雀舌黃楊中生物堿成分的研究*

閆玉鑫， 楊穎， 陳方圓， 趙燕， 沈瑤

(云南師范大學(xué) 職業(yè)技術(shù)教育學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系，云南 昆明 650092)

雀舌黃楊(Buxusbodinieri)，又名匙葉黃楊，為黃楊科黃楊屬(Buxus)植物，常綠灌木，葉薄革質(zhì)，常為匙形，葉面綠色，光亮，葉背蒼灰色，中脈兩面凸出，側(cè)脈極多，在兩面或僅葉面顯著.生于海拔400～2 700 m平地或山坡林下，主產(chǎn)于中國(guó)云南、四川和貴州等地[1].國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)黃楊屬植物的化學(xué)成分及藥理活性開展了多方面研究，該屬植物富含三萜生物堿，在抗腫瘤、抗菌、抗 HIV及抗乙酰膽堿酯酶等方面有很好的生物活性[2].為了開發(fā)利用黃楊屬植物資源，尋找有藥用價(jià)值的結(jié)構(gòu)新穎的化合物及生物活性成分，實(shí)驗(yàn)研究了雀舌黃楊地上部分的化學(xué)成分，從中分離得到10個(gè)生物堿，其中化合物1～9為三萜生物堿，化合物10為甾體生物堿，化合物1及3～10為首次從該植物中分離得到.

1 儀器與材料

FABMS在VG Auto Spec-3000質(zhì)譜儀上測(cè)定；NMR在Bruker AM-600和Bruker DRX-500 MHz核磁共振儀上測(cè)定；LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；N-1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化株式會(huì)社)；SHZ-DⅢ循環(huán)水真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；DLSB-5/10低溫冷卻液循環(huán)泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；AL-204電子天平(梅特勒-托利多儀器生產(chǎn)公司)；薄層硅膠板F254和柱色譜硅膠(孔徑為10～40 μm)為青島海洋化工廠生產(chǎn)；薄層中性氧化鋁板AGF254和堿性氧化鋁(孔徑為10～40 μm)為上海盛亞化工有限公司生產(chǎn)；凝膠為Sephadex LH-20；顯色劑為改良碘化鉍鉀；其余試劑均為色譜純或分析純.

雀舌黃楊地上枝葉于2020年10月采自云南師范大學(xué)校內(nèi)，由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所趙玉娟博士鑒定為黃楊科黃楊屬雀舌黃楊(Buxusbodinieri).植物標(biāo)本存放于云南師范大學(xué)職業(yè)技術(shù)教育學(xué)院生藥材實(shí)驗(yàn)室(標(biāo)本號(hào)為YNU-ZJ20201002).

