng)藥進(jìn)行對(duì)接,發(fā)現(xiàn)疏水作用和氫鍵能夠極大影響該抗體的親和力?;谔摂M突變技術(shù)確定了關(guān)鍵氨基酸殘基重鏈Arg40和輕鏈His38及突變氨基酸殘基重鏈Leu40和輕鏈Leu38,突變后單鏈抗體親和力提高了2.23 倍。王方雨等[22]利用同樣方法確定新霉素單鏈抗體的一個(gè)關(guān)鍵氨基酸殘基為L(zhǎng)eu227,并將其突變?yōu)锳sp227,突變體的靈敏度提高了16.6 倍。He Xin[23]、Wang Jianping[24]和Xie Sanlei[25]等分別將羥氨芐青霉素單鏈抗體、沙拉沙星單鏈抗體和金剛烷胺單鏈抗體的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行突變,提升了這些抗體對(duì)11 種青霉素類藥物、12 種氟喹諾酮類藥物和金剛烷胺的親和力,基于突變抗體的免疫快速檢測(cè)方法靈敏度提高了3.9~7.0 倍。鏈霉親和素的Fab抗體經(jīng)過(guò)定點(diǎn)突變后,其親和力提高了6.3~10.7 倍[26]。針對(duì)結(jié)構(gòu)更為簡(jiǎn)單的納米抗體,其關(guān)鍵位點(diǎn)氨基酸可以影響目標(biāo)物特異性識(shí)別口袋腔的形成及相互作用力,進(jìn)而影響納米抗體的親和力[27-28]。黃曲霉毒素B1納米抗體的兩個(gè)關(guān)鍵氨基酸經(jīng)定點(diǎn)突變后,檢測(cè)靈敏度分別提高2.3 倍和3.3 倍,并利用核磁共振技術(shù)闡述了納米抗體對(duì)黃曲霉毒素B1的特異性識(shí)別機(jī)制[29]。納米抗體的晶體結(jié)構(gòu)能夠很好地闡釋關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)對(duì)抗體-抗原特異性結(jié)合的重要影響[30-31]。盡管重組抗體的制備存在不確定性,但仍可通過(guò)鑒定其關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)并經(jīng)過(guò)抗體的定點(diǎn)突變最終實(shí)現(xiàn)重組抗體親和力的進(jìn)化提升(圖3)。

    圖3 不同抗體與目標(biāo)分子的對(duì)接模型Fig.3 Docking models of different antibodies and target molecules

    2.2 利用重組抗體突變庫(kù)篩選高親和力重組抗體

    基于重組抗體突變庫(kù)的抗體親和力成熟策略主要是利用原始抗體的基因框架,進(jìn)行突變庫(kù)的設(shè)計(jì)合成和高親和力抗體的制備[32-34],這樣既在一定程度上保證抗體特異性,又可以增加目標(biāo)物抗體的多樣性[35]。重組抗體突變庫(kù)的高效設(shè)計(jì)合成是利用重組抗體突變庫(kù)篩選高親和力抗體的關(guān)鍵。目前,抗體突變庫(kù)的設(shè)計(jì)方法主要有隨機(jī)突變、飽和突變、NNK突變(N代表4 種核苷酸,K代表核苷酸C/G)、NNY突變(Y代表核苷酸C/T)等,而抗體突變庫(kù)的設(shè)計(jì)模式、庫(kù)容大小、多樣性及篩選方法等都會(huì)影響高親和力抗體的篩選(表1)。焦凌霞等[36]首先基于分子對(duì)接確定了蘇云金芽孢桿菌毒素Bt Cry1Ac單鏈抗體與5 種Cry1毒素蛋白(Cry1Ac、Cry1B、Cry1C、Cry1E和Cry1F)的共同關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)為Tyr104、Phe105和Tyr107,隨后利用三位點(diǎn)共同突變構(gòu)建了高質(zhì)量突變庫(kù)用于高親和力單鏈抗體篩選,這與Bt Cry1單鏈抗體的突變體篩選研究一致[37]。針對(duì)蘇云金芽孢桿菌毒素Bt Cry1B抗獨(dú)特型單鏈抗體與昆蟲蛋白BBMV結(jié)合能力不高的問(wèn)題,仲建鋒等[38]利用熱點(diǎn)氨基酸構(gòu)建Cry1B抗獨(dú)特型單鏈抗體飽和突變庫(kù),篩選獲得高親和力突變體Y124G。龐倩等[39]針對(duì)黃曲霉毒素B1納米抗體的CDR2和CDR3區(qū)引入部分隨機(jī)突變,構(gòu)建了高質(zhì)量突變庫(kù),篩選得到的15 種新納米抗體中有4 種親和力有明顯提高。吳紅靜等[40]利用易錯(cuò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)并優(yōu)化了突變條件,構(gòu)建了突變均衡的納米抗體隨機(jī)突變庫(kù),篩選獲得檢測(cè)信號(hào)提高2.1 倍以上的8 種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇納米抗體突變體。陳姣等[41]利用納米抗體CDR3的NNY突變方式構(gòu)建了高庫(kù)容飽和突變庫(kù),并分析了突變前后的功能多樣性。Qiu Yulou[42]、Chen Feng[43]和Wang Xuerou[44]等利用NNK突變方式分別構(gòu)建了多樣性較高的納米抗體飽和突變庫(kù),篩選得到了針對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇模擬抗原、花生過(guò)敏原Ara h 3和赭曲霉毒素A的高親和力納米抗體突變體。Xu Chongxin等[45]同樣利用NNK突變方式將微囊藻毒素MC-LR納米抗體與重鏈可變區(qū)片段基因融合制備突變庫(kù),篩選得到5 種高親和力的新型雙功能重組抗體?;诳贵w突變庫(kù)的高親和力抗體篩選策略,同時(shí)借助噬菌體展示技術(shù)、酵母表面展示技術(shù)等并結(jié)合液相磁珠篩選、熒光篩選等高效淘篩技術(shù),可以避免隨機(jī)突變的完全非定向性,在一定程度上既保證了抗體的高特異性,又提高了高親和力抗體篩選的定向性和高效性。

