動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對克林霉素誘導(dǎo)的抗生素相關(guān)性腹瀉的改善作用

馬 巖，王中江，楊靖瑜，李 哲，彭 霞，單秀峰，李柏良,*，馬微微*

（1.沈陽師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，遼寧 沈陽 110034；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150000；3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150000）

抗生素作為一種有效的治療策略被用于疾病治療。然而，長期使用抗生素會增加臨床并發(fā)癥的風(fēng)險?？股叵嚓P(guān)性腹瀉（antibiotic-associated diarrhea，AAD）是抗生素治療最常見的副作用，各種抗生素均可能引起AAD，尤其是頭孢菌素、克林霉素和氨基青霉素類抗生素的AAD發(fā)生率較高[1]。約5%～30%的患者發(fā)生在抗生素治療期間或之后[2]，其特征是腸道微生物群被破壞，腸道短鏈脂肪酸水平降低，腸道碳水化合物和結(jié)腸膽汁酸積累，水分吸收改變，最終導(dǎo)致腹瀉。

腸道菌群在調(diào)節(jié)宿主健康方面發(fā)揮重要作用，其定植可能受年齡、飲食、抗生素使用等環(huán)境因素影響。腸道菌群失衡可能導(dǎo)致多種生理和病理變化，如肥胖、2型糖尿病、心血管疾病、炎癥性腸病等疾病[3-4]。研究表明腸道菌群與AAD的發(fā)病密切相關(guān)，并可能對AAD的嚴(yán)重程度產(chǎn)生顯著影響[5-6]。

益生菌可通過調(diào)節(jié)人體腸道菌群的組成和功能，從而有益于人體健康，許多臨床試驗(yàn)表明益生菌可以緩解AAD[7]。科學(xué)家已對多種菌株進(jìn)行研究，包括芽孢桿菌、雙歧桿菌、梭狀芽孢桿菌、乳桿菌屬、乳球菌屬、明串珠菌屬和鏈球菌屬[8]。既往研究發(fā)現(xiàn)，丁酸梭菌與嬰兒雙歧桿菌聯(lián)用可使小鼠血清中白細(xì)胞介素10（interleukin 10，IL-10）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）和干擾素γ（interferon γ，IFN-γ）恢復(fù)到正常水平，緩解小鼠AAD[9]。一種由動物雙歧桿菌乳亞種和嗜熱鏈球菌組成的益生菌配方奶粉可以顯著降低嬰兒AAD的發(fā)生率[10]。動物雙歧桿菌乳亞種BB-12可通過調(diào)節(jié)腸道菌群有效緩解AAD[11]。然而，目前相關(guān)研究多數(shù)為國外菌株，缺乏國內(nèi)相關(guān)菌株的研究，因此有必要系統(tǒng)地開發(fā)自主知識產(chǎn)權(quán)菌株。

前期研究表明動物雙歧桿菌乳亞種（Bifidobacterium animalissubsp.lactis）XLTG11具有預(yù)防和治療結(jié)腸炎的作用[12]，因此，本研究旨在探討動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD的緩解作用及其潛在機(jī)制，通過測定體質(zhì)量增加量、盲腸質(zhì)量、糞便含水量和糞便稠度評價動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD的緩解作用，并通過研究細(xì)胞因子、腸道屏障和核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）信號通路相關(guān)基因表達(dá)、腸道菌群組成及短鏈脂肪酸水平探索動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11緩解AAD的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級雄性6 周齡C57BL/6N小鼠，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2016-0006。

脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）檢測試劑盒泉州科諾迪生物科技有限公司；D-乳酸、IL-6、IL-1β、IL-10和TNF-α酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒 南京建成生物有限公司；RNA提取試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；GoScript? Reverse Transcription Mix試劑盒、GoTaq?qPCR Master Mix試劑盒、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒普洛麥格（北京）生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DHP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司；LDZF-50KB-II立式蒸汽滅菌器 上海申安醫(yī)療器械廠；TGL-16G離心機(jī) 上海安亭科技儀器廠；超低溫冰箱 青島海爾集團(tuán)；Model 680型酶標(biāo)儀 美國Beckman公司；ABI7500熒光定量PCR儀 美國Applied Biosystems公司；HALO-F100糞便處理儀 杭州海露科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組與飼養(yǎng)

