唾液乳桿菌SNK-6和飼糧粗蛋白質(zhì)水平對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)和腸道組織形態(tài)的影響

劉 瑋 韓海霞 李大鵬 雷秋霞 嚴(yán)華祥 周 艷 劉 杰 王 杰 曹頂國(guó) 李惠敏 陳 甫 李福偉*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東省家禽育種工程技術(shù)研究中心，濟(jì)南250100；2.上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，國(guó)家家禽工程技術(shù)研究中心，上海201106；3.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，青島266109)

目前，我國(guó)飼料一般都以玉米-豆粕型為主，但國(guó)產(chǎn)大豆產(chǎn)量遠(yuǎn)達(dá)不到需求量，導(dǎo)致我國(guó)飼料業(yè)大豆過(guò)度依賴于進(jìn)口，這成為影響國(guó)家糧食安全的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系提供的數(shù)據(jù)顯示，2021年我國(guó)蛋雞年消耗豆粕達(dá)1 100萬(wàn)t。隨著人民對(duì)優(yōu)質(zhì)動(dòng)物產(chǎn)品需求量的持續(xù)增加，飼料中大豆等蛋白質(zhì)原料的缺口將越來(lái)越大。同時(shí)，蛋白質(zhì)原料作為飼糧的重要組成成分，其成本在飼料配制的總成本中占到35%以上[1]，而2020—2021年2年間豆粕價(jià)格上漲超過(guò)20%[2]，成為影響畜產(chǎn)品價(jià)格波動(dòng)的重要因素。研究表明，飼糧粗蛋白質(zhì)(CP)水平每降低1個(gè)百分點(diǎn)，可減少8%～10%總氮的排放量[3]，并對(duì)畜禽健康和福利等具有重要意義[4]。作為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)最杰出的益生菌之一，乳桿菌已被廣泛研究并應(yīng)用于食品工業(yè)、畜牧業(yè)和醫(yī)療保健行業(yè)[5-7]。其中，唾液乳桿菌(Lactobacillussalivarius)不僅具有較強(qiáng)的抗菌消炎[8]、免疫調(diào)控[9]和調(diào)節(jié)微生物群[10]的作用，而且能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)吸收和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝[11-12]。因此，為適應(yīng)大宗飼料原料供需趨緊的新形勢(shì)，結(jié)合添加益生菌等添加劑構(gòu)建豆粕減量提效的蛋雞飼糧配方，促進(jìn)飼料糧保供穩(wěn)市，既是涉及糧食安全的國(guó)家重大需求，也是蛋雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最急需解決的瓶頸技術(shù)。張帥[13]研究了飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，結(jié)果表明汶上蘆花雞31～36周齡適宜的飼糧CP水平為15.55%。齊明星等[14]研究了飼糧不同代謝能、CP水平對(duì)43周齡新楊綠殼蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血清生化指標(biāo)的影響，認(rèn)為飼糧代謝能、CP水平分別為11.08 MJ/kg和15.00%時(shí)，更有利于綠殼蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的發(fā)揮和蛋品質(zhì)的改善。Abou-Elkhair等[4]研究表明，低CP水平飼糧中添加色氨酸、蘇氨酸和纈氨酸可改善肉雞的生產(chǎn)性能、健康狀況和免疫力。Zhou等[15]研究表明，在低CP水平飼糧中添加絲氨酸可能通過(guò)增強(qiáng)蛋雞體液和回腸黏膜免疫功能，以及減輕回腸炎癥來(lái)改善其生產(chǎn)性能。張思軒等[16]研究了在平衡6種可消化氨基酸條件下，不同類型低CP水平飼糧對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血清生化指標(biāo)的影響無(wú)顯著差異。劉婷等[17]和楊廣達(dá)[18]研究表明，乳桿菌能夠通過(guò)促進(jìn)飼糧中氨基酸的平衡性吸收，使進(jìn)入機(jī)體的各種氨基酸的組成和需要一致，促進(jìn)機(jī)體氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)吸收和蛋白質(zhì)合成。不過(guò)，目前關(guān)于飼糧降低CP水平的研究多集中在理想氨基酸模式和豆粕替代物等方面，對(duì)于通過(guò)在汶上蘆花雞飼糧中添加益生菌降低飼糧CP水平的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)研究在汶上蘆花雞不同CP水平飼糧中添加唾液乳桿菌SNK-6對(duì)其生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)和腸道組織形態(tài)的影響，為探明汶上蘆花雞產(chǎn)蛋期適宜的CP水平和添加唾液乳桿菌SNK-6在降低CP水平等方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