    表1 食品中危害物重組抗體突變庫(kù)的構(gòu)建及高親和力抗體篩選的研究進(jìn)展Table 1 Progress in the construction of recombinant antibody mutation library for hazardous substances in foods and the screening of high-affinity antibodies

    2.3 制備常規(guī)多價(jià)重組抗體提升親和力

    重組抗體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、分子質(zhì)量較小,通過(guò)抗體基因的多價(jià)串聯(lián)或納米材料修飾方式很容易獲得常規(guī)的多價(jià)抗體(圖4),可以有效提高其與抗原的結(jié)合能力,也是提高重組抗體親和力和功能活性的有效手段[46-48]。Yajima等[49]利用連接肽將植物核盤菌的單鏈抗體基因串聯(lián)制備二價(jià)單鏈抗體,分析物結(jié)合活性提高為原來(lái)的2 倍。吳鵬等[50]利用類似方法制備二價(jià)納米抗體用于綿羊肌肉生長(zhǎng)抑制素分析。Huang Yunxiang等[51]采用基因串聯(lián)方式制備了二價(jià)、三價(jià)和四價(jià)納米抗體用于駝科動(dòng)物抗體的親和純化。He Jinxin等[52]采用串聯(lián)方式制備四溴雙酚A二價(jià)和三價(jià)生物素化納米抗體用于細(xì)菌磁性顆粒的修飾標(biāo)記,二價(jià)和三價(jià)納米抗體磁性標(biāo)記物的親和力分別是單體的3.4、11.4 倍,極大提高了原有納米抗體的結(jié)合活性和分析檢測(cè)靈敏度;隨后,He Jinxin等[53]又利用該策略制備了擬除蟲菊酯代謝物3-苯氧基苯甲酸的生物素化三價(jià)納米抗體,并將其應(yīng)用于生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)的酶聯(lián)免疫分析方法的建立,檢測(cè)靈敏度提高3.6 倍,說(shuō)明納米抗體的多價(jià)形式可以通過(guò)增加其結(jié)合能力來(lái)提高其與目標(biāo)物的親和力。此外,新型納米材料被廣泛用于標(biāo)記修飾重組抗體來(lái)提高抗體親和力,通過(guò)不同的修飾方式可以實(shí)現(xiàn)重組抗體的非定向標(biāo)記和定向標(biāo)記,且不同材質(zhì)、粒徑、形貌等材料特性均會(huì)影響其親和力[54-57]。

