白頭翁皂苷 B4對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能、消化代謝和瘤胃發(fā)酵的影響

盧猛，胡鳳明，屠焰，刁其玉

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081

0 引言

【研究意義】從出生到60日齡是犢牛生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，也是其營(yíng)養(yǎng)調(diào)控的“窗口期”，在此階段，犢牛需要經(jīng)歷由無(wú)菌到有菌、被動(dòng)免疫到主動(dòng)免疫、從皺胃消化過(guò)渡到瘤胃消化以及由化學(xué)消化過(guò)渡到微生物消化的轉(zhuǎn)變[1]。新生犢牛由于各項(xiàng)機(jī)能未發(fā)育完全，容易受到各種病原菌的侵?jǐn)_發(fā)生疾病和死亡，其中腹瀉是導(dǎo)致哺乳期犢牛死亡的最主要原因[2]。根據(jù)美國(guó)2018年國(guó)家動(dòng)物健康監(jiān)控系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)，犢牛生后前3周的腹瀉引起的死亡率高達(dá) 39%[3]，這主要與動(dòng)物機(jī)體胃腸道消化系統(tǒng)的建立不完全有關(guān)。抗生素是過(guò)去數(shù)十年保障動(dòng)物健康和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的常用藥，但是長(zhǎng)期使用會(huì)使機(jī)體內(nèi)滋生超級(jí)細(xì)菌，降低有益菌的數(shù)量，增加疾病風(fēng)險(xiǎn)[4]。同時(shí)抗生素具有殘留性，容易危害人類健康。近年來(lái)，隨著科技的進(jìn)步和生活水平的提高，人們開(kāi)始追求健康、綠色和安全的食品。根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部194號(hào)公告顯示，我國(guó)飼料行業(yè)已經(jīng)進(jìn)入無(wú)抗時(shí)代，因此當(dāng)下的研究熱點(diǎn)是尋找一種新型且無(wú)毒副作用的替抗產(chǎn)品。植物提取物是植物的次生代謝物[5]，具有抗菌、抗炎的功能[6-7]，隨著一些國(guó)家對(duì)離子載體飼料添加劑的禁止，植物提取物被提出作為化學(xué)飼料添加劑的替代品。白頭翁來(lái)源于毛茛科白頭翁（Pulsatilla Chinensis Regel）的干根，在我國(guó)生長(zhǎng)已有數(shù)千年的歷史，在抗菌、抗炎、增強(qiáng)免疫等方面發(fā)揮著重要作用[8-9]。白頭翁皂苷B4是白頭翁中含量最高的單體成分，也是其抗炎、抗腫瘤生物學(xué)活性的基礎(chǔ)，具有抗菌、抗炎作用[10]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】體外抗菌試驗(yàn)表明，白頭翁皂苷 B4能抑制大腸桿菌等病原菌的生長(zhǎng)[11]。同時(shí)，白頭翁皂苷 B4可以抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8等促炎因子的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體的抗炎能力[12]。另外，有研究證明，給臨床型乳房炎奶牛連續(xù)4—6d頸部肌肉注射30 mL白頭翁皂苷 B4可以達(dá)到理想的治療效果，治愈率可到75.00%，且無(wú)明顯的臨床副作用[13]。【本研究切入點(diǎn)】基于前人對(duì)白頭翁皂苷 B4進(jìn)行了一定的研究，但是這些研究主要集中體外的抑菌效果，在動(dòng)物上的應(yīng)用也局限于小鼠和奶牛，有關(guān)白頭翁皂苷 B4在犢牛上的作用效果還未見(jiàn)報(bào)道。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)在犢牛代乳品中添加白頭翁皂苷B4，研究不同添加水平的白頭翁皂苷 B4對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能和消化代謝以及瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響，為白頭翁皂苷 B4在犢牛培育中的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐，也為新型飼料添加劑的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

白頭翁皂苷 B4（C59H96O26，相對(duì)分子質(zhì)量為1 221.39），純度為67.41%，購(gòu)自南京春秋生物工程有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)飼糧