唾液乳桿菌SNK-6為粉狀，菌粉中活菌數(shù)為1.00×1011CFU/g，由上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于2021年6月1日起在山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行。選取432只40周齡、體重相近的健康汶上蘆花母雞，隨機(jī)分為6個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。采用2因素3水平試驗(yàn)設(shè)計(jì)，參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)，設(shè)計(jì)配制CP水平分別為14.5%、15.5%和16.5%的3種玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，并根據(jù)唾液乳桿菌SNK-6(中試)產(chǎn)品說(shuō)明書，在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0和2×108CFU/kg唾液乳桿菌SNK-6(正試期開始時(shí)連續(xù)添加2 d，之后正試期每周末添加1次)；基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。采用3層層疊式籠養(yǎng)，試驗(yàn)期間試驗(yàn)雞自由采食、飲水。預(yù)試期2周，期間按各重復(fù)統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋量，結(jié)束時(shí)根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，使各組間在正試期開始時(shí)雞體重和產(chǎn)蛋率均差異不顯著(P>0.05)，正試期10周。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

表2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1 生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)測(cè)定

試驗(yàn)期間，以重復(fù)為單位記錄每天的產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、不合格蛋數(shù)(破蛋、軟蛋、畸形蛋、砂殼蛋數(shù))和每周的采食量；試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)為單位計(jì)算每組的平均日采食量、平均蛋重、產(chǎn)蛋率、不合格蛋率和料蛋比。

正試期結(jié)束時(shí)(第10周末)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取6個(gè)雞蛋測(cè)定蛋品質(zhì)。采用游標(biāo)卡尺測(cè)定雞蛋的縱徑和橫徑，計(jì)算蛋形指數(shù)(蛋形指數(shù)=縱徑/橫徑)；采用色差儀(5SE型，英國(guó)TSS公司)分別測(cè)定雞蛋鈍端、中端和尖端的蛋殼顏色，3個(gè)部位測(cè)定的平均值代表測(cè)定值；采用蛋殼強(qiáng)度測(cè)試儀(FGV-10XY型，日本Nidec公司)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；采用多功能蛋品質(zhì)檢測(cè)儀(EMT-5200型，日本Robotmation公司)測(cè)定蛋重、蛋黃顏色、蛋白高度和哈氏單位；使用40目篩過(guò)濾蛋清，過(guò)濾后的蛋清為稀蛋清，其余為濃蛋清，采用電子天平稱量蛋黃重、濃蛋清重、稀蛋清重和蛋殼重，分別計(jì)算蛋黃比例(蛋黃比例=蛋黃重/蛋重)、蛋殼比例(蛋殼比例=蛋殼重/蛋重)和濃稀蛋清比(濃稀蛋清比=濃蛋清/稀蛋清)；采用蛋殼厚度測(cè)量?jī)x(NFN-380型，日本FHK公司)分別測(cè)量雞蛋鈍端、中端和尖端蛋殼厚度，3個(gè)部位測(cè)定的平均值代表測(cè)定值。