將48 只6 周齡C57BL/6N雄鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，飼養(yǎng)溫度（22±2）℃、相對濕度（55±5）%，自由采食與飲水，12 h/12 h光暗循環(huán)。適應(yīng)性飼養(yǎng)結(jié)束后，隨機(jī)分為4 組：對照組、模型組、雙歧桿菌低劑量組和高劑量組，每組12 只。整個實(shí)驗(yàn)階段內(nèi)各組小鼠正常飲食，對照組灌胃無菌磷酸鹽緩沖液0.2 mL/d，模型組及雙歧桿菌低、高劑量組灌胃250 mg/（kgmb·d）克林霉素，連續(xù)14 d，誘導(dǎo)建立AAD模型。灌胃14 d后，對照組和模型組灌胃無菌磷酸鹽緩沖液0.2 mL/d，雙歧桿菌低、高劑量灌胃菌株濃度分別為5×106、1×107CFU的動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11菌液0.2 mL，持續(xù)14 d[12-13]。

1.3.2 小鼠體質(zhì)量增加量、盲腸質(zhì)量、糞便含水量和糞便稠度的測定

實(shí)驗(yàn)第1天和第28天均稱量小鼠體質(zhì)量，計算體質(zhì)量增加量。小鼠處死后，取盲腸，測定盲腸濕質(zhì)量。腹瀉癥狀采用糞便含水量和糞便稠度進(jìn)行評價。收集小鼠糞便，新鮮糞便稱質(zhì)量后烘干，再稱質(zhì)量。按下式計算糞便含水量。

糞便稠度評分按文獻(xiàn)[14]所述評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，具體見表1。

表1 糞便稠度評分Table 1 Scoring criteria for fecal consistency

1.3.3 結(jié)腸組織細(xì)胞因子檢測

采用相應(yīng)試劑盒，按照試劑盒說明書操作測定結(jié)腸組織TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10水平。

1.3.4 腸道通透性檢測

采用ELISA試劑盒測定血清LPS和D-乳酸質(zhì)量濃度。

1.3.5 熒光定量PCR檢測腸道屏障和NF-kB信號通路相關(guān)基因表達(dá)水平

采用熒光定量PCR法檢測腸道屏障（閉鎖小帶蛋白1（zonula occludens 1，ZO-1）、Occludin、Claudin-1和黏蛋白2（mucin 2，MUC2））和NF-kB信號通路（Toll樣受體4（Toll like receptor 4，TLR4）、髓分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88））和NF-κB相關(guān)基因表達(dá)水平。取適量結(jié)腸組織樣本，組織勻漿機(jī)勻漿，參照試劑盒說明書提取結(jié)腸組織內(nèi)總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，按照GoTaq?qPCR Master Mix試劑盒配制反應(yīng)液，用PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，循環(huán)40 次，測定目的基因和內(nèi)參基因β-actinCt值，按照2－ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達(dá)水平。引物序列見表2。

表2 PCR引物序列Table 2 Primer sequences used for polymerase chain reaction (PCR)

1.3.6 小鼠腸道菌群的測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，無菌采取小鼠肛門內(nèi)糞便0.1 g，梯度稀釋后，選擇合適的稀釋度分別接種在雙歧桿菌瓊脂、乳酸桿菌選擇性瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂和胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂平板檢測糞便中雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量[15]。