本研究于2020年10月至2021年5月在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院南口中試基地進(jìn)行。選取60頭健康的新生荷斯坦牛公犢，犢牛采食的代乳粉由北京精準(zhǔn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究中心有限公司提供，代乳粉按照國(guó)家發(fā)明專利 CN 02128844.5進(jìn)行配制，其營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，開(kāi)食料購(gòu)自天津聯(lián)英飼料有限公司，開(kāi)食料組成及其營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。

表1 代乳粉的營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Nutrient levels of milk replacers (air-dry basis)

表2 開(kāi)食料的組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 2 Composition and nutrient levels of the starter (air-dry basis)

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選擇 60頭健康的新生荷斯坦奶公犢牛進(jìn)行試驗(yàn)（體重為43.7±3.9 kg；血清總蛋白濃度大于55g·L-1），按照體重相近的原則隨機(jī)分為4組，每組15頭，分別飼喂0（C組）、15（A1組）、30（A2組）、45（A3組）mg·d-1的白頭翁皂苷B4。試驗(yàn)每頭犢?？偣矓z入6L初乳，其中4L在出生后2h內(nèi)飼喂，其余2L在第一次飼喂后8h再次進(jìn)行飼喂。

代乳粉按犢牛體重的 1.25%（干物質(zhì)基礎(chǔ)）進(jìn)行飼喂，30日齡前，每日3次（08:00、13:00、18:00）飼喂代乳粉，30日齡之后轉(zhuǎn)為兩次（08:00、17:00）飼喂。在犢牛3日齡時(shí)補(bǔ)飼開(kāi)食料，14日齡開(kāi)始每日詳細(xì)記錄投喂量和剩料量，計(jì)算采食量。試驗(yàn)過(guò)程中，開(kāi)食料和水自由采食。

1.4 樣品采集與測(cè)定

1.4.1 飼料樣品采集與測(cè)定 每?jī)芍懿杉淮卧囼?yàn)代乳粉和開(kāi)食料樣品，4℃保存。試驗(yàn)結(jié)束后混勻樣品并帶回實(shí)驗(yàn)室，參照AOAC（2000）[14]測(cè)定日糧的營(yíng)養(yǎng)成分，其中粗蛋白質(zhì)（CP）用Ketuo KDY-9830 凱氏定氮儀測(cè)定、NDF和ADF的含量采用ANKOM 200 Fiber Analyzer測(cè)定、粗脂肪（EE）含量采用ANKOM-XT15i 全自動(dòng)脂肪分析儀測(cè)定、總能（GE）以PARR-6400全自動(dòng)氧彈量熱儀測(cè)定。

1.4.2 生長(zhǎng)性能 分別在犢牛 14、28、42 和 56 日齡晨飼前進(jìn)行體重測(cè)定。每日詳細(xì)記錄代乳粉和開(kāi)食料的飼喂量和剩料量，計(jì)算采食量（dry matter intake，DMI）、日增重（average daily gain，ADG）和飼料轉(zhuǎn)化比（feed conversion rate，F(xiàn)/G）。

1.4.3 腹瀉率 每天觀察犢牛的健康狀況，并對(duì)糞便進(jìn)行四分制評(píng)分。糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表 3[15]。當(dāng)動(dòng)物連續(xù)2 d糞便評(píng)分≥3分，即為腹瀉，腹瀉發(fā)生率計(jì)算如下：腹瀉發(fā)生率（%）= 腹瀉犢?？傤^數(shù)×100 /（試驗(yàn)組犢牛數(shù)量×試驗(yàn)天數(shù)）。

表3 糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Fecal score standard

1.4.4 瘤胃液樣品采集與測(cè)定 分別于犢牛28、42、56日齡晨飼后2 h通過(guò)口腔采集瘤胃液，立即用便攜式pH計(jì)（Testo-206-pH2）測(cè)定瘤胃液pH，然后分裝于 10 mL滅菌離心管中，-20℃冷凍保存待測(cè)。其中VFA濃度用氣相色譜法[16]測(cè)定；NH3-N濃度采用苯酚-次氯酸鈉比色法[17]測(cè)定；MCP濃度使用考馬斯亮藍(lán)法[18]測(cè)定。