    圖4 多價(jià)重組抗體示意圖Fig.4 Schematic diagram of multivalent recombinant antibodies

    2.4 重組抗體融合蛋白的自組裝作用提升親和力

    盡管常規(guī)多價(jià)重組抗體的研究已有報(bào)道,但利用基因多級(jí)串聯(lián)方式制備多價(jià)抗體仍存在表達(dá)量較低、生物活性不高、特異性較低等不足。目前,利用特定天然多肽或功能化蛋白制備抗體融合蛋白,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)抗體融合蛋白的自組裝作用,也是提升原始抗體親和力的有效策略[48,58-59]。納米抗體具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、分子質(zhì)量小等特性,通過(guò)基因重組方式制備多價(jià)納米抗體,有效提高其親和力和生物活性。以亮氨酸拉鏈、右手螺旋多肽、軟骨寡聚基質(zhì)蛋白、C4結(jié)合蛋白、腸出血性大腸桿菌VT1B亞單位、鐵蛋白亞基等為抗體融合蛋白骨架(圖5),可以實(shí)現(xiàn)重組抗體融合蛋白的自組裝多聚體,避免了多價(jià)抗體的無(wú)序排列和生物活性干擾等[60-66]。Blanco-Toribio[67]、Alvarez-Cienfuegos[68]等利用人膠原蛋白XVIII的三聚域多肽制備獲得單鏈抗體和納米抗體的三聚體,多聚體生物活性顯著提高。武文[69]、張俊毅[70]等分別將脂多糖納米抗體基因、赭曲霉毒素A納米抗體基因與VT1B基因融合重組,制備的納米抗體五聚體能與目標(biāo)物特異結(jié)合,親和力和生物活性顯著提高。Li Zhenfeng[71]、Bao Kunlu[72]等分別將C4結(jié)合蛋白與四溴雙酚A納米抗體-納米熒光素酶雙功能蛋白、赭曲霉毒素A納米抗體基因進(jìn)一步融合表達(dá),制備得到融合蛋白七聚體,二者方法的靈敏度分別提高7.00 倍和26.54 倍。來(lái)源于嗜熱古菌的鐵蛋白能夠自組裝成籠型結(jié)構(gòu)的二十四聚體,具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性和親和力,利用鐵蛋白展示多價(jià)納米探針可以顯著提高納米探針的親和力和生物活性。Wang Feng等[73]將鐵蛋白亞基與細(xì)交鏈孢菌酮酸毒素的納米抗體-納米熒光素酶雙功能蛋白進(jìn)一步融合表達(dá)制備融合蛋白的二十四聚體,檢測(cè)靈敏度提高了10.5 倍,驗(yàn)證了鐵蛋白作為多價(jià)抗體骨架展示納米抗體的有效性??贵w自組裝多聚體作為一種親和力提升新策略,通過(guò)對(duì)自組裝骨架多肽/功能蛋白的優(yōu)化調(diào)控,構(gòu)建骨架有序集成的抗體多價(jià)組裝體,可以有效提高抗體的生物活性。

    圖5 納米抗體及其融合蛋白的自組裝多聚體Fig.5 Nanobody and self-assembled multimers of its fusion proteins

    3 食品危害物重組抗體親和力提升的技術(shù)瓶頸

    3.1 重組抗體突變及突變庫(kù)篩選時(shí)關(guān)鍵識(shí)別位點(diǎn)較難確定

    重組抗體的關(guān)鍵氨基酸對(duì)抗體親和力具有重要影響[19,40,44],因此利用重組抗體突變進(jìn)化或突變庫(kù)篩選制備高親和力重組抗體,需要預(yù)先確定抗體特異性識(shí)別食品危害物的關(guān)鍵位點(diǎn),進(jìn)而對(duì)關(guān)鍵識(shí)別位點(diǎn)進(jìn)行定向突變或隨機(jī)突變。目前,多采用SWISS-MODEL同源模建的方法進(jìn)行抗體關(guān)鍵識(shí)別位點(diǎn)的分析,但該方法存在抗體模板較多、抗體三維結(jié)構(gòu)模型不夠精確、分子對(duì)接不夠準(zhǔn)確等缺點(diǎn);AlphaFold/AlphaFold2是以深度神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)不斷優(yōu)化抗體模型質(zhì)量,獲得的抗體模型具有較高的精準(zhǔn)性[74-75],聯(lián)合這兩種分子模擬技術(shù)可以有效提高重組抗體模型的精準(zhǔn)度和分子識(shí)別機(jī)制的準(zhǔn)確度。此外,有研究通過(guò)蛋白結(jié)晶的方法獲得重組抗體的晶體結(jié)構(gòu)[31,76-77],進(jìn)而確定抗體的關(guān)鍵識(shí)別氨基酸,此方法可以顯著提高重組抗體突變或突變庫(kù)篩選的效率和定向性。