1.3.2 血清生化、抗氧化和免疫指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)選取1只雞，空腹12 h后翅靜脈采血4 mL，靜置1 h后3 500 r/min 離心10 min，取上清置于-80 ℃冰箱保存。使用全自動(dòng)血液生化分析系統(tǒng)(AU5400，Beckman Coulter，美國(guó))測(cè)定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(UN)、尿酸(UA)、總膽固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)和葡萄糖(GLU)含量；血清中鈣(Ca)和磷(P)含量，堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性，以及總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定；血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、干擾素-α(INF-α)、干擾素-β(INF-β)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)含量采用武漢基因美生物科技有限公司試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 腸道組織形態(tài)和盲腸分泌型免疫球蛋白A含量(sIgA)測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)束后，快速解剖翅靜脈采血后的雞，取3 cm左右盲腸，使用玻片刮取腸黏膜后收集于凍存管中，-20 ℃保存，使用武漢基因美生物科技有限公司試劑盒測(cè)定盲腸sIgA含量；取十二指腸、空腸和回腸中段約2 cm，使用4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用乙醇對(duì)腸道組織脫水，然后用二甲苯清洗后進(jìn)行浸蠟、包埋、切片和蘇木精-伊紅(HE)染色，在顯微鏡下觀察拍照，通過(guò)Image-Pro Plus軟件測(cè)量小腸各腸斷絨毛高度和隱窩深度，并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度值。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel 2010整理后應(yīng)用SAS 9.2軟件中的一般線性模型(GLM)程序進(jìn)行方差分析，以重復(fù)為試驗(yàn)單元，模型的主要效應(yīng)包括飼糧是否添加SNK-6和CP水平以及二者之間的互作效應(yīng)；F檢驗(yàn)顯著差異者，以最小顯著差異(LSD)法比較平均值間的差異顯著性；結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05為差異顯著，0.05≤P<0.10為差異有顯著趨勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能的影響

由表3可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6有提高汶上蘆花雞平均日采食量(P=0.074)和降低不合格蛋率(P=0.057)的趨勢(shì)。飼糧CP水平對(duì)平均日采食量和產(chǎn)蛋率有顯著影響(P<0.05)，其中15.5%和16.5%CP水平組平均日采食量和產(chǎn)蛋率顯著高于14.5%CP水平組(P<0.05)；隨著CP水平的降低，料蛋比有升高的趨勢(shì)(P=0.092)。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)平均日采食量和產(chǎn)蛋率有顯著影響(P<0.05)，其中Ⅵ組平均日采食量顯著高于Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅴ組(P<0.05)，Ⅳ組和Ⅴ組顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅳ組顯著高于Ⅰ組～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅱ和Ⅲ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；Ⅳ組和Ⅵ組產(chǎn)蛋率顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅲ組和Ⅴ組顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表3 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞蛋品質(zhì)的影響

由表4可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高蛋殼強(qiáng)度(P<0.05)。飼糧CP水平對(duì)蛋黃顏色有顯著影響(P<0.05)，其中16.5%CP水平組蛋黃顏色顯著高于15.5%和14.5%CP水平組(P<0.05)；隨著CP水平的降低，蛋白高度有降低的趨勢(shì)(P=0.096)。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)蛋品質(zhì)指標(biāo)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表4 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞蛋品質(zhì)的影響

續(xù)表4項(xiàng)目Items蛋重 Egg weight/g蛋形指數(shù) Egg shape index蛋殼顏色 Egg shell color蛋殼強(qiáng)度 Eggshell hardness/(kg/cm2)蛋殼厚度 Egg shell thickness/mm蛋殼比例 Egg shell ratio/%蛋黃比例 Egg yolk ratio/%蛋黃顏色 Yolk color蛋白高度 Albumen height/mm哈氏單位 Haugh unit濃稀蛋清比 Thick white/thin white/%P值 P-value飼糧CP水平 Dietary CP level0.3450.9450.5760.7290.3180.4900.4140.0420.0960.2980.228唾液乳桿菌SNK-6 Lactobacillus salivarius SNK-60.5630.9010.1330.0420.4890.5050.3740.9760.7890.5100.738飼糧CP水平×唾液乳桿菌SNK-6 Dietary CP level×Lactobacillus salivarius SNK-60.3960.4910.1300.2420.3450.4560.3640.1500.1550.3520.371

2.3 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高汶上蘆花雞血清Ca、P含量(P<0.05)，有降低血清ALB(P=0.071)、UN(P=0.055)、TG(P=0.081)和GLU(P=0.090)含量的趨勢(shì)。飼糧CP水平對(duì)血清UA含量有顯著影響(P<0.05)，其中15.5%和16.5%CP水平組血清UA含量顯著高于14.5%CP水平組(P<0.05)；隨著飼糧CP水平的降低，血清GLB(P=0.052)、UN(P=0.076)和GLU(P=0.074)有降低的趨勢(shì)。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清UA含量有顯著影響(P<0.05)，其中Ⅴ組血清UA含量顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于Ⅱ組(P<0.05)。