1.4.5 消化代謝試驗(yàn)樣品采集與測(cè)定 動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)過(guò)程中，分別在犢牛42日齡和63日齡，每個(gè)處理組隨機(jī)選擇6頭健康且體重相近的犢牛，以全收糞尿法進(jìn)行兩期消化代謝試驗(yàn)，每期7 d，其中預(yù)飼期4 d，正式期3 d。詳細(xì)記錄每頭犢牛每日實(shí)際采食量、排糞量和排尿量。每日采集糞便總量的10%作為混合樣品，然后每100 g鮮糞加入10%的稀硫酸10 mL固氮。連續(xù)收集每頭牛日排尿量的 1%作為混合樣品，用 10%的稀硫酸調(diào)整尿樣pH。收集的糞、尿樣品于-20 ℃冷凍保存，待測(cè)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和能氮代謝指標(biāo)的計(jì)算方法參照《動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)》[19]。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2017對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行初步的整理。采用SPSS 26.0軟件中的單因素方差分析程序（one-way ANOVA）對(duì)哺乳期犢牛體重、日增重、干物質(zhì)采食量、飼料轉(zhuǎn)化比、糞便評(píng)分、腹瀉率、斷奶前后的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率、能量代謝指標(biāo)和氮代謝指標(biāo)、瘤胃發(fā)酵參數(shù)指標(biāo)進(jìn)行分析，差異顯著時(shí)用LSD氏法進(jìn)行多重比較，當(dāng)P＜0.05時(shí)，表示差異顯著，當(dāng)0.05≤P＜0.10時(shí)，表示為有提高或降低的趨勢(shì)。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能

表4為白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能的影響。從中可以看出，哺乳期犢牛體重和干物質(zhì)采食量不受白頭翁皂苷 B4的影響（P＞0.05），C組、A1、A2和 A3組犢牛全期體重的增長(zhǎng)率在數(shù)值上逐漸升高，但無(wú)顯著的劑量效應(yīng)（P＞0.05）；犢牛14—28日齡的平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化比與白頭翁皂苷 B4的添加量之間存在顯著劑量相關(guān)性（P＜0.05），其中，平均日增重隨白頭翁皂苷B4添加量的增加顯著增加（P＜0.05），飼料轉(zhuǎn)化比呈相反的結(jié)果（P＜0.05）。通過(guò)線性和二次曲線P值可以看出，A3組的效果最佳。

表4 白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛體重、平均日增重、干物質(zhì)采食量和飼料轉(zhuǎn)化比的影響Table 4 Effects of Anemoside B4 on Body weight, ADG, DMI and FCR of suckling calves

2.2 腹瀉率

由表 5可知，糞便評(píng)分和腹瀉率具有一致的規(guī)律。7—56日齡和7—14日齡時(shí)，A3犢牛的糞便評(píng)分和腹瀉率均顯著低于C組（P＜0.05），與添加劑量呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；15—28日齡時(shí)，A2犢牛的糞便評(píng)分和腹瀉率均顯著低于 C組（P＜0.05），隨著添加劑量的增加顯著降低（P＜0.05），其余各組之間差異不顯著（P＞0.05）；29—42日齡和43—56日齡時(shí)，各組犢牛的糞便評(píng)分和腹瀉率差異不顯著（P＞0.05）。

表5 白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛糞便評(píng)分和腹瀉率的影響Table 5 Effects of Anemoside B4 on fecal score and diarrhea incidence of suckling calves

2.3 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率

從表6可以看出，斷奶前期，A3組犢牛干物質(zhì)采食量顯著低于C組（P＜0.05），A2組犢牛干物質(zhì)采食量有顯著低于C組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），犢牛的干物質(zhì)采食量隨白頭翁皂苷 B4添加量的增加顯著降低（P＜0.05）；與C組相比，A1、A2、A3組犢牛干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的表觀消化率差異不顯著（P＞0.05），但從整體來(lái)看逐漸增加，但與白頭翁皂苷 B4的添加量無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）。斷奶后期，A1、A2、A3組犢牛干物質(zhì)采食量逐漸增加，與C組差異不顯著（P＞0.05），且與白頭翁皂苷B4的添加量無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）；A2組干物質(zhì)和中性洗滌纖維的表觀消化率有顯著高于A1組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），酸性洗滌纖維的表觀消化率顯著高于A1組（P＜0.05），但與C、A3組差異不顯著（P＞0.05）。通過(guò)線性和二次曲線P值可以看出，斷奶前，A3組犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化效果最佳，斷奶后，A2組犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化效果最佳。