2 提取與分離

稱取雀舌黃楊干燥的地上部分15 kg，粉碎后用甲醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮，將濃縮液分散在水中，加0.01 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)溶液至pH≈4，分別用4 L乙酸乙酯萃取3次，濃縮得到非生物堿部分(1.4 kg).酸水液用2%NaOH堿化至pH≈10，用4 L氯仿萃取3次得到總生物堿部分(260 g).總生物堿部分進(jìn)行硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇 (體積比分別為100∶0、50∶1、20∶1和5∶1)洗脫并濃縮各流分，分別得到組分Fr.1～4.Fr.2 (70 g) 用中性氧化鋁柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯 (體積比分別為50∶1、40∶1、20∶1、10∶1)洗脫，對(duì)石油醚-乙酸乙酯 (體積比40∶1)分離出來(lái)的組分，用硅膠柱色譜以石油醚-乙酸乙酯 (體積比40∶1)洗脫，再經(jīng)半制備高效液相色譜分離(色譜柱：Agilent XDB-C18 9.4 mm×250 mm；甲醇∶0.5%NH3·H2O體積比為60∶40～100∶0，洗脫時(shí)間70 min；波長(zhǎng)為225 nm；流速為4.0 mL/min)，得到化合物1 (14 mg，tR=26.5)、5 (12 mg，tR=28.9)、6 (21 mg，tR=41.3)和9 (9 mg，tR=31.1).Fr.3 (20 g) 用氧化鋁柱色譜，經(jīng)氯仿-甲醇(體積比25∶1～10∶1)系統(tǒng)洗脫，分為3個(gè)流分Fr.3a～3c，對(duì)Fr.3a部分(10 g) 用SephadexLH-20 (甲醇)，硅膠柱色譜以氯仿-甲醇 (體積比25∶1)洗脫，得到化合物2 (85 mg).Fr.3b用中性氧化鋁柱色譜以氯仿-甲醇 (體積比30∶1)洗脫，得到化合物3 (180 mg)和4 (35 mg).Fr.4 (30 g) 用硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇(體積比10∶1～5∶1)系統(tǒng)洗脫，再用氧化鋁柱層析，乙酸乙酯洗脫去大部分色素后，經(jīng)反相制備HPLC(甲醇∶0.5%NH3·H2O，體積比60∶40～100∶0，洗脫時(shí)間40 min)，得到化合物7 (20 mg，tR=14.9)、8 (9 mg，tR=16.7)和10 (12 mg，tR=22.1).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C26H41NO，EI-MS：m/z383[M]+.1H NMR(ppm，CDCl3，500 MHz)δ：6.74(d，J=10.5，H-1)，5.89(d，J=10.4，H-2)，0.70，1.26(d，J=4.4，H-19)，0.79(d，J=6.0，21-CH3)，0.88(s，18-CH3)，2.14 (s，Nb(CH3)2)；13C NMR (ppm，CDCl3，125 MHz)δ:153.8(d，C-1)，126.7(d，C-2)，205.1(s，C-3)，45.3(s，C-4)，44.2(d，C-5)，29.0(t，C-6)，27.7(t，C-7)，43.3(d，C-8)，24.6(s，C-9)，30.1(s，C-10)，23.2(t，C-11)，19.4(t，C-12)，44.3(s，C-13)，49.3(s，C-14)，24.6(t，C-15)，34.2(t，C-16)，50.4(d，C-17)，19.1(q，18-CH3)，32.0(t，C-19)，61.2(d，C-20)，9.5(q，21-CH3)，18.5(q，C-30)，21.4(q，C-31)，17.0(q，C-32)，39.9(q，Nb(CH3)2).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定為cyclobuxoviridine.

化合物2:無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C26H41NO2，EI-MS：m/z399[M]+.1H NMR(ppm,CDCl3，500 MHz)δ：6.81(d，J=10.6，H-1)，5.98(d，J=10.4，H-2)，2.18(dd，J=12.6，4.0，H-5)，4.11(m，H-16)，0.82，1.32(d，J=4.4，H-19)，1.00(s，18-CH3)，1.15(s，32-CH3)，2.20 (s，Nb(CH3)2)；13C NMR (ppm，CDCl3，125 MHz) δ：153.6(d，C-1)，126.6(d，C-2)，205.1(s，C-3)，45.9(s，C-4)，44.5(d，C-5)，31.0(t，C-6)，27.3(t，C-7)，44.2(d，C-8)，23.9(s，C-9)，29.8(s，C-10)，23.7(t，C-11)，19.6(t，C-12)，45.9(s，C-13)，47.6(s，C-14)，43.4(t，C-15)，78.6 (d，C-16)，56.7(d，C-17)，19.0(q，18-CH3)，30.4(t，C-19)，62.0(d，C-20)，9.6(q，21-CH3)，20.2(q，C-30)，21.3(q，C-31)，17.9(q，C-32)，44.5(q，Nb(CH3)2).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定為N-dimethylcycloxobuxovircine.

化合物3:無(wú)色晶體，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C27H48N2O，ESI-MS：m/z417[M+H]+.1H NMR (ppm，CDCl3，500 MHz)δ：2.60(m，H-3)，4.01(t，J=7.5，H-16),0.28,0.52 (d，J= 4.2，H-19)，0.85(d，J=6.0，H-21)；13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：31.5(t，C-1),32.6(t，C-2)，62.4(d，C-3)，39.9(s，C-4)，47.2(d，C-5)，21.3(t,C-6)，26.7(t，C-7)，48.0(d，C-8)，19.4(s，C-9)，26.1(s，C-10)，26.1(t，C-11)，35.3(t，C-12)，44.8(s，C-13)，47.2(s，C-14)，44.6(t，C-15)，79.0(d，C-16)，68.5(d，C-17)，19.0(q，18-CH3)，30.3(t，C-19)，56.9(d，C-20)，9.5(q，21-CH3)，18.9 (q，C-30)，25.7(q，C-31)，15.0(q，C-32)，35.6 (q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定為cyclovirobuxine C.