    3.2 多價(jià)重組抗體形式容易影響抗體活性

    常規(guī)多價(jià)抗體和抗體自組裝形式均是通過(guò)制備多價(jià)重組抗體來(lái)提高抗體的親和力,而利用重組抗體修飾納米材料也可制備獲得多價(jià)重組抗體。常規(guī)多價(jià)抗體多采用抗體串聯(lián)方式,但由于抗體亞基空間結(jié)構(gòu)的交叉及無(wú)序排列,在一定程度上會(huì)影響多價(jià)重組抗體的活性[52-53]。以活性多肽片段等為骨架,可以通過(guò)抗體自組裝獲得多價(jià)重組抗體,避免了多個(gè)抗體的無(wú)序排列,可實(shí)現(xiàn)納米抗體多聚體的自組裝[65,78];但隨著重組抗體多聚體的進(jìn)一步形成,高聚體的生物活性會(huì)受到多個(gè)抗體亞基的影響,低聚體的生物活性可能會(huì)高于多聚體生物活性,這與不同重組抗體的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系。盡管利用納米材料標(biāo)記重組抗體可以獲得多價(jià)重組抗體,但常常需要經(jīng)過(guò)特定的化學(xué)偶聯(lián)反應(yīng),對(duì)抗體的生物活性會(huì)產(chǎn)生一定的影響。因此,盡可能采用抗體自組裝策略制備多價(jià)重組抗體,同時(shí)要考慮到重組抗體低聚體和重組抗體高聚體的區(qū)別與聯(lián)系。

    3.3 不同危害物或不同類型重組抗體的親和力提升策略不具有普適性

    食品中農(nóng)藥、獸藥、重金屬、生物毒素、食源性致病菌和過(guò)敏原等危害物嚴(yán)重影響著食品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和質(zhì)量安全。不同食品危害物的重組抗體在蛋白序列同源性和三維空間結(jié)構(gòu)上具有很大的差異,這也會(huì)影響抗體的親和力和檢測(cè)性能[79-80]。不同危害物的重組抗體具有較高的識(shí)別特異性,具體表現(xiàn)為抗體-危害物的結(jié)合方式、關(guān)鍵氨基酸、相互作用力等多個(gè)方面。此外,單鏈抗體、Fab抗體和納米抗體在結(jié)構(gòu)上既有較高相似性也有較大區(qū)別之處,這與不同類型重組抗體的生物特性有很大關(guān)系。因此,抗體突變進(jìn)化、突變庫(kù)篩選、多價(jià)抗體及融合蛋白自組裝等策略僅可作為重組抗體親和力提升的可行性依據(jù),對(duì)于不同食品危害物或者不同類型的重組抗體要選用多種研究策略進(jìn)行分析比較。

    4 結(jié)語(yǔ)

    隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與食品產(chǎn)業(yè)的高速發(fā)展,食品危害物呈現(xiàn)出種類繁多、污染范圍和水平廣、檢測(cè)難度大等特點(diǎn)?;诳贵w的免疫檢測(cè)方法在食品危害物的高通量快速篩查領(lǐng)域有極大的應(yīng)用前景。重組抗體作為一種特殊形式的基因工程抗體,可以實(shí)現(xiàn)抗體基因的突變進(jìn)化、修飾改造和定向組裝。盡管重組抗體的研制具有一定的定向性和高效性,但如何進(jìn)一步突破其親和力的限制仍是一個(gè)值得探究的科學(xué)問(wèn)題,此外,如何研制高親和力抗體是食品安全快速檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)展的重大需求。