表6 白頭翁皂苷B4對(duì)哺乳期犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響Table 6 Effects of Anemoside B4 on nutrient apparent digestibility of suckling calves

2.4 能氮代謝

由表7可知，在斷奶前，與C組相比，A1、A2和 A3組犢牛的糞能、尿能、總能消化率、總能代謝率和消化能代謝率沒(méi)有顯著差異（P＞0.05），但 C組犢牛攝入總能顯著高于A3組（P＜0.05），有顯著高于A2組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），此外，A1組犢牛攝入總能顯著高于 A3組（P＜0.05）。斷奶后，C組糞能有高于A2組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），A2組總能消化率有高于A1組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10），A2組總能代謝率高于A1組（P＜0.05）,且有高于C組的趨勢(shì)（0.05≤P＜0.10）。攝入總能、尿能和消化能代謝率在各組間差異不顯著（P＞0.05）。從表8可以看出，斷奶前，各組間糞氮、尿氮、氮消化率和氮沉積率差異不顯著（P＞0.05），C組攝入總氮顯著高于A3組（P＜0.05）。斷奶后，各組之間氮代謝指標(biāo)差異不顯著（P＞0.05），A2、A3組糞氮和尿氮低于C組，氮消化率和沉積率高于C組。通過(guò)線性和二次曲線P值可以看出，斷奶前，A3組犢牛能量和氮代謝優(yōu)于其他組，斷奶后，A2組犢牛效果最優(yōu)。

表7 白頭翁皂苷B4對(duì)哺乳期犢牛能量代謝的影響Table 7 Effects of Anemoside B4 on energy metabolism of suckling calves

表8 白頭翁皂苷B4對(duì)哺乳期犢牛氮代謝的影響Table 8 Effects of Anemoside B4 on nitrogen metabolism of suckling calves

2.5 瘤胃發(fā)酵參數(shù)

從表9可知，白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛瘤胃液pH和總揮發(fā)性脂肪酸含量沒(méi)有顯著影響（P＞0.05），對(duì)瘤胃揮發(fā)性脂肪酸中乙酸、丙酸、丁酸、戊酸的摩爾比和乙酸/丙酸，以及氨態(tài)氮濃度和微生物蛋白含量皆無(wú)顯著影響（P＞0.05），各指標(biāo)與白頭翁皂苷B4的添加劑量無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）。各瘤胃發(fā)酵參數(shù)均處于正常值范圍。

表9 白頭翁皂苷B4對(duì)哺乳期犢牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響Table 9 Effects of Anemoside B4 on rumen fluid fermentation parameters of suckling calves