化合物4:無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C28H50N2O， ESI-MS：m/z431[M+H]+.1H NMR (ppm，CDCl3，500 MHz)δ：2.41(dd，J=3.0，12.5，H-3)，0.28，0.54(d，J=4.0，H-19)，0.86(s，18-CH3)，1.02(s，32-CH3)，2.17(s，N-CH3)，0.98(d，J=6.4，21-CH3).13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：32.8(t，C-1)，25.0(t，C-2)，53.6 (d，C-3)，40.3(s，C-4)，45.7(d，C-5)，21.6(t，C-6)，27.0(t，C-7)，46.7(d，C-8)，19.5(s，C-9)，24.9(s，C-10)，28.5(t，C-11)，33.2(t，C-12)，43.9(s，C-13)，47.2(s，C-14)，29.5(t，C-15)，78.4(d，C-16)，58.2(d，C-17)，11.1(q，18-CH3)，30.2(t，C-19)，56.3(d，C-20)，18.8(q，21-CH3)，25.2(q，C-30)，9.6(q，C-31)，20.9(q，C-32)，41.2(q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定為cyclovirobuxine A.

化合物5：白色針晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C27H48N2， ESI-MS：m/z401[M+H]+.1H NMR (ppm，CDCl3，500 MHz)δ：0.28，0.51(d，J=5.0，H-19)，0.85(d，J=6.0，H-21)，2.29 (s，Nb(CH3)2)，2.52(s，Na-CH3).13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：31.2(t，C-1)，32.6(t，C-2)，68.9(d，C-3)，39.9(s，C-4)，48.0(d，C-5)，21.3(t，C-6)，26.3(t，C-7)，48.4(d，C-8)，19.4(s，C-9)，26.0(s，C-10)，26.0(t，C-11)，35.3 (t，C-12)，44.3(s，C-13)，48.9(s，C-14)，32.5(t，C-15)，26.3(t，C-16)，50.6(d，C-17)，18.3(q，18-CH3)，29.7(t，C-19)，61.6(d，C-20)，9.3(q，21-CH3)，19.4(q，C-30)，25.8(q，C-31)，15.1(q，C-32)，39.9(q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定為cycloprotobuxine C.

化合物6：無(wú)色晶體，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C28H50N2，ESI-MS：m/z415[M+H]+.1H NMR(ppm，CDCl3，500 MHz)δ：2.50(brs，H-3)，0.28，0.53(d，J=4.1，H-19).13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：31.4(t，C-1)，32.6(t，C-2)，77.0(d，C-3)，39.9(s，C-4)，47.2(d，C-5)，21.3(t，C-6)，26.7(t，C-7)，48.0(d，C-8)，19.4(s，C-9)，26.1(s，C-10)，27.1(t，C-11)，35.3(t，C-12)，44.8(s，C-13)，47.2(s，C-14)，32.6(t，C-15)，19.0(t，C-16)，50.6(d，C-17)，19.0(q，18-CH3)，30.3(t，C-19)，56.2(d，C-20)，9.3(q，21-CH3)，19.0(q，C-30)，25.7(q，C-31)，15.0(q，C-32)，35.3(q，N(CH3)2).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定為cycloprotobuxine A.

化合物7：無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C27H46N2O2， ESI-MS：m/z431[M+H]+.1H NMR(ppm，CDCl3，500 MHz)δ：2.58 (dd，J=3.5，12.0，H-3)，0.33，0.59(d，J=4.1，H-19)，0.96(s，18-CH3)，1.12(s，32-CH3)，1.88(s，N-CH3)，0.89(d，J=6.4，21-CH3)，3.26，3.76(dd，J=11.0，29-CH2)，4.26，4.61(dd，J=10.4，31-CH3).13C NMR (ppm，CDCl3，125 MHz)δ：33.0(t，C-1)，25.9(t，C-2)，63.5(d，C-3)，38.2(s，C-4)，45.1(d，C-5)，19.1(t，C-6)，25.3(t，C-7)，47.3(d，C-8)，20.9(s，C-9)，25.8(s，C-10)，27.4(t，C-11)，30.6(t，C-12)，44.6(s，C-13)，47.2(s，C-14)，44.9(t，C-15)，80.4(d，C-16)，57.0(d，C-17)，11.3(q，18-CH3)，31.6(t，C-19)，57.0(d，C-20)，18.8(q，21-CH3)，76.9(q，C-30)，9.8(q，C-31)，19.7(q，C-32)，42.2(q，N-CH3)，80.1(t，C-33).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定為cyclobuxoxazine.