    目前,包括抗體突變進(jìn)化、突變庫(kù)篩選、多價(jià)抗體及融合蛋白自組裝等在內(nèi)的研究策略被應(yīng)用于提升重組抗體親和力,但在高親和力抗體創(chuàng)制的定向性、高效性、便捷性及抗體親和力與特異性識(shí)別機(jī)制的關(guān)聯(lián)性等方面還需要不斷探索和闡述。以重組抗體晶體結(jié)構(gòu)解析為基礎(chǔ),利用重組抗體突變庫(kù)結(jié)合高效淘篩技術(shù)和定向突變技術(shù)制備獲得高親和力抗體,并構(gòu)建重組抗體多價(jià)自組裝平臺(tái),可以實(shí)現(xiàn)重組抗體親和力的多級(jí)提升。與單鏈抗體和Fab抗體相比,納米抗體作為一種結(jié)構(gòu)更為簡(jiǎn)單的新型重組抗體,具有較高的熱穩(wěn)定性、有機(jī)溶劑耐受性和分析物高特異識(shí)別特性,在重組抗體親和力提升研究中更為便捷,在食品危害物免疫快速檢測(cè)中有很大的應(yīng)用前景。此外,包括冷凍電子顯微鏡技術(shù)、現(xiàn)代光譜技術(shù)、高分辨質(zhì)譜技術(shù)、X射線晶體衍射技術(shù)、非標(biāo)記生物分子互作技術(shù)、AlphaFold/AlphaFold2技術(shù)等蛋白質(zhì)分析及分子模擬技術(shù)為重組抗體的虛擬篩選及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)提供了極大的便利,為基于結(jié)構(gòu)導(dǎo)向的高親和力重組抗體的制備提供了新的技術(shù)借鑒和研究策略。