1.3.7 短鏈脂肪酸含量測定

準(zhǔn)確稱?。?.80±0.01）g糞便放入糞便樣本盒中，用糞便處理儀處理，用蒸餾水配制10%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）懸濁液，取500 μL懸濁液（液體培養(yǎng)基樣本直接吸取500 μL）于1.5 mL離心管中，并加入100 μL巴豆酸偏磷酸溶液，－30 ℃下冷凍24 h，解凍后4 ℃、8 000×g離心3 min去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，取上清液，用0.22 μm水系濾膜過濾，待測。氣相色譜檢測條件參考Shi Jialu等[16]的方法。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行Duncan’ test進(jìn)行差異顯著性分析。P＜0.05為差異顯著，采用Graph Pad軟件進(jìn)行繪圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠生理表觀變化的影響

如圖1A所示，相比于對照組，模型組小鼠體質(zhì)量增加量顯著降低（P＜0.05），相比于模型組，低、高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著提高體質(zhì)量增加量（P＜0.05），且高劑量組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。如圖1B所示，相比于對照組，模型組小鼠盲腸質(zhì)量顯著增加（P＜0.05），相比于模型組，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著降低盲腸質(zhì)量（P＜0.05），而低劑量組與模型組無顯著差異（P＞0.05）。如圖1C所示，相比于對照組，模型組小鼠糞便含水量顯著增加（P＜0.05），相比于模型組，低、高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著降低小鼠糞便含水量（P＜0.05），且高劑量組顯著低于低劑量組（P＜0.05）。如圖1D所示，相比于對照組，模型組小鼠糞便稠度評分顯著增加（P＜0.05），相比于模型組，低、高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著降低小鼠糞便稠度（P＜0.05）。以上結(jié)果表明動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以有效緩解AAD相關(guān)癥狀。

圖1 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠生理表觀指標(biāo)的影響Fig.1 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on physiological indexes of mice with antibiotic-associated diarrhea

2.2 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠結(jié)腸細(xì)胞因子質(zhì)量濃度的影響

AAD伴隨全身炎癥的發(fā)生，細(xì)胞因子作為炎癥發(fā)生的標(biāo)志物，常用于評價AAD的程度。如圖2A～C所示，與對照組相比，模型組小鼠結(jié)腸中促炎細(xì)胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）水平均顯著升高（P＜0.05），表明克林霉素處理導(dǎo)致促炎因子分泌增加，促使炎癥發(fā)生。高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著降低結(jié)腸中TNF-α、IL-1β和IL-6水平（P＜0.05），而低劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11僅可以顯著降低結(jié)腸中IL-6水平（P＜0.05）。如圖2D所示，模型組小鼠結(jié)腸中抗炎細(xì)胞因子（IL-10）水平顯著低于對照組（P＜0.05），低、高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著提高結(jié)腸中IL-10水平（P＜0.05），且高劑量組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。以上結(jié)果表明高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11具有良好的抗炎效果。

圖2 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠結(jié)腸中細(xì)胞因子水平的影響Fig.2 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on colonic cytokine contents in mice with antibiotic-associated diarrhea

2.3 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠腸道屏障通透性的影響

LPS和D-乳酸是在分子水平上檢測腸屏障損傷的敏感指標(biāo)。如圖3所示，與對照組相比，模型組小鼠血清中LPS和D-乳酸水平均顯著升高（P＜0.05），表明克林霉素處理可以導(dǎo)致腸道屏障通透性增加。低、高劑量的動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著降低AAD模型小鼠血清中LPS和D-乳酸水平（P＜0.05），且高劑量組D-乳酸濃度顯著差異低于低劑量組（P＜0.05）。以上結(jié)果表明高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11具有良好的降低腸道屏障通透性效果。

圖3 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠血清中LPS（A）和D-乳酸（B）水平的影響Fig.3 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on serum LPS (A) and D-lactic acid (B) levels in mice with antibioticassociated diarrhea

2.4 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠腸道屏障功能相關(guān)基因的影響

緊密連接蛋白（ZO-1、Occludin和Claudin-1）和黏蛋白（MUC2）是重要的腸道屏障功能蛋白。如圖4所示，相比于對照組，模型組小鼠結(jié)腸ZO-1、Occludin、Claudin-1和MUC2mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)（P＜0.05），表明克林霉素處理造成腸道屏障功能受損。與模型組相比，低、高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著上調(diào)Claudin-1、Occludin、ZO-1的mRNA表達(dá)水平（P＜0.05），高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著上調(diào)MUC2mRNA表達(dá)水平，而低劑量組MUC2mRNA表達(dá)水平與模型組無顯著差異（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以有效緩解AAD模型小鼠腸道屏障功能蛋白的損傷。