表5 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清生化指標(biāo)的影響

續(xù)表5項(xiàng)目Items總蛋白 TP/(g/L)白蛋白 ALB/(g/L)球蛋白 GLB/(g/L)尿素氮 UN/(mmol/L)尿酸 UA/(μmol/L)總膽固醇 T-CHO/(mmol/L)甘油三酯 TG/(mmol/L)葡萄糖 GLU/(mmol/L)鈣 Ca/(mmol/L)磷 P/(mmol/L)堿性磷酸酶 AKP/(U/L)飼糧CP水平Dietary CP levels/%14.549.04±3.9520.54±1.8028.50±2.271.88±0.20188.88±17.15b4.63±1.492.45±0.716.41±0.693.69±0.592.09±0.32121.75±22.1715.550.06±3.7020.24±1.3429.82±2.412.16±0.15222.93±17.06a4.88±1.542.66±0.716.48±0.633.63±0.551.88±0.37137.16±21.3716.553.77±3.7521.85±2.2331.92±1.962.09±0.21226.31±21.67a4.90±1.342.41±0.637.30±0.733.84±0.491.95±0.29139.46±18.11唾液乳桿菌SNK-6添加水平 Lactobacillus salivariusSNK-6 supplemental levels/(CFU/kg)051.72±4.3921.66±1.8330.05±2.642.14±0.21219.63±25.125.04±1.322.77±0.667.03±0.683.47±0.44b1.81±0.29b134.81±20.452×10850.16±3.9820.09±1.6130.11±2.591.94±0.21205.77±23.734.57±1.472.24±0.566.42±0.753.96±0.49a2.14±0.27a130.77±22.57P值 P-value飼糧CP水平 Dietary CP level0.1090.2940.0520.0760.0060.9350.8050.0740.7920.5460.299唾液乳桿菌SNK-6 Lactobacillus salivarius SNK-60.4520.0710.9670.0550.2460.4820.0810.0900.0410.0230.696飼糧CP水平×唾液乳桿菌SNK-6 Dietary CP level×Lactobacillus salivarius SNK-60.4150.2610.3470.0950.0260.9880.6480.1190.5250.2900.695

2.4 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6能夠顯著提高汶上蘆花雞血清CAT活性(P<0.05)，有降低血清MDA含量的趨勢(shì)(P=0.088)。飼糧CP水平以及唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清抗氧化指標(biāo)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

表6 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.5 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清免疫指標(biāo)和盲腸sIgA含量的影響

由表7可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6能夠顯著提高汶上蘆花雞血清IgG和盲腸sIgA含量(P<0.05)，有提高血清IL-6含量的趨勢(shì)(P=0.080)。飼糧CP水平對(duì)血清INF-α和盲腸sIgA含量有顯著影響(P<0.05)，其中16.5%CP水平組血清INF-α含量顯著高于14.5%CP水平組(P<0.05)，15.5%和16.5%CP水平組盲腸sIgA含量顯著高于14.5%CP水平組(P<0.05)；隨著飼糧CP水平的降低，血清IgA(P=0.089)和IgG(P=0.060)含量有降低的趨勢(shì)。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清IgG和盲腸sIgA含量有顯著影響(P<0.05)，Ⅳ組～Ⅵ組血清IgG含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，Ⅳ組和Ⅵ組盲腸sIgA含量顯著高于其他組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅴ組盲腸sIgA含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表7 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清免疫指標(biāo)和盲腸sIgA含量的影響

2.6 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞腸道組織形態(tài)的影響

由表8可知，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高汶上蘆花雞空腸和回腸絨毛高度(P<0.05)，有提高空腸(P=0.082)和回腸(P=0.056)絨毛高度/隱窩深度值的趨勢(shì)。飼糧CP水平對(duì)十二指腸和空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值有顯著影響(P<0.05)，其中15.5%和16.5%CP水平組十二指腸和空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值均顯著高于14.5%CP水平組(P<0.05)。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)十二指腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值有顯著影響(P<0.05)，對(duì)空腸絨毛高度有顯著影響(P<0.05)，其中Ⅳ組～Ⅵ組十二指腸絨毛高度顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅳ組～Ⅵ組十二指腸絨毛高度/隱窩深度值顯著高于Ⅰ組～Ⅲ組(P<0.05)，Ⅲ組十二指腸絨毛高度/隱窩深度值顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組(P<0.05)，Ⅳ組和Ⅵ組空腸絨毛高度顯著高于其他組(P<0.05)，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅴ組空腸絨毛高度顯著高于Ⅰ組(P<0.05)。