    猜你喜歡
    危害
    降低燒烤帶來(lái)的危害
    支架≠治愈,隨意停藥危害大
    肥胖危害知多少
    藥+酒 危害大
    海峽姐妹(2020年12期)2021-01-18 05:53:26
    孕期便秘的危害及注意事項(xiàng)
    熱輻射的危害
    水上消防(2020年5期)2020-12-14 07:16:26
    網(wǎng)絡(luò)的危害(三)
    新少年(2017年6期)2017-06-16 17:41:58
    酗酒的危害
    喝飲料的危害
    “久坐”的危害有多大你知道嗎?
    民生周刊(2016年9期)2016-05-21 12:11:19
    老司机深夜福利视频在线观看| a在线观看视频网站| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美日韩精品网址| 99久久国产精品久久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 黄色丝袜av网址大全| 99热只有精品国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| www.自偷自拍.com| 国产一区二区三区综合在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 变态另类丝袜制服| 色在线成人网| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人欧美| 日韩欧美国产一区二区入口| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久人妻熟女aⅴ| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 午夜福利欧美成人| 电影成人av| 婷婷丁香在线五月| 亚洲国产精品合色在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 黄频高清免费视频| e午夜精品久久久久久久| 夜夜夜夜夜久久久久| 日本vs欧美在线观看视频| 无人区码免费观看不卡| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲人成电影免费在线| 无人区码免费观看不卡| 性欧美人与动物交配| 91麻豆av在线| 精品久久蜜臀av无| 人妻久久中文字幕网| 国产精品 欧美亚洲| 久久热在线av| 色播在线永久视频| 91在线观看av| 国产在线观看jvid| 母亲3免费完整高清在线观看| 中出人妻视频一区二区| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av熟女| 精品久久蜜臀av无| 少妇 在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久人人97超碰香蕉20202| 变态另类丝袜制服| 成人国语在线视频| 激情在线观看视频在线高清| 久久精品国产清高在天天线| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲在线自拍视频| 97碰自拍视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久9热在线精品视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久香蕉激情| 国产熟女xx| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲五月婷婷丁香| 日韩大尺度精品在线看网址 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲国产欧美网| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产av精品麻豆| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 身体一侧抽搐| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费不卡黄色视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲国产精品999在线| 性色av乱码一区二区三区2| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 一本大道久久a久久精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 正在播放国产对白刺激| 一区二区三区高清视频在线| av有码第一页| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲三区欧美一区| 久久久久久大精品| 91麻豆av在线| 亚洲欧美激情在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av五月六月丁香网| 日本欧美视频一区| 日本 欧美在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产国语露脸激情在线看| 色播在线永久视频| 美女免费视频网站| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久久久精品国产欧美久久久| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久精品影院6| 午夜老司机福利片| 欧美日韩精品网址| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品欧美一区二区三区在线| 精品国产亚洲在线| 99在线人妻在线中文字幕| 三级毛片av免费| 一本综合久久免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品无人区乱码1区二区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产国语露脸激情在线看| 搡老熟女国产l中国老女人| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品久久久av美女十八| 青草久久国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品 欧美亚洲| 身体一侧抽搐| 久久中文字幕一级| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品综合久久久久久久免费 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 波多野结衣高清无吗| 欧美日韩乱码在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲伊人色综图| av视频在线观看入口| 日韩欧美国产在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 色哟哟哟哟哟哟| 久久久国产精品麻豆| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 日韩欧美在线二视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | √禁漫天堂资源中文www| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲中文av在线| 性欧美人与动物交配| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 一个人免费在线观看的高清视频| 高清在线国产一区| 亚洲精品一区av在线观看| 男女下面插进去视频免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人三级黄色视频| 亚洲成av人片免费观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 黄色视频不卡| 成人18禁在线播放| 久久久久久人人人人人| 夜夜爽天天搞| netflix在线观看网站| 男女下面进入的视频免费午夜 | 十分钟在线观看高清视频www| 久热爱精品视频在线9| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 在线观看66精品国产| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲美女黄片视频| 麻豆国产av国片精品| 搞女人的毛片| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品欧美一区二区三区在线| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人成电影观看| 99国产精品一区二区三区| 亚洲男人天堂网一区| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99热只有精品国产| 狂野欧美激情性xxxx| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 在线观看免费日韩欧美大片| 美女国产高潮福利片在线看| 黄色视频,在线免费观看| 中文字幕最新亚洲高清| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精华一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 宅男免费午夜| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲一区二区三区色噜噜| 91av网站免费观看| 人人澡人人妻人| 国产在线观看jvid| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 9热在线视频观看99| 久久久水蜜桃国产精品网| 精品久久久久久成人av| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美色视频一区免费| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 女性生殖器流出的白浆| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品久久久久久,| 国产av又大| 色老头精品视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 嫩草影视91久久| 色播亚洲综合网| 看片在线看免费视频| 久久亚洲精品不卡| 国产麻豆69| 亚洲电影在线观看av| 性色av乱码一区二区三区2| 最新美女视频免费是黄的| 久久久国产欧美日韩av| 91国产中文字幕| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产精品av久久久久免费| xxx96com| 91麻豆精品激情在线观看国产| 在线av久久热| 日本五十路高清| 亚洲五月婷婷丁香| 757午夜福利合集在线观看| 国产三级黄色录像| 久久影院123| 国产xxxxx性猛交| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产三级黄色录像| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 啪啪无遮挡十八禁网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲欧美激情综合另类| 色播在线永久视频| 精品人妻1区二区| 51午夜福利影视在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜激情av网站| 国产高清激情床上av| 日韩高清综合在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久中文字幕一级| 日韩欧美在线二视频| 一区二区三区激情视频| 久久久久久久午夜电影| 性欧美人与动物交配| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品二区激情视频| 麻豆国产av国片精品| 黄色成人免费大全| 99国产精品一区二区蜜桃av| 少妇熟女aⅴ在线视频| or卡值多少钱| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 午夜成年电影在线免费观看| 美女免费视频网站| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美成狂野欧美在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 韩国精品一区二区三区| 91九色精品人成在线观看| 国产成年人精品一区二区| 多毛熟女@视频| 免费少妇av软件| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 真人一进一出gif抽搐免费| 女同久久另类99精品国产91| 