圖4 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠腸道屏障相關(guān)基因表達(dá)水平的影響Fig.4 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on intestinal barrier related gene expression in colonic tissues of mice with antibiotic-associated diarrhea

2.5 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠腸道菌群的影響

腸道菌群對AAD發(fā)病具有重要影響。如圖5A、B所示，與對照組相比，模型組小鼠腸道中雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量均顯著降低（P＜0.05），表明克林霉素處理降低了有益菌活菌數(shù)，而低、高劑量的動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著增加雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量（P＜0.05），且高劑量組顯著高于低劑量組（P＜0.05）。如圖5C～E所示，與對照組相比，模型組小鼠腸道中腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均顯著增加（P＜0.05），與模型組相比，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著降低腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量（P＜0.05），而低劑量組與模型組無顯著差異（P＞0.05）。由此可知，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以有效調(diào)節(jié)AAD模型小鼠的腸道菌群。

圖5 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠腸道菌群的影響Fig.5 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on the gut microbiota in mice with antibiotic-associated diarrhea

2.6 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠結(jié)腸內(nèi)短鏈脂肪酸含量的影響

短鏈脂肪酸是腸道菌群的重要代謝產(chǎn)物，可以有效緩AAD，因此本研究進(jìn)一步分析腸道中短鏈脂肪酸含量。如圖6所示，與對照組相比，模型組小鼠糞便中乙酸、丙酸和丁酸含量均顯著降低（P＜0.05），而低、高劑量的動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11均可以顯著增加小鼠糞便中乙酸、丙酸和丁酸含量（P＜0.05），且高劑量組顯著高于低劑量組（P＜0.05）。由此可知，動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以有效增加小鼠糞便中短鏈脂肪酸含量。

圖6 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠糞便中短鏈脂肪酸含量的影響Fig.6 Effect of Bifdiobacterium animalis subsp.lactis XLTG11 on short chain fatty acid contents in the feces of mice with antibiotic-associated diarrhea

2.7 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠結(jié)腸NF-κB信號通路的影響

為研究NF-κB信號通路是否在動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11緩解AAD機(jī)制中發(fā)揮重要作用，對其相關(guān)基因的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行測定，結(jié)果如圖7所示。與對照組相比，模型組中TLR4、MyD88和NF-κB基因表達(dá)水平顯著上調(diào)（P＜0.05），低劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著下調(diào)TLR4和NF-κB表達(dá)水平（P＜0.05），高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11能夠顯著下調(diào)TLR4、MyD88和NF-κB的表達(dá)水平（P＜0.05），表明動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以通過抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的激活進(jìn)而發(fā)揮抗炎功能。后續(xù)將采用Westernblot技術(shù)進(jìn)一步分析相關(guān)蛋白表達(dá)水平的差異。

圖7 動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD模型小鼠結(jié)腸組織NF-κB信號通路相關(guān)基因表達(dá)水平的影響Fig.7 Effect of Bifidobacterium animalis subsp.Lactis XLTG11 on the mRNA expression levels of genes related to the NF-κB signaling pathway in mice with antibiotic-associated diarrhea

3 討論

在臨床治療中，抗生素對治療各種細(xì)菌感染具有良好的效果。然而，長期使用抗生素會增加患者臨床并發(fā)癥，例如AAD。AAD不僅會嚴(yán)重阻礙疾病的康復(fù)，而且還威脅著患者的生命安全[6]。越來越多的證據(jù)表明，益生菌具有預(yù)防和治療AAD的前景[17]。前期研究表明動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11具有預(yù)防和治療結(jié)腸炎的作用[12]，因此，本研究旨在探討動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11對AAD的改善作用及其潛在機(jī)制。

