云南彝族感染性發(fā)熱患者血液培養(yǎng)細(xì)菌菌譜及耐藥性的研究

梅鮮艷

（楚雄醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校 云南楚雄 675005）

近年來，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的迅猛發(fā)展及廣譜、超廣譜抗生素的廣泛使用，使細(xì)菌耐藥性不斷增強，細(xì)菌培養(yǎng)難度增加。自動化血液/體液培養(yǎng)儀廣泛在臨床中應(yīng)用，為感染性疾病的快速、準(zhǔn)確診斷提供了科學(xué)依據(jù)?？咕幬锏膹V泛應(yīng)用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性和耐藥監(jiān)測發(fā)生了很大變化，由于細(xì)菌耐藥機制的多樣變化，復(fù)雜化，體外藥敏試驗表現(xiàn)為敏感，臨床治療往往無效。因此研究云南省楚雄彝族自治州醫(yī)院內(nèi)臨床分離病原菌的分布及藥物敏感率，對指導(dǎo)臨床用藥減少耐藥菌株產(chǎn)生具有重要價值。本文研究如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

收集云南省楚雄彝族自治州醫(yī)院2019 年3 月1 日～2019 年9 月30 日和2020 年3 月1 日～2020年9 月30 日前后兩個不同時期各病室送檢的發(fā)熱患者血樣，前者作為對照組，后者作為觀察組。對照組526 份血樣，觀察組408 份血樣。分別對經(jīng)血培養(yǎng)檢出的病原菌進(jìn)行了菌譜分布及耐藥性分析，收集血培養(yǎng)細(xì)菌株陽性的細(xì)菌感染患者的相關(guān)病歷資料，包括患者住院科室、性別、年齡、民族（彝族）、基礎(chǔ)疾病、血培養(yǎng)陽性細(xì)菌株種類（同一患者多次分離到的相同的菌株不重復(fù)計入）及抗生素敏感性等資料。觀察組和對照組均選擇同一廠家的血培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)分析系統(tǒng)及藥敏卡。

1.2 方法

細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定及藥敏試驗。

1.2.1 血培養(yǎng)瓶。一次性全封閉血培養(yǎng)瓶為BacT/Alert 系統(tǒng)專用瓶（法國生物梅里埃公司），分成人標(biāo)準(zhǔn)瓶，小兒培養(yǎng)瓶和中和抗生素瓶3 種。

1.2.2 培養(yǎng)分析系統(tǒng)。BacT/Alter 3D 120 型全自動血液培養(yǎng)儀（法國生物梅里埃公司）。細(xì)菌培養(yǎng)基（鄭州安圖綠生物有限公司）。

1.2.3 樣本采集及處理。由專業(yè)人員嚴(yán)格按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第5 版進(jìn)行采集。一般情況下，應(yīng)在患者發(fā)熱高峰前1 小時或之后采集。原則上應(yīng)在抗菌藥物應(yīng)用之前，對已用藥而不能中止的患者，也應(yīng)在下次用藥之前經(jīng)橈動脈、股靜脈取血，局部嚴(yán)格消毒采集。成人8～10 毫升，兒童1～5 毫升，無菌注入血培養(yǎng)瓶中混勻（成人用標(biāo)準(zhǔn)瓶，小兒用小兒培養(yǎng)瓶），立即放入BacT/Alter 3D 120 型全自動血液培養(yǎng)儀內(nèi)培養(yǎng)。

1.2.4 陽性培養(yǎng)瓶處理。血培養(yǎng)陽性結(jié)果十分重要，當(dāng)系統(tǒng)報告為陽性瓶后立即結(jié)合患者近期樣本的培養(yǎng)情況口頭將陽性培養(yǎng)結(jié)果和革蘭染色的形態(tài)及其他鑒定資料報告給患者的主治醫(yī)生，如G+球菌可疑為葡萄球菌，這些結(jié)果對解釋感染來源非常有利，報告的日期和時間以及接受報告人的姓名應(yīng)記錄在患者報告單上。另外，系統(tǒng)報告為陽性瓶時，及時轉(zhuǎn)種血瓊脂、巧克力瓊脂和中國藍(lán)平皿。將血瓊脂、巧克力瓊脂置5%～8%CO2環(huán)境培養(yǎng)，中國藍(lán)瓊脂置普通孵箱35℃培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)皿上菌落形態(tài)對陽性結(jié)果進(jìn)行革蘭染色，并上全自動微生物鑒定儀VitekII 對菌種進(jìn)行判斷后進(jìn)行藥敏實驗。

1.2.5 陰性瓶處理。當(dāng)系統(tǒng)指示有培養(yǎng)瓶已到預(yù)置的報告時間時（我院血培養(yǎng)時間設(shè)置為5 天），按常規(guī)步驟卸瓶，用無菌注射器或系統(tǒng)附帶采樣針取材轉(zhuǎn)種血瓊脂、中國藍(lán)瓊脂，必要時加巧克力瓊脂，置35℃18～24 小時培養(yǎng)，若無細(xì)菌生長方可報告血液培養(yǎng)無菌生長。