午夜福利在线观看吧| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲无线在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 99在线人妻在线中文字幕| 久久影院123| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品久久久av美女十八| 中出人妻视频一区二区| 国产野战对白在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲免费av在线视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 男人舔女人下体高潮全视频| netflix在线观看网站| 一区二区三区激情视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 91麻豆av在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 99香蕉大伊视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲全国av大片| 高清毛片免费观看视频网站| 一本大道久久a久久精品| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久伊人香网站| 老汉色∧v一级毛片| 人成视频在线观看免费观看| xxx96com| 亚洲少妇的诱惑av| a级毛片在线看网站| 午夜免费鲁丝| 一区福利在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 窝窝影院91人妻| 日本 av在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日本 欧美在线| 国产成人免费无遮挡视频| 色哟哟哟哟哟哟| 精品久久久久久久毛片微露脸| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜视频精品福利| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 91老司机精品| 啦啦啦免费观看视频1| 一边摸一边抽搐一进一小说| 91在线观看av| 18禁国产床啪视频网站| 久久这里只有精品19| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品一区二区三区四区久久 | 午夜福利一区二区在线看| 免费在线观看黄色视频的| 搞女人的毛片| 久久中文看片网| 少妇的丰满在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美成人午夜精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 一级黄色大片毛片| 一本久久中文字幕| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 丁香六月欧美| 黑丝袜美女国产一区| 黑人操中国人逼视频| 丝袜美腿诱惑在线| 成人国产综合亚洲| 99riav亚洲国产免费| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 波多野结衣高清无吗| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 午夜久久久久精精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲中文av在线| 亚洲国产欧美网| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品久久久精品久久久| av视频在线观看入口| 精品福利观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品国产一区二区久久| 午夜福利18| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 正在播放国产对白刺激| 99在线人妻在线中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 成在线人永久免费视频| 国产精品国产高清国产av| av超薄肉色丝袜交足视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 嫁个100分男人电影在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 久久香蕉激情| 国产三级在线视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 级片在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 精品国产国语对白av| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 成年版毛片免费区| 男人的好看免费观看在线视频 | 精品不卡国产一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲 国产 在线| 亚洲一区高清亚洲精品| av视频免费观看在线观看| 久久热在线av| 91成年电影在线观看| 美国免费a级毛片| 大型av网站在线播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲五月天丁香| 精品国产亚洲在线| 国内精品久久久久久久电影| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| svipshipincom国产片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲国产欧美网| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲电影在线观看av| 久久久久九九精品影院| 激情视频va一区二区三区| 一区在线观看完整版| 午夜免费成人在线视频| 久久草成人影院| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国内精品久久久久精免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 午夜福利一区二区在线看| 国产成人av激情在线播放| 淫秽高清视频在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产色视频综合| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲第一青青草原| 国产1区2区3区精品| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜免费激情av| ponron亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产高清激情床上av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品国产美女av久久久久小说| 精品国产乱子伦一区二区三区| 天天添夜夜摸| 国产精品98久久久久久宅男小说| 后天国语完整版免费观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲avbb在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产熟女xx| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲成人久久性| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜福利一区二区在线看| 日韩大尺度精品在线看网址 | 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产又爽黄色视频| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 日韩精品青青久久久久久| 成人三级做爰电影| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 成人三级做爰电影| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 中文字幕高清在线视频| 国产成人精品无人区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本vs欧美在线观看视频| 久久亚洲精品不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美成人性av电影在线观看| 妹子高潮喷水视频| e午夜精品久久久久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 国产成人免费无遮挡视频| 男女之事视频高清在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲欧美激情综合另类| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品电影一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一级a爱视频在线免费观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 丁香欧美五月| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 女人精品久久久久毛片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品久久久精品久久久| 在线观看免费日韩欧美大片| 91成人精品电影| 国产片内射在线| 亚洲中文av在线| 午夜激情av网站| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 男人操女人黄网站| 乱人伦中国视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品一区二区在线不卡| 99国产综合亚洲精品| 又黄又粗又硬又大视频| 大型av网站在线播放| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一进一出抽搐动态| 国产主播在线观看一区二区| 波多野结衣巨乳人妻| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜福利免费观看在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲第一青青草原| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 午夜免费鲁丝| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 人妻久久中文字幕网| 在线天堂中文资源库| 亚洲av五月六月丁香网| 热99re8久久精品国产| 他把我摸到了高潮在线观看| 咕卡用的链子| 大香蕉久久成人网| 国产成人系列免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 夜夜爽天天搞| 午夜免费成人在线视频| xxx96com| 亚洲一码二码三码区别大吗| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本三级黄在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 大码成人一级视频| 免费高清视频大片| 手机成人av网站| 久久这里只有精品19| 国产精品,欧美在线| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久久久中文| 日韩大码丰满熟妇| 波多野结衣av一区二区av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩三级视频一区二区三区| 久久国产精品影院| 最新在线观看一区二区三区| 久久精品影院6| 国产乱人伦免费视频| 桃色一区二区三区在线观看| 99国产精品免费福利视频| 欧美日韩精品网址| 免费不卡黄色视频| 亚洲av成人av| 久热爱精品视频在线9| 亚洲一区高清亚洲精品| 黄色视频不卡| 亚洲五月色婷婷综合| 中出人妻视频一区二区| 视频区欧美日本亚洲| 精品国产亚洲在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲av电影在线进入| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精品国产一区二区精华液| 淫秽高清视频在线观看| 国产一区二区三区视频了| 亚洲国产中文字幕在线视频| 大陆偷拍与自拍| 一区二区三区高清视频在线| 国产av一区在线观看免费| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一区二区三区高清视频在线|