表8 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞腸道組織形態(tài)的影響

3 討 論

3.1 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能的影響

Lv等[19]研究表明，飼糧添加唾液乳桿菌能夠顯著降低蛋雞料蛋比，對(duì)產(chǎn)蛋率和平均蛋重?zé)o顯著影響。本研究中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6有提高汶上蘆花雞平均日采食量的趨勢(shì)，這與Naseem等[20]的研究結(jié)果一致。同時(shí)，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6有降低不合格蛋率的趨勢(shì)，這可能歸因于唾液乳桿菌具有提高蛋殼強(qiáng)度的作用[21]。先前的研究表明，降低飼糧CP水平能夠降低蛋雞生產(chǎn)性能[22-24]，本研究中15.5%和16.5%CP水平組平均日采食量和產(chǎn)蛋率顯著高于14.5%CP水平組，且隨著飼糧CP水平的降低，料蛋比有升高的趨勢(shì)。這可能因?yàn)榈虲P水平飼糧中總氮水平不足[25]，必需氨基酸不平衡[26]，非必需氨基酸和小肽等無(wú)法得到有效地補(bǔ)充，影響了蛋白質(zhì)利用[27]。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)平均日采食量和產(chǎn)蛋率有顯著影響，其中Ⅳ組與Ⅴ組和Ⅵ組相比平均日采食量和產(chǎn)蛋率差異不顯著，Ⅳ組平均日采食量顯著高于Ⅰ組～Ⅲ組，Ⅳ組產(chǎn)蛋率顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組，說(shuō)明飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可降低飼糧CP水平從16.5%降至15.5%對(duì)汶上蘆花雞生產(chǎn)性能的影響。

3.2 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞蛋品質(zhì)的影響

Lv等[19]研究表明，唾液乳桿菌能夠顯著提高哈氏單位和蛋白高度。Xu等[28]研究表明，唾液乳桿菌對(duì)蛋黃比例和蛋白高度沒(méi)有顯著影響，但能夠顯著提高蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度，有提高哈氏單位的趨勢(shì)。本研究中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高蛋殼強(qiáng)度，這可能是因?yàn)槿闂U菌具有促進(jìn)家禽腸道中維生素和礦物元素吸收利用的作用[29-30]。車彥卓等[31]研究表明，飼糧氨基酸平衡模式下CP水平由16.50%降低至14.85%未顯著影響雞蛋的平均蛋重、蛋清重、濃蛋白重、蛋白高度、哈氏單位和蛋清比例等蛋品質(zhì)指標(biāo)，CP水平降低至13.20%時(shí)則顯著降低了平均蛋重、蛋清重、濃蛋白重和蛋白高度。本研究中，16.5%CP水平組蛋黃顏色顯著高于15.5%和14.5%CP水平組，這與張帥[13]的試驗(yàn)結(jié)果一致，這可能與低CP水平組飼料原料中小麥麩中的著色劑含量少有關(guān)。國(guó)際上通常用蛋白高度和哈氏單位作為蛋清品質(zhì)評(píng)定的指標(biāo)，蛋白高度越高，蛋清越濃稠，蛋清品質(zhì)越好[32]。車彥卓等[27]研究表明，在氨基酸平衡模式下，飼糧CP水平由16.50%降至14.85%未顯著影響試驗(yàn)?zāi)┢陔u蛋的蛋白高度；而在本研究中，隨著飼糧CP水平的降低，蛋白高度有降低的趨勢(shì)，說(shuō)明飼糧過(guò)低的CP水平會(huì)導(dǎo)致蛋雞體內(nèi)蛋白質(zhì)合成不足或者抑制蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而影響蛋清品質(zhì)[33]。此外，唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)蛋品質(zhì)指標(biāo)均無(wú)顯著影響，說(shuō)明唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)汶上蘆花雞蛋品質(zhì)的影響較小，但是改變唾液乳桿菌SNK-6添加量或者提高飼糧CP水平差異是否存在互作效應(yīng)還需通過(guò)進(jìn)一步試驗(yàn)進(jìn)行研究。

