高效液相法同時(shí)測(cè)定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的含量

梁雪松 劉文佳 黃 靜 黃光偉

(柳州兩面針股份有限公司，廣西 柳州 545001)

前言

阿魏酸(ferulicacid)和異阿魏酸(isoferulicacid)是一種植物來源的酚酸，是以桂皮酸為母核的酚酸類成分的代表[1,2]。它們結(jié)構(gòu)相似，是一對(duì)同分異構(gòu)體[3]，且廣泛存在于升麻、藁本、川芎等中藥中，是這些中藥的有效成分之一[4-6]。它們具有廣泛的藥理學(xué)作用，如抗腫瘤、抗氧化、解毒、保肝等作用，是一種多靶點(diǎn)的抗腫瘤天然藥物，且性質(zhì)穩(wěn)定、毒性低[7]。

阿魏酸與異阿魏酸是兩面針中藥牙膏去漬中藥處方的功效成分，為了保證產(chǎn)品的功效，需對(duì)牙膏中的功效成分進(jìn)行定量測(cè)定。已有文獻(xiàn)報(bào)道牙膏中異阿魏酸含量的測(cè)定[8]，但對(duì)同時(shí)檢測(cè)牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量卻未見報(bào)道。本研究采用高效液相法，建立牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量檢測(cè)方法，優(yōu)化檢測(cè)步驟，提高檢測(cè)效率。由于牙膏是一種由十幾種原料組成的混合物，其中包含有表面活性劑和香精等多種成分，對(duì)分析干擾很大。為了達(dá)到理想的分離效果，作者采用甲醇-0.05%磷酸作為流動(dòng)相，并以梯度洗脫的方法進(jìn)行處理，并經(jīng)過一系列的方法學(xué)試驗(yàn)，以及相關(guān)結(jié)果表明：本方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，是測(cè)定同時(shí)測(cè)定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量的可靠方法，為牙膏建立相應(yīng)的質(zhì)量控制方法提供依據(jù)；經(jīng)過優(yōu)化后，該方法簡(jiǎn)便、快速，提高了檢測(cè)效率，減少了人力與物力成本。

1 儀器和試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀(G1311C Quat Pump VL，G1316A 1260TCC，G1315B DAD)；電子分析天平(ML204型，精度為0.0001g，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；高速離心機(jī)；磁力加熱攪拌器(RCT B S25型，德國(guó)IKA公司)；阿魏酸對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究所(含量以99.0%計(jì))；異阿魏酸對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究所(含量以99.2%計(jì))；牙膏(規(guī)格: 120克 /支,柳州兩面針股份有限公司生產(chǎn))；甲醇為色譜純；磷酸為分析純；超純?nèi)ルx子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬 DIKMA Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇(B)-0.05%磷酸水溶液(A)為流動(dòng)相；梯度洗脫：0～15min，30%～60%B；流速為1.0mL/min，柱溫40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm；進(jìn)樣體積為20 μL。按此色譜條件下測(cè)定，牙膏樣品色譜圖見圖1。

圖1 牙膏樣品阿魏酸與異阿魏酸色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取阿魏酸與異阿魏酸對(duì)照品10.5mg置100mL容量瓶中，加入適量甲醇，振蕩溶解，再加甲醇至刻度，搖勻。制成濃度為105.00 μg/mL的阿魏酸與異阿魏酸混合標(biāo)液。

2.2.2 供試品溶液制備

精密稱定5g牙膏樣品，加入50mL甲醇，磁力攪拌20min，轉(zhuǎn)速800 rpm，使樣品充分分散，離心沉淀，取上清液，用0.45 μm濾膜過濾，濾液為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.2.1對(duì)照品溶液1.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL于10mL容量瓶中，以甲醇定容至10mL。依次注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，以峰高為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得阿魏酸的回歸方程為：

Y=6375899.82 X-0.1012202

r=0.99980

異阿魏酸的回歸方程為：

Y=7376794.69 X+1.9564695

r=0.99984

結(jié)果表明，阿魏酸與異阿魏酸的質(zhì)量濃度在10.50～105.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰高呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取牙膏樣品制備的供試品溶液，依前述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定阿魏酸與異阿魏酸的含量, 其結(jié)果見表1。其中阿魏酸平均值別為8.08 ppm，RSD為1.44%，異阿魏酸平均值為57.71 ppm，RSD為1.03%，結(jié)果表明, 該方法精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一支牙膏平行稱取樣品6份，每份精密稱定5g，分別按2.2.2制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表2。測(cè)定阿魏酸與異阿魏酸的含量, 其中阿魏酸平均值別為8.02 ppm，RSD為1.89%，異阿魏酸平均值為57.20 ppm，RSD為1.44%，表明分析方法重現(xiàn)性良好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的牙膏6份行樣，分別精密加入一定量阿魏酸與異阿魏酸對(duì)照品溶液，攪勻樣品，依照2.2.2制備供試品溶液，按上述2.1色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，結(jié)果見表3、表4。阿魏酸平均回收率為99.03%，RSD為1.06%，異阿魏酸平均回收率為99.46%，RSD為0.81%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本方法準(zhǔn)確可靠。

表3 阿魏酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4 異阿魏酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 牙膏穩(wěn)定性試驗(yàn)

把牙膏分別置于室溫與45℃烘箱中，在 0、1、2、3、6、9、12個(gè)月時(shí)，取牙膏樣品5g，精密稱定，按2.2.2制備供試品溶液,在前述2.1的色譜條件下，分別進(jìn)樣，測(cè)定阿魏酸與異阿魏酸含量。結(jié)果見表5、表6、圖2、圖3。結(jié)果顯示, 牙膏中功效成分阿魏酸在常溫與45℃下其含量略有下降，12個(gè)月期考察期內(nèi)，常溫樣品下降了17%，45%烘箱樣品下降26%；異阿魏酸在12個(gè)月的考察期內(nèi)，常溫和烘箱樣品含量基本保持穩(wěn)定，常溫樣品下降了1%，45%烘箱樣品下降4%；綜上所述，阿魏酸與異阿魏酸在牙膏中穩(wěn)定性表現(xiàn)良好，能在牙膏有效期內(nèi)保持良好的功效作用。

表5 阿魏酸穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表6 異阿魏酸穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

圖2 阿魏酸含量穩(wěn)定性

圖3 異阿魏酸含量穩(wěn)定性

3 結(jié)論

建立了用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸含量的方法，實(shí)驗(yàn)證明該方法的分離效果好，阿魏酸與異阿魏酸的質(zhì)量濃度在10.50～105.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰高呈良好的線性關(guān)系，r阿魏酸=0.99980，r異阿魏酸=0.99984。阿魏酸平均回收率為99.03%，RSD為1.06%，異阿魏酸平均回收率為99.46%，RSD為0.81%。采用該方法測(cè)定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的含量，該方法穩(wěn)定，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，樣品處理方法簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，是測(cè)定牙膏中阿魏酸與異阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的可靠方法；較單獨(dú)檢測(cè)牙膏中阿魏酸與異阿魏酸的方法，該方法提高了檢測(cè)效率，減少了人力與物力成本。