3 討論

3.1 白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能和腹瀉的影響

生長(zhǎng)性能的高低是反映犢牛生長(zhǎng)發(fā)育好壞的重要指標(biāo)。在本研究中，45 mg·d-1的白頭翁皂苷B4顯著增加了犢牛14—28日齡犢牛的平均日增重，在采食量無(wú)顯著差異的條件下，飼料轉(zhuǎn)化效率得到顯著提升，表明白頭翁皂苷 B4能促進(jìn)犢牛對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，供給機(jī)體更多的能量，有效促進(jìn)犢牛生長(zhǎng)，獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)有效降低犢牛因消化不良引起的腹瀉發(fā)生率[20]。有調(diào)查顯示[21]，斷奶前犢牛發(fā)病率為14.1%，死亡率為3.5%，其中消化系統(tǒng)疾?。ǜ篂a、脫水）占46.8%，此項(xiàng)報(bào)告包含了京津冀地區(qū)的9.41萬(wàn)頭奶牛，其中犢牛8 295頭，占牛群結(jié)構(gòu)的13%。由此可見(jiàn)，腹瀉是哺乳期犢牛的主要疾病，嚴(yán)重影響著牧場(chǎng)的發(fā)展，而致病性大腸桿菌和沙門(mén)氏菌是引起犢牛腹瀉的主要病原菌，體外研究表明，白頭翁皂苷B4具有顯著的抑菌效果[11]。研究發(fā)現(xiàn)，12.5 mg·kg-1的白頭翁皂苷可以達(dá)到與抗生素一致的效果，在一定程度上可以有效替代抗生素[22]，0.05 mL/kg·d-1的白頭翁皂苷 B4對(duì)臨床型泌乳奶牛乳房炎的治愈率高達(dá)75%[13]。在本研究中，未添加白頭翁皂苷 B4的犢牛腹瀉率高達(dá)36.27%，而45 mg·d-1的白頭翁皂苷B4顯著降低了哺乳期犢牛32.37%，尤其對(duì)28日齡前的腹瀉率具有顯著效果，其機(jī)制可能是白頭翁皂苷 B4對(duì)致病性大腸桿菌具有較強(qiáng)的抑制作用，這與前人的研究結(jié)果一致[23]。28日齡之后，各處理組的腹瀉率間未出現(xiàn)顯著差異，這主要是因?yàn)闋倥Ｗ陨砻庖呦到y(tǒng)的逐漸健全和腸道菌群的逐漸趨于穩(wěn)定，能夠有效抵御外界病原菌的侵襲，同時(shí)也說(shuō)明白頭翁皂苷 B4對(duì)犢牛腹瀉的防治效果隨著日齡的增加逐漸降低，其作用主要體現(xiàn)在犢牛28日齡前。根據(jù)線性和二次曲線的顯著性P值可以看出，作用效果與添加劑量具有一定的正相關(guān)性，其中45 mg·d-1的白頭翁皂苷B4效果最佳，但未達(dá)到劑量最佳值，表明白頭翁皂苷 B4的添加劑量還有研究的可能，這也是日后研究的方向之一。

3.2 白頭翁皂苷 B4對(duì)犢牛營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

動(dòng)物對(duì)飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率的高低可以反映其胃腸道發(fā)育的好壞，直接影響幼齡動(dòng)物的培育效果。皂苷類物質(zhì)是一種重要的植物次生代謝產(chǎn)物，對(duì)動(dòng)物消化率可能具有一定的影響，但是未有統(tǒng)一的結(jié)果。消化酶是哺乳期犢牛對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化的主要方式，本研究中，白頭翁皂苷 B4沒(méi)有顯著提高犢牛對(duì)各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率，但與未添加白頭翁皂苷B4相比，45 mg·d-1的白頭翁皂苷B4分別提高了中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的表觀消化率 35.78%和 40.38%，這可能是因?yàn)榘最^翁皂苷 B4皂苷提高了哺乳期犢牛腸道內(nèi)纖維分解菌和纖維素酶的活性[24]，加快了纖維素的分解，表明白頭翁皂苷 B4在一定程度上可提高機(jī)體的消化能力。斷奶后，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率與添加劑量未呈現(xiàn)出顯著的相關(guān)性，這可能是因?yàn)殡S著日齡的增加，白頭翁皂苷 B4對(duì)機(jī)體的調(diào)控作用逐漸降低，但30 mg·d-1的白頭翁皂苷B4分別提高了粗蛋白、粗脂肪消化率 24.52%和 41.86%，這可能與瘤胃內(nèi)氨態(tài)氮含量的降低有關(guān)，氨態(tài)氮含量的降低可提高機(jī)體對(duì)飼糧蛋白質(zhì)和碳水化合物的消化能力[25]。另外，30 mg·d-1的白頭翁皂苷 B4分別提高了中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的表觀消化率 26.23%和 39.26%，纖維素消化率的增加，可以引起了機(jī)體飽腹感，使干物質(zhì)的采食量有效下降，這有助于減少飼料成本的投入，增加養(yǎng)殖效益。ZHOU等[26]在山羊日糧中添加不同劑量的茶皂素，結(jié)果顯示，添加茶皂素對(duì)山羊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率以及瘤胃發(fā)酵模式均沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，這與本研究的結(jié)果相一致。劉策通過(guò)在羔羊日糧中添加苜蓿皂苷發(fā)現(xiàn)，苜蓿皂苷對(duì)羔羊干物質(zhì)、粗蛋白和酸性洗滌纖維的表觀消化率具有顯著的提升作用[25]，王世琴等[27]給早期斷奶羔羊飼喂地衣芽孢桿菌和白藜蘆醇發(fā)現(xiàn)，兩種添加劑未能有效提高羔羊?qū)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝，同時(shí)對(duì)羔羊斷奶前后的采食量和日增重均無(wú)顯著作用。表明，添加劑的種類與對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用效果有關(guān)。此外，添加劑的作用效果還可能與動(dòng)物的種類有關(guān)，關(guān)于白頭翁皂苷 B4是否會(huì)對(duì)羔羊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化代謝產(chǎn)生影響需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.3 白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛能氮代謝的影響