3.3 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)能夠反映出動(dòng)物機(jī)體的健康狀況、物質(zhì)吸收和代謝情況。Shokryazdan等[34]研究表明，唾液乳桿菌C11、C12和C13能夠顯著降低肉雞血清T-CHO和TG含量。Panda等[35]研究表明，唾液乳桿菌可降低白來(lái)航蛋種雞的血清膽固醇含量。本研究中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6能夠顯著提高汶上蘆花雞血清Ca、P含量，這可能與乳桿菌在增殖過(guò)程中可產(chǎn)生短鏈脂肪酸，能夠降低腸道pH，形成酸性環(huán)境，從而有利于增加礦物質(zhì)的溶解度，促進(jìn)Ca、P等礦物質(zhì)的吸收有關(guān)[36]。此外，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6有降低血清ALB、UN、TG和GLU含量的趨勢(shì)，而這些指標(biāo)都能夠反映機(jī)體氨基酸代謝和利用狀況，其中血清UN是蛋白質(zhì)分解的最終產(chǎn)物，UN含量下降是蛋白質(zhì)利用率提高的結(jié)果，表明唾液乳桿菌可能具有改善汶上蘆花雞氨基酸的利用、增加蛋白質(zhì)沉積的作用。Ozek等[39]研究表明，隨著飼糧CP水平的降低，血清UN和UA含量有升高的趨勢(shì)；殷若新[38]研究表明，濟(jì)寧百日雞在飼糧CP水平為15%～17%時(shí)，隨著飼糧CP水平的提高，血清UA含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；官麗輝等[39]研究表明，不同CP水平飼糧對(duì)產(chǎn)蛋中期塞北烏骨雞各血液生化指標(biāo)的影響均無(wú)顯著性差異。本研究中，15.5%和16.5%CP水平組血清UA含量顯著高于14.5%CP水平組，且隨著飼糧CP水平的降低，血清GLB、UN和GLU含量有降低的趨勢(shì)，這可能因?yàn)椴煌正g、不同的家禽品種對(duì)CP的需要量不同，所以血液指標(biāo)受飼糧CP水平的影響程度不同。唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清UA含量有顯著影響，Ⅴ組血清UA含量顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組，Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于Ⅱ組，說(shuō)明飼糧CP水平對(duì)血清UA含量的影響較大，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6對(duì)其影響較小。

3.4 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

T-AOC可在一定程度上反映機(jī)體的抗氧化性能[40]。SOD、GSH-Px和CAT形成了氧化損傷的保護(hù)系統(tǒng)[41]。MDA含量的高低可反映體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化水平[42]。曹青青[43]聯(lián)合生物組學(xué)及代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，唾液乳桿菌GZPH2能調(diào)節(jié)豹紋鰓棘鱸腸道菌群并促進(jìn)功能性代謝物產(chǎn)生，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。本研究中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6能夠顯著提高汶上蘆花雞血清CAT活性，有降低血清MDA含量的趨勢(shì)，說(shuō)明飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可能具有改善CAT活性，降低機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量，緩解氧化損傷的功能。劉少凱等[44]研究表明，隨著飼糧CP水平的升高，7～12周齡略陽(yáng)烏雞機(jī)體抗氧化功能具有顯著增強(qiáng)的趨勢(shì)。本研究中，飼糧CP水平以及唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清抗氧化指標(biāo)均無(wú)顯著影響，說(shuō)明在本試驗(yàn)條件下，飼糧CP水平的影響未達(dá)到使機(jī)體受到氧化損傷及細(xì)胞損傷的程度。