小鼠體質(zhì)量增加量、盲腸質(zhì)量、糞便含水量和糞便稠度是常用于評價腹瀉程度的指標(biāo)[18]。AAD伴隨全身炎癥的發(fā)生，促炎細(xì)胞因子分泌增加，而抗炎細(xì)胞因子水平降低[9]。TNF-α是一種關(guān)鍵的促炎因子，可與多種細(xì)胞因子協(xié)同作用，進(jìn)一步誘導(dǎo)體內(nèi)炎癥介質(zhì)的釋放[19]。IL-6在腸上皮屏障中起重要作用，可通過激活Claudin-2基因調(diào)節(jié)腸上皮緊密連接[20]。過量的IL-1β促進(jìn)了其他炎癥因子的表達(dá)，增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞的通透性，加重了腸黏膜的炎癥[21]。IL-10是一種主要的抗炎細(xì)胞因子，在維持胃腸道穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用[22]。本研究發(fā)現(xiàn)克林霉素處理顯著提高了小鼠結(jié)腸組織的TNF-α、IL-1β和IL-6水平，降低了IL-10水平，這與Hu Jinshaung等[23]研究結(jié)果一致，動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以降低小鼠結(jié)腸組織中促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平，提高抑炎細(xì)胞因子IL-10水平，這與Ling Zongxin等[9]研究結(jié)果較為一致。

腸道屏障功能在腸道炎癥的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[24]。緊密連接蛋白主要包括跨膜蛋白（Occludin和Claudins）和輔助蛋白（ZO-1和ZO-2），它們是腸黏膜屏障的主要成分，影響腸黏膜的通透性和完整性[25]。黏蛋白（包括MUC1和MUC2等）在腸道上皮細(xì)胞表面形成黏膜屏障，其異常表達(dá)導(dǎo)致屏障結(jié)構(gòu)破壞，是腸道炎癥的啟動因子[26]。本研究發(fā)現(xiàn)高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著提高Claudin-1、Occludin、ZO-1和MUC2的mRNA表達(dá)水平，表明動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以通過提高腸道屏障功能進(jìn)而可以改善AAD。這與長雙歧桿菌CCM 7952可以上調(diào)小鼠腸道上皮中ZO-1和Occludin的表達(dá)，降低結(jié)腸通透性的結(jié)果[27]相似。

短鏈脂肪酸不僅可以提高腸道屏障作用，還作為重要的信號分子，具有調(diào)節(jié)NF-κB信號通路的功能[26,28]。本研究發(fā)現(xiàn)，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著提高AAD小鼠糞便短鏈脂肪酸含量。TLR4介導(dǎo)的信號通路通過識別配體與其主要適應(yīng)性分子MyD88結(jié)合，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，激活NF-κB信號通路，破壞腸道免疫穩(wěn)態(tài)，最終導(dǎo)致炎癥發(fā)生[29-31]。TLR4是TLR家族中最早發(fā)現(xiàn)的跨膜受體，具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和促炎作用[32]。MyD88是TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的重要銜接蛋白，也是NF-κB信號通路的上游信號分子，可觸發(fā)信號級聯(lián)激活下游NF-κB[33]。結(jié)腸組織中NF-κB水平可以反映炎癥的嚴(yán)重程度[34]。本研究發(fā)現(xiàn)，高劑量動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11可以顯著下調(diào)TLR4、MyD88和NF-κB基因表達(dá)水平，這與Wang Nana等[12]關(guān)于動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11緩解潰瘍性結(jié)腸炎的結(jié)果一致。

綜上，動物雙歧桿菌乳亞種XLTG11能夠改善AAD模型小鼠腹瀉相關(guān)的指標(biāo)，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和腸道菌群組成，提高短鏈脂肪酸含量，提高腸道屏障相關(guān)基因的表達(dá)和抑制TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的激活，進(jìn)而有效緩解克林霉素誘導(dǎo)的AAD。