犢牛采食飼糧后，食物中的蛋白質(zhì)和碳水化合物及脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在微生物的作用下逐漸轉(zhuǎn)化為機(jī)體所能消化吸收且用于維持和生長(zhǎng)需要的小分子物質(zhì)。犢牛對(duì)能量和氮的吸收程度的高低直接關(guān)系到犢牛生長(zhǎng)發(fā)育速度及其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化代謝的能力，其攝入量又受到采食量的調(diào)控[28]。在本研究中，45 mg·d-1的白頭翁皂苷 B4顯著降低了犢牛斷奶前的總能和總氮攝入量，這可能是因?yàn)樵碥疹愇镔|(zhì)作為一種天然的糖基側(cè)鏈，具有明顯的苦味[29]，增加添加量會(huì)影響犢牛的采食量，犢牛日采食量下降，每日攝入的總能和總氮量也隨之降低。斷奶前各處理組能量代謝指標(biāo)差異均不顯著，30和45 mg·d-1的白頭翁皂苷B4降低了糞能和尿能，提高了總能消化率、總能代謝率以及消化能代謝率。斷奶后期，各處理組攝入總能、糞能、尿能和消化能代謝率沒(méi)有顯著差異，但30 mg·d-1的白頭翁皂苷B4可以在一定程度上降低犢牛糞能和尿能值，提高總能消化率和代謝率，這些結(jié)果都表明犢牛對(duì)飼糧中能量的利用率在添加劑白頭翁皂苷 B4的作用下有了一定程度的提高，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率也有不同程度的上調(diào)，犢牛生產(chǎn)力也因此得到了提高。犢牛對(duì)日糧中蛋白質(zhì)的利用情況可由氮代謝指標(biāo)反映，研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中蛋白質(zhì)水平越高，動(dòng)物采食后的氮排放量也會(huì)顯著升高[30]。植物提取物中含有皂苷、多糖、黃酮等有效成分，在改善動(dòng)物腸道健康、提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率和氮代謝方面發(fā)揮重要作用。鐘偉等[31]研究了不同水平的黃芪多糖對(duì)北極狐氮代謝及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加黃芪多糖可以改善北極狐的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，增加其對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，但是對(duì)氮采食量、糞氮排出量、尿氮排出量以及氮沉積率均沒(méi)有顯著的影響。本研究中，添加白頭翁皂苷B4可以顯著增加斷奶前犢牛的氮采食量，但是對(duì)斷奶前后的其他氮代謝指標(biāo)無(wú)顯著影響，這與上述結(jié)果相一致，但是30 mg·d-1的白頭翁皂苷B4分別提高了犢牛氮沉積率3.27%和33.57%，這說(shuō)明白頭翁皂苷B4在一定程度上加強(qiáng)了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，但具體的調(diào)控機(jī)制還有待于深入研究。