3.5 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞免疫功能的影響

蛋雞血液、腸道中白細(xì)胞介素、干擾素等細(xì)胞因子[45-46]和免疫球蛋白含量[47]的高低能反映其免疫力。Varada等[48]研究表明，唾液乳桿菌能夠提高機(jī)體免疫力。本研究中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6能夠顯著提高汶上蘆花雞血清IgG和盲腸sIgA含量，有提高血清IL-6含量的趨勢(shì)，這可能與唾液乳酸桿菌的免疫調(diào)節(jié)、抗炎和抗感染等益生特性有關(guān)[49]。官麗輝等[39]研究表明，與塞北烏骨雞高和低CP水平飼糧相比，中CP水平飼糧可以提高血清IgA、IgM和IgG含量。張恒碩[50]研究表明，不同CP水平對(duì)63周齡京白1號(hào)蛋雞血清IgA、IgM和IgG以及白細(xì)胞介素-4(IL-4)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量均無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)中，16.5%CP水平組汶上蘆花雞血清INF-α含量顯著高于14.5%CP水平組，15.5%和16.5%CP水平組盲腸sIgA含量顯著高于14.5%CP水平組，且隨著飼糧CP水平的降低，血清IgA和IgG含量有降低的趨勢(shì)，這可能與低CP水平飼糧會(huì)降低家禽組織中細(xì)胞因子的表達(dá)量有關(guān)[15]。本研究中，唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)血清IgG和盲腸sIgA含量有顯著影響，Ⅳ組～Ⅵ組血清IgG含量顯著高于Ⅰ組，Ⅳ組和Ⅵ組盲腸sIgA含量顯著高于其他組，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅴ組盲腸sIgA含量顯著高于Ⅰ組，說(shuō)明飼糧中添加唾液乳桿菌SNK-6可降低飼糧CP水平從16.5%降至15.5%對(duì)汶上蘆花雞免疫功能的影響。

3.6 唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平對(duì)汶上蘆花雞腸道組織形態(tài)的影響

小腸絨毛的高度、粗細(xì)以及排列密度代表著該段腸道接觸食糜的多少，與食糜接觸越多，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝入就越充分。隱窩深度與腸上皮細(xì)胞的增殖率成反比，細(xì)胞成熟率上升的表觀即為隱窩深度下降，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率升高。絨毛高度/隱窩深度值則是小腸功能的綜合體現(xiàn)，絨毛高度/隱窩深度值提高說(shuō)明小腸的消化吸收能力增強(qiáng)[51-52]。Sureshkumar等[53]研究表明，飼糧添加唾液乳桿菌對(duì)雞小腸絨毛高度和隱窩深度無(wú)顯著影響。本試驗(yàn)中，飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高汶上蘆花雞空腸和回腸絨毛高度，有提高空腸和回腸絨毛高度/隱窩深度值的趨勢(shì)，這可能與唾液乳桿菌具有改善腸道菌群，產(chǎn)生短鏈脂肪酸等腸道調(diào)節(jié)功能有關(guān)[10]。Yu等[54]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧CP水平降低3～6個(gè)百分點(diǎn)，雖然不影響仔豬的回腸形態(tài)結(jié)構(gòu)，但會(huì)降低十二指腸和空腸絨毛高度以及空腸絨毛高度/隱窩深度值，提高空腸隱窩深度；Almeida等[55]也得出了類似的試驗(yàn)結(jié)論。本試驗(yàn)中，15.5%和16.5%CP水平組十二指腸和空腸絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度值均顯著高于14.5%CP水平組，說(shuō)明降低飼糧CP水平會(huì)降低小腸的消化吸收能力[56]，這可能與飼糧中未補(bǔ)充合成氨基酸有關(guān)。本試驗(yàn)中，唾液乳桿菌SNK-6和飼糧CP水平的互作效應(yīng)對(duì)十二指腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度值有顯著影響，對(duì)空腸絨毛高度有顯著影響，Ⅳ組～Ⅵ組十二指腸絨毛高度顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組，Ⅳ組～Ⅵ組十二指腸絨毛高度/隱窩深度值顯著高于Ⅰ組～Ⅲ組，Ⅲ組十二指腸絨毛高度/隱窩深度值顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組，Ⅳ組和Ⅵ組空腸絨毛高度顯著高于其他組，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅴ組空腸絨毛高度顯著高于Ⅰ組，說(shuō)明飼糧添加唾液乳桿菌SNK-6可降低飼糧CP水平從16.5%降至15.5%對(duì)汶上蘆花雞腸道組織形態(tài)的影響。

4 結(jié) 論

飼糧添加2×108CFU/kg唾液乳桿菌SNK-6可顯著提高40～50周齡汶上蘆花雞蛋殼強(qiáng)度，提高血清Ca、P、IgG和盲腸sIgA含量，改善小腸組織形態(tài)。本試驗(yàn)條件下，通過(guò)在飼糧中添加2×108CFU/kg唾液乳桿菌SNK-6，40～50周齡汶上蘆花雞飼糧CP水平可降低至15.5%。