化合物8：無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C28H48N2O2，ESI-MS：m/z445[M+H]+.1H NMR(ppm，CDCl3，500 MHz)δ：2.71(m，H-3)，0.34，0.58(d，J=4.4，H-19)，0.90(d，J=6.0，21-CH3)，3.14，3.58(dd，J=11.0，30-CH2)，3.72，4.42(dd，J=10.4，31-CH3)，2.09(s，N-CH3).13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：31.6(t，C-1)，23.8(t，C-2)，71.8(d，C-3)，38.7(s，C-4)，44.7(d，C-5)，20.1(t，C-6)，25.3(t，C-7)，47.3(d，C-8)，18.9(s，C-9)，25.6(s，C-10)，5.8(t，C-11)，31.6(t，C-12)，44.9(s，C-13)，47.3(s，C-14)，44.6(t，C-15)，78.3(d，C-16)，62.7(d，C-17)，18.8(q，18-CH3)，30.6(t，C-19)，56.9(d，C-20)，9.8(q，21-CH3)， 78.3(t，C-30)，13.7(q，C-31)，20.8(q，C-32)，88.7(t，C-33)，36.5(q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定為cyclobuxoxazine A.

化合物9：無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C25H40NO，ESI-MSm/z：370[M+H]+.δ：2.85 (m，H-3)，-0.04，0.50(d，J=4.1,H-19)，0.85(s，18-CH3)，1.08(s，21-CH3)，4.61，4.85(s，29-CH2)，0.90(s，30-CH3)，2.50(s，N-CH3).13C NMR(ppm，CDCl3，125 MHz)δ：31.0(t，C-1)，25.7(t，C-2)，63.6(d，C-3)，153.3(s，C-4)，41(d，C-5)，21.2(t，C-6)，26.2(t，C-7)，42.4(d，C-8)，23.3(s，C-9)，32.0(s，C-10)，21.4(t，C-11)，33.3(t，C-12)，42.7(s，C-13)，46.0(s，C-14)，22.4(t，C-15)，34.2(d，C-16)，46.8 (d，C-17)，18.3(q，18-CH3)，22.0(t，C-19)，212.9(d，C-20)，17.8(q，21-CH3)，101.5(t，C-28)，11.5(q，C-30)，34.5(q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為buxruguline B.

圖1 雀舌黃楊中得到的化合物1～10的結(jié)構(gòu)

化合物10：無(wú)色結(jié)晶，改良碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽(yáng)性，C23H39NO，EI-MS：m/z345[M+H]+.1H NMR(ppm,CDCl3,500 MHz)δ：5.36(1H，d，J=4.2，H-6)，3.50(m，H-3)，0.88(s，J=6.4，21-CH3)，0.68(s，18-CH3)，0.97(s，19-CH3)，2.14(s，N-CH3)；13C NMR (ppm,CDCl3,125 MHz)δ：31.8(t，C-1)，39.5(t，C-2)，71.7(d，C-3)，42.2(t，C-4)，140.7(s，C-5)，121.6(d，C-6)，37.2(t，C-7)，50.1(d，C-8)，31.8(d，C-9)，36.5(s，C-10)，21.0(t，C-11)，31.6(t，C-12)，41.4(s，C-13)，54.7(d，C-14)，24.1(t，C-15)，27.6(t，C-16)，56.8(d，C-17)，12.1(q，18-CH3)，19.4(q，C-19)，61.1(d，C-20)，9.9(q，21-CH3)，39.8(q，N-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為irehine.

4 討論

研究發(fā)現(xiàn)黃楊中含有生物堿類、黃酮類、甾醇、香豆素、木脂素和酸類化合物等多種化學(xué)成分，其中生物堿成分類型最為豐富.研究從雀舌黃楊的甲醇提取物中分離得到10個(gè)黃楊生物堿類化合物.其中化合物1～9為三萜生物堿，化合物10為甾體生物堿，化合物1和3～10為首次從該植物中分離得到.已有的研究表明化合物5、6和7對(duì)HL-60、SMMC-7721、A-549、MCF-7和SW480腫瘤細(xì)胞株有較好的抗腫瘤活性[5].研究為雀舌黃楊的資源開發(fā)和利用提供參考，同時(shí)為其主要藥效活性物質(zhì)的深入研究提供數(shù)據(jù)支持.