1.2.6 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗。使用法國梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK2 全自動微生物分析儀和藥敏分析儀進(jìn)行分析，鑒定卡（ID—GNB，ID—GPC，ID—YST）及藥敏卡鑒定藥敏卡片為公司配套的，必要時使用K-B 法作為補充對照。按NCCLS2006 年版標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行分析。

1.2.7 質(zhì)控菌株。用標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸埃希氏菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC 29213，銅綠假單胞菌ATCC 27853 進(jìn)行鑒定和藥敏試驗。判斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用臨床醫(yī)學(xué)版v:4.09 軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，相對數(shù)用率、構(gòu)成比表示以及采用SPSS16.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間差異比較運用χ2檢驗，以P＜0.05 為組間差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組細(xì)菌感染性發(fā)熱患者血培養(yǎng)陽性細(xì)菌構(gòu)成比

兩時段送檢的408 份和526 份血培養(yǎng)樣本中各有80 和40 份細(xì)菌培養(yǎng)陽性，陽性檢出率分別為19.6%和7.6%。血培養(yǎng)都是以G-菌感染居多，具體病原菌檢出結(jié)果見表1。

表1 兩組細(xì)菌血培養(yǎng)陽性率比較

2.2 病原菌耐藥性的檢測

2020 年3 月1 日～2020 年9 月30 日時間段分離出的主要病原菌大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌對抗菌藥物的敏感率和耐藥率以及兩時間段耐藥率的比較分別見表2～表4。

表2 觀察組大腸埃希菌對抗菌藥物的敏感率和耐藥率

表4 兩組細(xì)菌耐藥率比較

由表1 可見，2020 年3 月1 日～2020 年9 月30日和2019 年3 月1 日～2019 年9 月30 日兩時段送檢的408、526 份血培養(yǎng)樣本中各有80、40 份培養(yǎng)陽性，陽性率分別為19.6%、7.6%。兩時間段血培養(yǎng)都以G-性菌感染居多。觀察組結(jié)果顯示引起敗血癥的病原菌種類增多，由14 種增加到17 種，以G-菌為主，占68.75%，G+球菌次之，占22.50%。G-桿菌以腸桿菌科細(xì)菌最為多見，占62.50%。腸桿菌科細(xì)菌中大腸埃希菌檢出率高，占38.75%；G+球菌以葡萄球菌屬多見，占16.25%，葡萄球菌屬中的金黃色葡萄球菌檢出率也較高，占13.75%。由表1 數(shù)據(jù)顯示觀察組的總檢出率（19.6%）和各種細(xì)菌檢出率顯著大于對照組的總檢出率（7.6%）和各種細(xì)菌檢出率，P＜0.05 有統(tǒng)計學(xué)意義。血培養(yǎng)陽性檢出率明顯增高。

由表2 可以看出，氨芐西林對大腸埃希菌的耐藥情況非常嚴(yán)重，高達(dá)93.7%.其次對大腸埃希菌有較弱耐藥性的為頭孢唑肟，耐藥率為20%左右。從表3 可以看出青霉素G 對金黃色葡萄球菌的耐藥情況非常嚴(yán)重，高達(dá)96.1%，其次對金黃色葡萄球菌有較弱耐藥性的為苯唑西林、氨芐西林/舒巴坦，亞胺培南，耐藥率為20%左右。由表4 數(shù)據(jù)顯示觀察組的G+性菌，金黃色葡萄球菌，G-性菌，大腸埃希菌耐藥率顯著大于對照組，P＜0.05 有統(tǒng)計學(xué)意義。金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的耐藥性越來越嚴(yán)重。

表3 觀察組金黃色葡萄球菌對抗菌藥物的敏感率和耐藥率

3 討論

血培養(yǎng)檢測病原菌是診斷感染性疾病的實用方法。特別是細(xì)菌性感染者，常常需要進(jìn)行血培養(yǎng)檢測為臨床治療提供參考依據(jù)。血液感染是非常嚴(yán)重的感染病，主要表現(xiàn)為敗血癥，尤其是耐藥株的增加，使其診斷和治療也很棘手?？焖贉?zhǔn)確的病原菌鑒定和藥敏結(jié)果是敗血癥明確診斷和治療最有效的手段。

通過分析本次觀察組血培養(yǎng)結(jié)果，從表2 可見，G-細(xì)菌對氨芐西林的耐藥率最高，其次為頭孢唑林。對亞胺培南、慶大霉素的耐藥率較低＜1.0%，可作為臨床經(jīng)驗用藥的一線藥物；對喹諾酮類（氧氟沙星）的耐藥率為50.4%～55.2%；對氨基糖苷類（慶大霉素）的耐藥率為0.95%。上述G-細(xì)菌多有多重耐藥趨勢。從表3 可見G+細(xì)菌對青霉素的耐藥率最高，其次為克林霉素和紅霉素。金黃色葡萄球菌對青霉素的耐藥率＞90%，對萬古霉素敏感，耐藥率為零。因此，加強監(jiān)測，分析階段性細(xì)菌株種類及耐藥情況，對醫(yī)療機構(gòu)合理選用抗菌藥物具有重要意義。