3.4 白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛瘤胃發(fā)酵的影響

瘤胃是反芻動(dòng)物良好的“發(fā)酵罐”，瘤胃中的微生物能夠?qū)⑹澄镏械碾y以消化的纖維素分解成為機(jī)體易于消化吸收的小分子物質(zhì)，其發(fā)育程度與動(dòng)物生產(chǎn)性能的高低直接掛鉤。瘤胃pH、氨態(tài)氮和揮發(fā)性脂肪酸是反應(yīng)瘤胃功能的重要指標(biāo)，具有調(diào)節(jié)瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、酸堿平衡等作用[32]。瘤胃液pH的高低可以反應(yīng)出瘤胃的發(fā)酵狀況，適宜的 pH是瘤胃正常發(fā)酵的前提。本研究中各組犢牛瘤胃液pH維持在5—6的范圍內(nèi)，低于正常值，其主要原因可能是添加皂苷后導(dǎo)致?tīng)倥Ａ鑫冈x(chóng)數(shù)量降低，使細(xì)菌數(shù)量相對(duì)增加，這與王洪榮等[33]研究發(fā)現(xiàn)一致。此外，低于較低的 pH可以促進(jìn)瘤胃上皮吸收揮發(fā)性脂肪酸的速率，降低瘤胃揮發(fā)性脂肪酸的濃度，符合本研究結(jié)果。日糧中的碳水化合物在瘤胃內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸，是反芻動(dòng)物能量代謝過(guò)程中的重要來(lái)源，其可提供飼糧可消化能的60%[34]，在機(jī)體瘤胃上皮的增殖與生長(zhǎng)方面發(fā)揮重要作用[35]。有研究報(bào)道，植物提取物可以改變犢牛瘤胃揮發(fā)性脂肪酸的組成和濃度，使瘤胃的發(fā)酵模式發(fā)生改變，影響瘤胃的生長(zhǎng)發(fā)育[36]，但是只有少數(shù)的植物提取物具有提高瘤胃揮發(fā)性脂肪酸濃度的作用，其中大部分會(huì)降低瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸的濃度，也有部分對(duì)瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸的濃度沒(méi)有影響[37]。WANG等研究發(fā)現(xiàn)，在苜蓿日糧條件下補(bǔ)飼三萜皂苷可以顯著降低犢牛瘤胃乙酸比例，提高總揮發(fā)性脂肪酸濃度[38]。本研究中，在哺乳期犢牛代乳品中添加白頭翁皂苷 B4未對(duì)瘤胃發(fā)酵模式產(chǎn)生顯著影響，這與上述結(jié)果不同，但與ZHOU等[26]給山羊飼喂茶皂素的結(jié)果一致。45 mg·d-1白頭翁皂苷B4降低瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度16.50%，這可能與上述所說(shuō)的白頭翁皂苷 B4的苦味影響犢牛的采食量有關(guān)，增加添加量會(huì)影響犢牛的采食量，降低瘤胃微生物發(fā)酵底物的供應(yīng)量，由此引起瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸濃度的降低。氨態(tài)氮是瘤胃微生物合成菌體蛋白的重要氮源，其濃度反映了瘤胃蛋白降解和合成的動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系，適宜微生物生長(zhǎng)的氨態(tài)氮濃度為6.3—27.5 mg·dL-1[39]，過(guò)低會(huì)抑制蛋白質(zhì)的合成，而過(guò)高會(huì)引起瘤胃乳頭的不完全角質(zhì)化，這符合本研究所得結(jié)果。以上結(jié)果顯示，白頭翁皂苷 B4未對(duì)犢牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)產(chǎn)生不良的影響，在一定程度上也證明其安全性。

4 結(jié)論

在本研究條件下，在哺乳期犢牛代乳品中添加白頭翁皂苷B4不僅可以顯著提高哺乳期犢牛14—28日齡的平均日增重，降低飼料轉(zhuǎn)化比，提高飼料轉(zhuǎn)化效率，顯著降低犢牛28日齡前糞便評(píng)分和腹瀉率，還可以提高斷奶后犢牛的干物質(zhì)、中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的表觀消化率，促進(jìn)對(duì)總能的消化率和代謝率，同時(shí)對(duì)犢牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)無(wú)不良影響。通過(guò)對(duì)比 0、15、30、45 mg·d-1白頭翁皂苷B4對(duì)犢牛的影響發(fā)現(xiàn)，其作用效果與添加劑量具有一定的正相關(guān)性，且添加量為45 mg·d-1時(shí)效果最佳。